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H型高血壓大鼠腦損傷免疫機制的研究

發(fā)布時間:2018-04-07 15:42

  本文選題:SHR 切入點:WKY 出處:《天津醫(yī)科大學(xué)》2016年博士論文


【摘要】:研究目的:(1)研究不同種屬、不同干預(yù)方式、不同時間點大鼠體重、血壓以及血漿Hcy水平;(2)檢測不同時間點大鼠血漿細胞因子水平、腦組織相關(guān)基因m RNA、蛋白以及腦組織病理學(xué)檢測;(3)檢測不同時間點WKY-C/M/T及SHR-C/M/T外周血Th17、Treg淋巴細胞比例;(4)觀察大鼠頭顱MRI影像學(xué)改變。研究內(nèi)容與方法:(1)將60只SHR、60只WKY按照隨機分配的原則分為6組,SHR-C組、SHR-M以及SHR-T組,WKY-C組、WKY-M組以及WKY-T組,每組20只,C組給予普通飼料16周、M組給予添加2%蛋氨酸16周、T組給予添加2%蛋氨酸飼料喂養(yǎng)8周,自第9周第1天給予Vit B12 0.09mg/kg/d、葉酸4mg/kg/d、Vit B6 12mg/kg/d灌胃治療,共計16周,并在分別于試驗開始第一天(0周)、第4周、第8周、第12周、第16周測量大鼠的體質(zhì)量,應(yīng)用無創(chuàng)鼠尾測壓法測量大鼠SBP,應(yīng)用ELISA方法檢測大鼠血漿Hcy水平;(2)分別于試驗第8周、第12周、第16周應(yīng)用ELISA法檢測大鼠血漿細胞因子IL-17、IL-10、TGF-β、IL-6水平,于試驗第8周、第12周、第16周應(yīng)用PCR法檢測大鼠腦組織IL-10、IL-17、Foxp3、RORγt m RNA表達,第16周應(yīng)用Western Blot法檢測大鼠腦組織Foxp3、RORγt蛋白表達,于試驗第16周處死大鼠,進行腦組織病理學(xué)觀察;(3)分別于試驗的第0周、第4周、第8周、第12周及第16周應(yīng)用Beckman Cytomics FC 500流式細胞儀對WKY-C/M/T及SHR-C/M/T組大鼠外周血Th17、Treg淋巴細胞進行分析;(4)應(yīng)用Bruker 7.0T高場強小動物核磁共振掃描儀對24周齡WKY-C/M/T及SHR-C/M/T進行頭顱常規(guī)MRI檢測。結(jié)果:(1)試驗16周內(nèi)無論WKY還是SHR,體重都呈現(xiàn)上升趨勢,以WKY-C最為明顯,高蛋氨酸飲食能夠使體重生長減緩,而葉酸和維生素B飲食對高蛋氨酸飲食導(dǎo)致的體重減緩影響不大;SHR-C/M/T 3組大鼠的SBP和血漿Hcy水平明顯高于WKY-C/M/T 3組,蛋氨酸干預(yù)的M組和T組明顯高于正常飲食的C組,經(jīng)過葉酸和Vit B6、Vit B12聯(lián)合治療后的T組低于同時期M組血壓,并且這種差異在第8周之后更加顯著;(2)WKY組的IL-6水平保持不變,并且WKY-C、WKY-M和WKY-T沒有統(tǒng)計學(xué)差異,SHR-C組IL-6水平持續(xù)上升,SHR-T組的IL-6水平持續(xù)下降,第12周,SHR-M組顯著高于SHR-T組,第16周,SHR-M組顯著高于SHR-C組和SHR-T組,第12和16周SHR組和WKY組的IL-6水平存在統(tǒng)計學(xué)差異。WKY-M組的IL-17水平持續(xù)上升,在第16周顯著高于WKY-C組和WKY-T組,SHR-C組和SHR-M組IL-17水平呈上升趨勢,SHR-M組上升更快,SHR-T組先稍微上升后下降,在12周達到最高水平47.55 pg/ml。WKY-C、SHR-C組IL-10基本保持不變,WKY-M、SHR-M組IL-10持續(xù)下降,且SHR組下降較迅速;WKY-T、SHR-T組IL-10不斷上升,且SHR組上升較快,在第16周,WKY-M、SHR-M IL-10均低于同種屬C組和T組,且這種差異SHR組更明顯。8-16周,WKY-C組和SHR-C組血清中TGF-β保持不變,WKY-M組和SHR-M組TGF-β緩慢下降,WKY-T組和SHR-T組TGF-β緩慢上升,在第16周,無論大鼠WKY組還是高血壓大鼠SHR組,M組TGF-β都顯著低于C組和T組。WKY-C組和SHR-C組RORγt m RNA水平基本保持不變,WKY-M組和SHR-M組RORγt m RNA水平持續(xù)上升,SHR組-M上升較迅速,WKY-T組和SHR-T組RORγt m RNA不斷下降,SHR-T組下降較快;WKY-C組和SHR-C組IL-17 m RNA水平基本保持不變,WKY-M組和SHR-M組IL-17 m RNA水平持續(xù)上升,SHR-M組上升較迅速,WKY-T組和SHR-T組IL-17 m RNA不斷下降,12周之后下降速度減緩,SHR-T組下降較快;WKY-C組、SHR-C組、WKY-M組和SHR-M組Foxp3 m RNA水平基本保持不變,WKY-T組Foxp3 m RNA水平持續(xù)上升,SHR-T組Foxp3的m RNA水平先迅速上升后下降,第12周達到峰值。WKY-C組、WKY-M組、WKY-T組、SHR-C組和SHR-M組IL-10m RNA水平基本不變,SHR-T組先迅速上升后迅速下降,第12周達到峰值,且顯著高于SHR-C組和SHR-T組。WKY和SHR腦組織中,RORγt在C組和T組水平較高,M組表達較低,Foxp3的表達情況恰恰相反,在C組和T組水平較低,M組表達較高。病理組織染色顯示,WKY-M組Th17陽性細胞遠遠高于對WKY-C組,經(jīng)過葉酸和維生素B治療后WKY-T組Th17陽性細胞減少,與WKY-C組基本持平,WKY-M組Treg陽性細胞遠遠低于對照組WKY-C組,經(jīng)過葉酸和維生素B治療后WKY-T組Treg陽性細胞增多,但是仍然少于WKY-C組;SHR組Th17細胞和Treg細胞變化趨勢WKY相似,WKY-M組和SHR-M組部分區(qū)域血管輕度增生,SHR-M組部分區(qū)域神經(jīng)細胞增多,WKY-M組部分區(qū)域神經(jīng)細胞減少甚至萎縮。結(jié)論Hcy的致病作用在m RNA水平、蛋白水平、血漿水平、組織水平均得到證實,且經(jīng)葉酸、VB族治療后,其致病作用呈現(xiàn)出減弱趨勢;(3)0周到第16周,WKY-C及SHR-C組Tregs細胞逐漸升高,WKY-M及SHR-M組Tregs細胞例逐漸下降,WKY-T及SHR-T組Tregs細胞出現(xiàn)先降低后升高趨勢(第8周為轉(zhuǎn)折點);而WKY-C及SHR-C組Th17細胞逐漸降低,WKY-M及SHR-M組Th17細胞逐漸升高,WKY-T及SHR-T組Th17細胞呈現(xiàn)出先升高后降低趨勢;(4)6組共計24只24周齡大鼠均未出現(xiàn)明顯缺血性腦病表現(xiàn)。結(jié)論:(1)高蛋氨酸飲食可以成功造成大鼠血漿Hcy水平升高,以SHR升高為著,同時HHcy可以造成不同中屬于大鼠血壓升高,經(jīng)葉酸和Vit B6、Vit B12聯(lián)合治療后可降低血漿Hcy水平同時起到降低血壓的作用;(2)Hcy的致病作用在m RNA水平、蛋白水平、血漿水平、組織水平均得到證實,且經(jīng)葉酸、VB族治療后,其致病作用呈現(xiàn)出減弱趨勢;(3)高蛋氨酸可造成大鼠外周血Tregs細胞比例下降,Th17細胞比例升高,經(jīng)葉酸、Vit B6及Vit B12聯(lián)合治療干預(yù)后,Hcy的作用減弱,是Tregs細胞比例升高、Th17細胞比例下降;(4)24周齡WKY/SHR大鼠并未出現(xiàn)缺血性腦血管病表現(xiàn),考慮與大鼠種屬、年齡及造模方法有關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】:天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】:博士
【學(xué)位授予年份】:2016
【分類號】:R544.1

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2 祝~=驤;iJ梊霞;洃克琴;崔素英;文允摪;,

本文編號:1719816


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