本文選題：動脈粥樣硬化　切入點：血管新生　出處：《河北醫(yī)科大學(xué)》2015年博士論文

【摘要】：目的:本研究以脈絡(luò)學(xué)說營衛(wèi)“由絡(luò)以通、交會生化”理論為指導(dǎo),通過高脂飲食喂養(yǎng)聯(lián)合頸動脈套管置入術(shù)的方法,建立AS早期頸動脈損傷的復(fù)合兔模型,通過觀察管壁微血管新生和神經(jīng)內(nèi)分泌、氧化應(yīng)激相關(guān)因子表達(dá),探討頸動脈管壁微血管新生在AS早期的作用及通絡(luò)藥物的干預(yù)效果,不僅為營衛(wèi)“由絡(luò)以通,交會生化”理論在血管病變中的應(yīng)用提供研究模型與實驗數(shù)據(jù),而且有助于闡明AS“由外而內(nèi)”的發(fā)病途徑,對開辟AS早期的有效防治新途徑具有重要意義。方法：1高脂聯(lián)合頸動脈套管置入術(shù)建立AS早期管壁微血管新生模型及通絡(luò)藥物干預(yù)作用采用高脂飲食喂養(yǎng)聯(lián)合頸動脈套管置入術(shù)的方法建立右頸動脈管壁微血管新生的新西蘭兔模型,觀察頸動脈組織病理形態(tài)學(xué)變化和動脈管壁微血管新生情況,探討頸動脈管壁微血管新生在AS早期的作用及通絡(luò)藥物的干預(yù)效果。將120只普通級新西蘭白兔隨機(jī)分為正常組和模型組,及通心絡(luò)高、中、低劑量組、阿托伐他汀組、LY294002組(PI3K/AKT抑制劑組)和PD98059組(MEK/ERK抑制劑組),共8個組,每組15只,實驗周期4周。以濃度25%Pluronic#174;F-127凝膠液為載體,制做含有PI3K、MEK抑制劑的緩釋凝膠,終濃度為200μmol/L。將含抑制劑的緩釋凝膠經(jīng)導(dǎo)管注入到硅膠管中,包裹于頸動脈,經(jīng)血管外膜局部給藥,局部用藥量為每兔0.5ml 200μmol/L的緩釋凝膠抑制劑。正常組全程給予普通飼料喂養(yǎng),其余各組于術(shù)后次日開始給予高脂飼料喂養(yǎng),每兔每日限量120 g左右,同時給予藥物干預(yù)治療。通心絡(luò)高、中、低劑量組分別給予通心絡(luò)超微粉0.60 g/(kg·d)、0.30 g/(kg·d)、0.15 g/(kg·d),阿托伐他汀組給予阿托伐他汀2.50 mg/(kg·d)。檢測血清血脂水平,反映脂質(zhì)代謝情況;HE染色觀察血管病理形態(tài)學(xué)變化;Masson染色觀察動脈管壁血管平滑肌的增生情況及膠原纖維生成情況;油紅O染色觀察腹主動脈內(nèi)膜脂質(zhì)沉積情況;CD31、VEGF免疫組化染色反映頸動脈管壁微血管新生的程度;彩色微球法檢測管壁微血管內(nèi)的血流量改變,反映微血管功能障礙的發(fā)生。2頸動脈管壁微血管新生的神經(jīng)內(nèi)分泌機(jī)制及通絡(luò)藥物干預(yù)作用本部分在第一部分模型建立成功基礎(chǔ)上,觀察兔頸動脈管壁微血管新生的神經(jīng)內(nèi)分泌機(jī)制及通心絡(luò)干預(yù)效果。將90只普通級新西蘭白兔隨機(jī)分為正常組和模型組及通心絡(luò)高、中、低劑量組和阿托伐他汀組,共6個組,每組15只。造模方法及藥物給藥量同上。檢測血漿NE、Ach水平;免疫熒光技術(shù)對頸動脈管壁TH、Ach E、NGF、NPY的定位和表達(dá);Western Blotting技術(shù)測定頸動脈組織中α1-腎上腺素能受體(α1-AR)與α7-煙堿乙酰膽堿受體(α7n Ach R)蛋白表達(dá)水平。3頸動脈管壁微血管新生的氧化應(yīng)激機(jī)制及通絡(luò)藥物干預(yù)作用本部分進(jìn)一步探討頸動脈管壁微血管新生的氧化應(yīng)激機(jī)制及通心絡(luò)的干預(yù)效果。將120只普通級新西蘭白兔隨機(jī)分為正常組和模型組,及通心絡(luò)高、中、低劑量組、阿托伐他汀組、LY294002組和PD98059組,共8個組,每組15只,實驗周期4周。以濃度25%Pluronic#174;F-127凝膠液為載體,制做含有PI3K、MEK抑制劑的緩釋凝膠,終濃度為200μmol/L。將含抑制劑的緩釋凝膠通過導(dǎo)管注入到硅膠管中,包裹于頸動脈,經(jīng)血管外膜局部給藥,局部用藥量為每兔0.5 ml 200μmol/L的緩釋凝膠抑制劑。其它藥物的給藥量同上。實驗結(jié)束,檢測血清MDA、SOD、T-AOC、CAT與GSH-px生化指標(biāo);應(yīng)用熒光原位雜交和逆轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)對頸動脈組織中NADPH亞單位p22phox m RNA、gp91phox m RNA進(jìn)行定位和半定量檢測;DHE熒光探針檢測頸動脈管壁ROS生成;Western Blotting技術(shù)檢測頸動脈管壁中ROS敏感的PI3K/AKT及ERK通路蛋白及血管新生相關(guān)因子VEGF-A/VEGFR-2蛋白表達(dá)水平;免疫組化技術(shù)觀察頸動脈管壁CD31標(biāo)記的微血管密度變化及p-AKT、p-ERK蛋白的定位表達(dá)。結(jié)果： 1高脂聯(lián)合頸動脈套管置入術(shù)建立AS早期動脈管壁微血管新生模型及通絡(luò)藥物干預(yù)作用1.1各組動物血脂水平變化與正常組比較,模型組血清TC、TG、LDL-C、HDL-C水平均顯著升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);LY294002組和PD98059組TC、TG、LDL-C、HDL-C水平與模型組比較均無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05);通心絡(luò)高、中劑量組和阿托伐他汀組血清TC、TG、LDL-C水平均明顯低于模型組(P0.05,P0.01),通心絡(luò)高劑量組和阿托伐他汀組HDL-C水平顯著高于模型組(P0.01);通心絡(luò)高、中劑量組與阿托伐他汀組組間比較,TC、TG、LDL-C、HDL-C水平均無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。1.2腹主動脈油紅O染色正常組腹主動脈大體觀察呈乳白色,內(nèi)膜平整光滑,未出現(xiàn)脂質(zhì)沉積。模型組、LY294002組和PD98059組腹主動脈內(nèi)膜出現(xiàn)多病灶、散在的脂質(zhì)沉積,脂質(zhì)成分呈紅色,呈斑點或長短不一的條紋,即脂紋或脂斑形成,為AS早期病變。通心絡(luò)高、中、低劑量組及阿托伐他汀組不同程度減少腹主動脈內(nèi)膜的脂質(zhì)沉積,以通心絡(luò)高劑量組和阿托伐他汀組脂質(zhì)沉積較模型組明顯減少。1.3頸動脈組織Masson染色正常組頸動脈組織各層結(jié)構(gòu)清晰,內(nèi)膜平整光滑,中膜平滑肌細(xì)胞排列整齊。模型組血管內(nèi)膜明顯增厚,平滑肌細(xì)胞遷移,膠原纖維大量沉積,中膜平滑肌細(xì)胞增多,排列紊亂。通心絡(luò)高、中劑量組和阿托伐他汀組、LY294002組和PD98059組較模型組內(nèi)膜增生不明顯,少量膠原纖維沉積,無明顯平滑肌細(xì)胞遷移,中膜平滑肌細(xì)胞少量增生,排列較整齊。1.4頸動脈組織HE染色頸動脈以內(nèi)、外彈力膜為界,從管腔向外依次為內(nèi)膜、中膜和外膜。正常組內(nèi)膜光滑,內(nèi)彈力膜呈波浪狀,單層內(nèi)皮細(xì)胞完整連續(xù),中膜平滑肌細(xì)胞走行清晰,外膜結(jié)締組織,可見少量微血管、成纖維細(xì)胞和神經(jīng)末梢。模型組,新生內(nèi)膜形成,內(nèi)彈力膜連續(xù)性中斷,平滑肌細(xì)胞增殖明顯,走形紊亂,部分彈力纖維斷裂或消失,中膜間隙明顯增寬,外膜結(jié)締組織增生,炎細(xì)胞浸潤,微血管數(shù)目增多。與模型組相比,通心絡(luò)高、中、低三個劑量組和阿托伐他汀組、LY294002組和PD98059組內(nèi)膜增生不同程度減輕,中膜平滑肌走形較清晰,外膜結(jié)締組織增生較不明顯,微血管數(shù)量不同程度減少,炎細(xì)胞浸潤減輕。1.5頸動脈管壁CD31和VEGF免疫組化染色VEGF陽性物為棕黃色顆粒狀,主要位于細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞外間質(zhì)中。正常組內(nèi)膜、中膜及外膜均可見VEGF少量陽性表達(dá)。模型組血管各層VEGF陽性表達(dá)明顯增多,外膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞及周邊部位表達(dá)陽性,外膜部分成纖維細(xì)胞表達(dá)也呈陽性。通心絡(luò)和阿托伐他汀干預(yù)后,外膜VEGF陽性表達(dá)不同程度上減少。以VEGF陽性表達(dá)率作為評判指標(biāo):模型組外膜VEGF陽性表達(dá)率顯著高于正常組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。與模型組比較,通心絡(luò)高、中劑量組和阿托伐他汀干預(yù)后,外膜VEGF陽性表達(dá)率明顯降低(P0.05,P0.01),以通心絡(luò)高劑量組降低最為顯著,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01),通心絡(luò)高、中劑量組和阿托伐他汀組組間比較均無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),LY294002組、PD98059組外膜VEGF陽性表達(dá)率較阿托伐他汀組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。正常組頸動脈可見CD31標(biāo)記的少量微血管,位于血管外膜。模型組外膜微血管數(shù)量明顯增多,中膜未見CD31標(biāo)記的微血管。與模型組相比,通心絡(luò)各劑量組和阿托伐他汀組及LY294002組和PD98059組外膜微血管數(shù)量不同程度減少,以通心絡(luò)高、中劑量組、阿托伐他汀組、LY294002組和PD98059組外膜微血管數(shù)量減少較為明顯。管壁微血管密度定量分析顯示,模型組MVD陽性標(biāo)記指數(shù)較正常組顯著升高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01),通心絡(luò)高、中劑量組和阿托伐他汀組MVD陽性標(biāo)記指數(shù)較模型組顯著降低,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01),通心絡(luò)高劑量組較阿托伐他汀組MVD陽性標(biāo)記指數(shù)降低明顯,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),LY294002組、PD98059組MVD陽性標(biāo)記指數(shù)較阿托伐他汀組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。1.6頸動脈管壁微血管血流量(MBF)的變化模型組頸動脈管壁血流量MBF較正常組顯著升高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。與模型組比較,通心絡(luò)各劑量組和阿托伐他汀組MBF不同程度降低,以通心絡(luò)高、中劑量組和阿托伐他汀組降低明顯,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05,P0.01),通心絡(luò)組高劑量組MBF較阿托伐他汀組顯著降低,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01),LY294002組與阿托伐他汀組比較差異明顯,具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),PD98059組較阿托伐他汀組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。2頸動脈管壁微血管新生的神經(jīng)內(nèi)分泌機(jī)制及通絡(luò)藥物干預(yù)作用2.1各組實驗兔血漿NE、Ach水平Elisa檢測實驗兔血漿NE、Ach含量,結(jié)果分析顯示各組血漿NE、Ach含量組間比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。2.2免疫熒光檢測動脈管壁TH、Ach E的定位免疫熒光顯示,在正常頸動脈內(nèi)膜和中膜—外膜交界區(qū)域分布有TH標(biāo)記的去甲腎上腺素能神經(jīng),Ach E標(biāo)記的膽堿能神經(jīng)則主要分布在中膜/外膜區(qū)域。模型組表現(xiàn)為中膜—外膜交界區(qū)域分布的去甲腎上腺素能神經(jīng)消失,但在外膜微血管周圍去甲腎上腺素能神經(jīng)明顯增生,在外膜區(qū)域去甲腎上腺素能神經(jīng)較膽堿能神經(jīng)再生明顯。通心絡(luò)各劑量組可不同程度抑制動脈管壁的神經(jīng)重構(gòu),減少中膜—外膜交界區(qū)域分布的去甲腎上腺素能神經(jīng)去支配,抑制外膜微血管周圍去甲腎上腺素能神經(jīng)再生。2.3免疫熒光檢測動脈管壁NGF、NPY的表達(dá)NGF、NPY免疫熒光顯示,正常頸動脈管壁各層基本無NGF表達(dá),NPY表達(dá)在中膜—外膜交界區(qū)域。模型組NGF、NPY在外膜區(qū)域微血管周圍表達(dá)明顯增強(qiáng),但NPY在中膜—外膜交界區(qū)域表達(dá)明顯減少,通心絡(luò)各劑量組可不同程度降低NGF、NPY在外膜區(qū)域的陽性表達(dá),增加NPY在中膜—外膜交界區(qū)域的表達(dá)。2.4頸動脈組織α1-AR與α7n Ach R的蛋白表達(dá)正常組有少量α1-AR、α7n Ach R蛋白表達(dá),模型組α1-AR、α7n Ach R蛋白表達(dá)明顯增多,通心絡(luò)高、中、低劑量組、阿托伐他汀組α1-AR、α7n Ach R蛋白表達(dá)不同程度下調(diào)�；叶确治鲲@示,與正常組比較,模型組α1-AR、α7n Ach R顯著升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01),與模型組比較,通心絡(luò)高、中劑量組、阿托伐他汀組α1-AR、α7n Ach R顯著降低,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);與阿托伐他汀組比較,通心絡(luò)高劑量組α1-AR、α7n Ach R降低明顯,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。3頸動脈管壁微血管新生的氧化應(yīng)激機(jī)制及通絡(luò)藥物干預(yù)作用3.1血清MDA、SOD、T-AOC、CAT與GSH-px水平變化與正常組比較,模型組血清SOD、CAT、T-AOC、GSH-px活性顯著下降,MDA含量顯著升高,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。與模型組比較,通心絡(luò)高、中劑量組及阿托伐他汀組血清SOD、GSH-px、CAT、T-AOC活性明顯升高,MDA含量明顯降低,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05,P0.01),通心絡(luò)高、中劑量組SOD、CAT、T-AOC、GSH-px活性及MDA含量與阿托伐他汀組組間比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。3.2 ROS在頸動脈管壁的分布與外膜定量比較正常組頸動脈內(nèi)膜、中膜及外膜均存在低水平ROS,模型組外膜ROS生成明顯增多,在微血管及鄰近部位表達(dá)明顯,通心絡(luò)高、中劑量組和阿托伐他汀組較模型組外膜ROS生成明顯減少。熒光強(qiáng)度定量分析顯示,模型組外膜ROS水平較正常組顯著增強(qiáng),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01),LY294002組、PD98059組及通心絡(luò)低劑量組外膜ROS水平較模型組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),通心絡(luò)高、中劑量組和阿托伐他汀組外膜ROS水平較模型組顯著減低,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01),與阿托伐他汀組比較,通心絡(luò)高劑量組外膜ROS水平明顯減低,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。3.3頸動脈管壁微血管密度MVD與外膜ROS水平的相關(guān)分析對管壁微血管密度MVD與外膜ROS水平進(jìn)行Spearman相關(guān)分析,統(tǒng)計結(jié)果顯示管壁微血管密度MVD與外膜ROS水平呈顯著正相關(guān)(r=0.893,P0.01)。3.4頸動脈管壁NADPH氧化酶亞基p22phox和gp91phox的定位與定量表達(dá)原位雜交結(jié)果顯示,正常組頸動脈組織p22phox基因雜交信號表達(dá)極少,僅限于血管外膜,gp91phox基因雜交信號分布在血管內(nèi)膜和外膜,以外膜表達(dá)為主,在血管外膜gp91phox基因雜交信號較p22phox分布密集。模型組血管p22phox和gp91phox基因雜交信號表達(dá)呈強(qiáng)陽性,主要分布在新生內(nèi)膜和外膜微血管及鄰近部位。LY294002組、PD98059組和通心絡(luò)低劑量組p22phox和gp91phox基因陽性信號分布及表達(dá)較模型組未見明顯變化。通心絡(luò)高、中劑量組和阿托伐他汀組p22phox和gp91phox陽性雜交信號在外膜表達(dá)不同程度減弱。為了評估ROS來源的NADPH氧化酶的作用,采用逆轉(zhuǎn)錄RT-PCR檢測了頸動脈管壁的p22phox和gp91phox的m RNA表達(dá)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)模型組p22phox和gp91phox m RNA表達(dá)水平顯著高于正常組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。LY294002組、PD98059組及通心絡(luò)低劑量組p22phox和gp91phox m RNA表達(dá)水平較模型組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。與模型組相比,通心絡(luò)高、中劑量組和阿托伐他汀組p22phox m RNA和gp91phox m RNA表達(dá)水平顯著降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01),通心絡(luò)高劑量組p22phox m RNA和gp91phox m RNA表達(dá)水平較阿托伐他汀組明顯降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。3.5頸動脈管壁PI3K/AKT和ERK及VEGF-A/VEGFR-2通路相關(guān)蛋白表達(dá)各組PI3K蛋白相對表達(dá)量組間比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。p-PI3K蛋白相對表達(dá)量:與正常組比較,模型組p-PI3K蛋白相對表達(dá)量顯著增高(P0.01);與模型組比較,通心絡(luò)高、中劑量組、阿托伐他汀組、LY294002組p-PI3K蛋白相對表達(dá)量顯著降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);與阿托伐他汀組比較,通心絡(luò)高劑量組和LY294002組p-PI3K蛋白相對表達(dá)量顯著降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。p-PI3K/PI3K水平:與正常組比較,模型組p-PI3K/PI3K水平顯著增高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);與模型組比較,通心絡(luò)高、中劑量組、阿托伐他汀組和LY294002組p-PI3K/PI3K水平顯著降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05,P0.01);與阿托伐他汀組比較,通心絡(luò)高劑量組和LY294002組p-PI3K/PI3K水平明顯降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05,P0.01)。各組AKT蛋白相對表達(dá)量組間比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。p-AKT蛋白相對表達(dá)量:與正常組比較,模型組p-AKT蛋白相對表達(dá)量顯著增高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);與模型組比較,通心絡(luò)高、中劑量組、阿托伐他汀組、LY294002組p-AKT蛋白相對表達(dá)量顯著降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);與阿托伐他汀組比較,通心絡(luò)高劑量組和LY294002組p-AKT蛋白相對表達(dá)量降低顯著,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。p-AKT/AKT水平:與正常組比較,模型組p-AKT/AKT水平顯著增高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);與模型組比較,通心絡(luò)高、中劑量組、阿托伐他汀組、LY294002組p-AKT/AK水平顯著降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);與阿托伐他汀組比較,通心絡(luò)高劑量組和LY294002組p-AKT/AKT水平明顯降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05,P0.01)。各組MEK蛋白相對表達(dá)量組間比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。p-MEK蛋白相對表達(dá)量:與正常組比較,模型組p-MEK蛋白相對表達(dá)量顯著增高(P0.01),差異有統(tǒng)計學(xué)意義;與模型組比較,通心絡(luò)高、中劑量組、PD98059組p-MEK蛋白相對表達(dá)量降低顯著,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01),阿托伐他汀組p-MEK蛋白相對表達(dá)量明顯降低(P0.05);與阿托伐他汀組比較,通心絡(luò)高劑量組和PD98059組p-MEK蛋白相對表達(dá)量顯著降低(P0.05)。p-MEK/MEK:與正常組比較,模型組p-MEK/MEK水平顯著增高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);與模型組比較,通心絡(luò)高、中、劑量組、PD98059組p-MEK/MEK水平顯著降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05,P0.01);與阿托伐他汀組比較,通心絡(luò)高劑量組和PD98059組p-MEK/MEK水平明顯降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05,P0.01)。各組ERK蛋白相對表達(dá)量組間比較無統(tǒng)計學(xué)差異。p-ERK蛋白相對表達(dá)量:與正常組比較,模型組p-ERK蛋白相對表達(dá)量顯著增高(P0.01);與模型組比較,通心絡(luò)低、中劑量組和他汀組p-ERK蛋白相對表達(dá)量有一定程度的降低,但無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。通心絡(luò)高劑量組、PD98059組p-ERK蛋白相對表達(dá)量顯著減低(P0.01);與阿托伐他汀組比較,通心絡(luò)高劑量組和PD98059組p-ERK蛋白相對表達(dá)量明顯降低(P0.05)。p-ERK/ERK水平:與正常組比較,模型組p-ERK/ERK水平顯著增高(P0.01);與模型組比較,通心絡(luò)中、高劑量組、PD98059組p-ERK/ERK明顯降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05,P0.01);與阿托伐他汀組比較,通心絡(luò)高劑量組和PD98059組p-ERK/ERK水平降低明顯,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05,P0.01)。VEGF-A和VEGFR-2蛋白相對表達(dá)量:與正常組比較,模型組VEGF-A和VEGFR-2蛋白相對表達(dá)量顯著增高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);與模型組比較,通心絡(luò)高、中劑量組、阿托伐他汀組、LY294002組和PD98059組VEGFR-A顯著降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01),通心絡(luò)中劑量組、LY294002組和PD98059組VEGFR-2降低明顯,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),通心絡(luò)高劑量組和阿托伐他汀組VEGFR-2降低顯著,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);與阿托伐他汀組比較,通心絡(luò)高劑量組、LY294002組降低明顯,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05,P0.01)。3.6免疫組化染色檢測頸動脈管壁p-AKT、p-ERK的定位表達(dá)p-AKT陽性物為棕黃色顆粒狀,主要位于細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)中。正常組頸動脈組織內(nèi)膜、中膜及外膜均可見p-AKT陽性表達(dá),在外膜p-AKT僅少量表達(dá),模型組外膜p-AKT呈強(qiáng)陽性表達(dá),微血管內(nèi)皮細(xì)胞及部分成纖維細(xì)胞表達(dá)呈陽性;通心絡(luò)高、中劑量組、阿托伐他汀組、LY294002組外膜p-AKT陽性表達(dá)較模型組明顯減弱。p-ERK陽性物為棕黃色顆粒狀,主要位于細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)中。正常組頸動脈內(nèi)膜、中膜及外膜p-ERK僅少量陽性表達(dá);模型組p-ERK在血管外膜呈強(qiáng)陽性表達(dá),微血管內(nèi)皮細(xì)胞及部分成纖維細(xì)胞表達(dá)呈陽性,通心絡(luò)高、中劑量組、阿托伐他汀組和PD98059組,外膜p-ERK陽性表達(dá)較模型組明顯減弱。結(jié)論： 1本研究以脈絡(luò)學(xué)說為指導(dǎo),基于孫絡(luò)與微血管在解剖形態(tài)學(xué)上的同一性,指出了動脈管壁“孫絡(luò)—微血管”是營氣(血管內(nèi)皮)與衛(wèi)氣(血管外膜及神經(jīng)—內(nèi)分泌—免疫網(wǎng)絡(luò))“由絡(luò)以通,交會生化”重要場所。營衛(wèi)“由絡(luò)以通,交會生化”功能障礙導(dǎo)致的管壁微血管新生是AS發(fā)病的重要病理因素,通過抑制“孫絡(luò)—微血管”新生能夠延緩或減輕AS早期的血管病變。通過高脂喂養(yǎng)聯(lián)合頸動脈套管置入術(shù)建立頸動脈損傷的復(fù)合動物模型,可見管壁微血管病理性新生,新生內(nèi)膜形成,加用抑制劑抑制管壁微血管新生,內(nèi)膜增生減輕,從而證實管壁微血管新生促進(jìn)了AS早期血管病變的發(fā)生發(fā)展。本實驗為上述理論學(xué)說提供了實驗依據(jù),為AS早期防治尋找到有效的治療策略和干預(yù)藥物。2頸動脈管壁的神經(jīng)內(nèi)分泌失衡參與AS早期管壁微血管新生。在AS早期,動脈管壁發(fā)生神經(jīng)重構(gòu),即在于中膜—外膜交界區(qū)域的去甲腎上腺素能神經(jīng)一定程度上消失,但外膜區(qū)域去甲腎上腺素能神經(jīng)再生,以血管外膜局部去甲腎上腺素能神經(jīng)較膽堿能神經(jīng)占相對優(yōu)勢。在微血管新生過程中,頸動脈管壁的神經(jīng)內(nèi)分泌調(diào)節(jié)失衡,表現(xiàn)為外膜NGF、NPY及頸動脈管壁α1-AR、α7n Ach R蛋白表達(dá)明顯增加。3外膜氧化應(yīng)激是促進(jìn)AS早期管壁微血管新生的重要機(jī)制。隨著管壁p22phox和gp91phox基因表達(dá)明顯升高,外膜ROS生成明顯增多,VEGF-A、VEGFR-2蛋白表達(dá)上調(diào),管壁微血管新生顯著增加。外膜局部使用阻斷劑后,明顯抑制了PI3K/Akt及ERK通路的激活,同時下調(diào)VEGF-A、VEGF-R2蛋白表達(dá),有效減少了微血管新生,說明PI3K/Akt與ERK是氧化應(yīng)激調(diào)節(jié)管壁微血管新生的重要信號通路。4通心絡(luò)有效抑制AS早期管壁微血管新生,減輕了血管內(nèi)膜增生,其中通心絡(luò)中劑量與阿托伐他汀療效相當(dāng),而通心絡(luò)高劑量效果明顯優(yōu)于阿托伐他汀,其機(jī)制與調(diào)節(jié)管壁神經(jīng)內(nèi)分泌的失衡,降低外膜氧化應(yīng)激水平有關(guān)。通心絡(luò)抑制管壁的神經(jīng)重構(gòu),下調(diào)外膜局部NGF、NPY和管壁α1-AR、α7n Ach R蛋白表達(dá);減少管壁p22phox、gp91phox基因表達(dá)和外膜ROS生成,抑制下游PI3K/Akt、ERK通路激活,下調(diào)VEGF-A、VEGFR-2蛋白表達(dá),從而抑制管壁微血管新生。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R543.5

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本文編號：1688143