本文選題：人參皂甙Rb1　切入點：M2巨噬細(xì)胞　出處：《青島大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：背景:動脈粥樣硬化(AS)是一種發(fā)生在動脈管壁的慢性炎癥性疾病。炎癥反應(yīng)增加了斑塊的面積及其復(fù)雜性。平滑肌細(xì)胞、巨噬細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞參與斑塊的炎癥反應(yīng),其中巨噬細(xì)胞在動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。巨噬細(xì)胞是一種可塑性很強(qiáng)的細(xì)胞,在不同的微環(huán)境的刺激下,巨噬細(xì)胞可以分成兩種表型:干擾素-?(IFN-?)或者脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的細(xì)胞命名為M1;IL-13或者IL-4誘導(dǎo)的細(xì)胞命名為M2。這兩種巨噬細(xì)胞分別通過分泌促炎和抗炎細(xì)胞因子在炎癥反應(yīng)中發(fā)揮不同作用。M1是有效的防御細(xì)胞,能夠殺死微生物,產(chǎn)生促炎細(xì)胞因子,比如TNF-α、IL-6和IL-1β。相反,M2產(chǎn)生抗炎細(xì)胞因子,緩解炎癥反應(yīng),促進(jìn)了血管再生和組織修復(fù),如IL-10,TGF-β。最近的研究證明M2巨噬細(xì)胞在動脈粥樣硬化中可能發(fā)揮保護(hù)作用。在Apo E-/-小鼠早期斑塊中有更多M2巨噬細(xì)胞,然而在晚期斑塊中有更多M1巨噬細(xì)胞。最近的研究已經(jīng)證明巨噬細(xì)胞表型決定斑塊的結(jié)局。人參皂甙Rb1是人參的活性成分,人參是一種在東亞地區(qū)被廣泛應(yīng)用的草本植物。許多研究已經(jīng)證實了它強(qiáng)大的藥理學(xué)作用,包括抗癌、抗炎、降脂、抗肥胖及抗缺血再灌注損傷和內(nèi)皮細(xì)胞凋亡。Rb1也已經(jīng)被證實有強(qiáng)大的抗炎效應(yīng)及降低高脂喂養(yǎng)肥胖小鼠的促炎細(xì)胞因子水平。考慮到巨噬細(xì)胞在炎癥反應(yīng)中的作用,我們假設(shè)Rb1可能通過影響巨噬細(xì)胞極化增加動脈粥樣硬化斑塊的穩(wěn)定性及降低炎癥反應(yīng)。目的:1.觀察Rb1對動脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性的作用。2.探討Rb1是否通過影響巨噬細(xì)胞極化進(jìn)而改善動脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性及其可能機(jī)制。方法:1.分離腹腔巨噬細(xì)胞C57BL/6小鼠(8-10周齡)腹腔注射1 m L 3%巰基乙酸肉湯。3天后,用冷的PBS沖洗小鼠腹腔收集巨噬細(xì)胞。800 rpm離心5分鐘后,去掉PBS,用1640 RPMI培養(yǎng)基(含10%FBS和1%雙抗)重懸細(xì)胞。種板,3 h后用PBS沖洗去除非貼壁細(xì)胞。2.細(xì)胞培養(yǎng)RAW264.7細(xì)胞系用含有10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng),放于37°C含有5%CO2的孵箱中。RAW264.7細(xì)胞系被分為六組:control,LPS,LPS+Rb1(10μM,20μM,40μM,80μM)。3.蛋白質(zhì)印跡法檢測i NOS,Arg1,p-stat6和stat6蛋白表達(dá)水平。4.流式細(xì)胞術(shù)RAW264.7被清洗、封閉,用APC結(jié)合的抗鼠的CD206抗體孵育。流式細(xì)胞儀(BD Biosciences)收集細(xì)胞,結(jié)果用Flow Jo(Tree Star,Inc.)分析。5.細(xì)胞因子的檢測細(xì)胞上清的MMP-9、IL-10、IL-4和IL-13水平用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定。6.主動脈染色用油紅O染色觀察脂質(zhì)含量,用天狼猩紅染色觀察膠原含量,用MOMA-2抗體染斑塊巨噬細(xì)胞,用α-SMA抗體染斑塊平滑肌。為評估斑塊平滑肌穩(wěn)定性,我們用斑塊穩(wěn)定性指數(shù):(膠原含量+平滑肌含量)/(油紅O染色面積+巨噬細(xì)胞含量)。結(jié)果1.與LPS組相比,Rb1劑量依賴性的抑制i NOS(M1標(biāo)記物)的表達(dá),同時20和40μM Rb1增加Arg-1(M2標(biāo)記物)的表達(dá)。另外,通過流式細(xì)胞學(xué)分析Rb1組CD206+細(xì)胞數(shù)目百分比明顯高于LPS組。Rb1抑制促炎細(xì)胞因子MMP-9的分泌,促進(jìn)抗炎細(xì)胞因子IL-10的分泌。2.Rb1處理細(xì)胞24 h后,細(xì)胞上清的IL-4和IL-13水平明顯升高。IL-4和IL-13的中和抗體能夠部分減弱Rb1對M2的極化效應(yīng)。3.用20μM Rb1處理細(xì)胞后,p-STAT6較LPS組有明顯增加。STAT6的抑制劑(leflunomide)能夠明顯抑制Rb1誘導(dǎo)的M2極化效應(yīng)。4.Rb1處理小鼠7周后,斑塊脂質(zhì)和巨噬細(xì)胞的含量明顯降低,膠原和平滑肌的含量明顯增加。同時計算Rb1組斑塊穩(wěn)定性增加,斑塊內(nèi)MMP-9表達(dá)減少。5.Rb1組斑塊MOMA-2+i NOS+雙陽性細(xì)胞數(shù)目降低,MOMA-2+Arg-1+雙陽性細(xì)胞數(shù)目增加。結(jié)論:1.Rb1通過促進(jìn)IL-4/IL-13的分泌誘導(dǎo)M2巨噬細(xì)胞極化。2.STAT6在Rb1誘導(dǎo)M2巨噬細(xì)胞極化過程中發(fā)揮重要作用。3.Rb1通過誘導(dǎo)M2巨噬細(xì)胞極化增加動脈粥樣硬化斑塊的穩(wěn)定性。
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【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R543.5

【參考文獻(xiàn)】

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1 Song Junmin;Liu Hongxiang;Li Zhen;Yang Chao;Wang Chaojie;;Ginsenoside Rg3 inhibits colon cancer cell migration by suppressing nuclear factor kappa B activity[J];Journal of Traditional Chinese Medicine;2015年04期

2 Hai-tao YU;Juan ZHEN;Bo PANG;Jin-ning GU;Sui-sheng WU;;人參皂苷Rg1對糖尿病大鼠心肌氧化應(yīng)激及細(xì)胞凋亡的影響（英文）[J];Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology);2015年05期

3 孔宏亮;李占全;趙淑梅;袁龍;苗志林;劉瑩;關(guān)汝明;;Apelin-APJ Effects of Ginsenoside-Rb1 Depending on Hypoxia-Induced Factor 1α in Hypoxia Neonatal Cardiomyocytes[J];Chinese Journal of Integrative Medicine;2015年02期

4 ;Anti-amnestic and anti-aging effects of ginsenoside Rg1 and Rb1 and its mechanism of action[J];Acta Pharmacologica Sinica;2005年02期

5 張馨木,曲紹春,睢大員,于曉風(fēng),呂忠智;人參Rb組皂苷對高脂血癥大鼠血脂代謝的影響及其抗氧化作用[J];中國中藥雜志;2004年11期

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本文編號：1676757