本文選題：心肌纖維化　切入點：血管緊張素II　出處：《西南醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的:成纖維細胞的增殖及向肌成纖維細胞分化是心肌纖維化的病理基礎(chǔ)。AngII是RAAS中最具效應(yīng)的因子,可促進心肌纖維化進程。新近研究發(fā)現(xiàn)人心房成纖維細胞上存在大量的BKca通道,其與成纖維細胞的增殖有一定的相關(guān)性。因此,本研究擬采用體外培養(yǎng)人心房成纖維細胞、全細胞膜片鉗技術(shù)及基因編輯等方法,探討B(tài)Kca通道在Ang II誘導(dǎo)心肌纖維化過程中的作用。方法:本實驗采用組織塊貼壁法體外培養(yǎng)人心房成纖維細胞傳至第二代并分為三組:對照組,不做任何處理;Ang II組,500 nmol/L Ang II干預(yù)細胞;過表達BKcaα亞基組,脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒(CMV/KC NMA1/IRES/acGFP1)至細胞。實時熒光定量PCR和蛋白免疫印跡法分別檢測干預(yù)前后纖維化標(biāo)記物(α-SMA,Collagen I,Collagen)和BKcaα及β亞基的mRNA和蛋白質(zhì)表達水平,全細胞膜片鉗技術(shù)(Whole-cell patch clamp technique)記錄Ang II作用前后的BKca電流的變化。電流變化觀察指標(biāo):1)人心房成纖維細胞細胞上BKca通道電流的基本特點;2)AngII對成纖維細胞上BKca通道電流的作用。結(jié)果:1)Ang II上調(diào)人心房成纖維細胞上α-SMA,Collagen I,Collagen III的mRNA和蛋白質(zhì)表達。?與對照組相比,500 nmol/L Ang II作用成纖維細胞24h后,明顯上調(diào)成纖維細胞上α-SMA(0.893±0.058 vs 0.282±0.072,P=0.004)、Collagen I(0.858±0.060 vs 0.306±0.058,P=0.018)、Collagen III(0.946±0.054 vs 0.447±0.041,P=0.030)的mRNA表達,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。?與對照組相比,500nmol/langii刺激成纖維細胞24h后,明顯上調(diào)成纖維細胞上α-sma(0.967±0.038vs0.732±0.037,p=0.020)、collageni(0.857±0.010vs0.505±0.010,p=0.020)、collageniii(0.975±0.030vs0.626±0.010,p=0.009)的蛋白質(zhì)表達水平,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。2)angii可明顯下調(diào)成纖維細胞上bkcaα及β亞基mrna和蛋白質(zhì)表達水平。?與對照組相比,500nmol/langii作用成纖維細胞24h后,明顯下調(diào)bkcaα亞基(9.930±0.952vs0.709±0.223,p=0.001)及bkcaβ亞基(5.039±0.268vs1.390±0.640,p=0.020)的mrna表達水平。?與對照組相比,500nmol/langii作用于人心房成纖維細胞上72h后,明顯下調(diào)bkcaα(0.781±0.0728vs1.232±0.043,p=0.006)及bkcaβ(0.872±0.0530vs1.333±0.502,p=0.001)的蛋白表達水平。3)人心房成纖維細胞上bkca通道電流的特性:?該通道具有內(nèi)向整流性及電壓依賴性,可被ibtx特異性阻斷;?angii預(yù)處理24小時后可明顯抑制成纖維細胞上bkca的宏觀電流幅度,在+60mv電壓時,bkca電流密度從31.054±2.900下降到13.508±3.000。4)過表達bkcaα亞基(cmv/kcnma1/ires/acgfp1)對成纖維細胞上α-sma,collageni,collageniii的mrna和蛋白質(zhì)表達的影響。?與對照組相比,過表達bkca后可明顯下調(diào)α-sma(0.524±0.097vs1.219±0.150,p=0.007)、collageni(0.482±0.084vs1.023±0.134,p=0.020)、collageniii(0.664±0.010vs1.081±0.138,p=0.036)的mrna表達水平,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。?與對照組相比,過表達bkca后可明顯下調(diào)α-sma(0.391±0.015vs0.732±0.037,p=0.001)、collagen(0.227±0.010vs0.505±0.010,p=0.001)、collageniii(0.156±0.040vs0.626±0.010,p=0.008)的蛋白質(zhì)表達水平,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論:本研究從體外培養(yǎng)細胞水平證實:1)Ang II可誘導(dǎo)心肌纖維化。2)Ang II可抑制人心房成纖維細胞上BKca的mRNA和蛋白質(zhì)表達及電流強度。3)過表達BKca可明顯下調(diào)纖維化指標(biāo)的表達。4)Ang II通過抑制BKca通道的活性從而促進心肌纖維化進程,其機制可能是Ang II抑制了成纖維細胞上BKca的電流。提示BKca通道可能是預(yù)防或治療心肌纖維化的潛在靶點。
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【學(xué)位授予單位】：西南醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R54

【參考文獻】

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本文編號：1666185