發(fā)布時(shí)間：2018-03-16 04:33

  本文選題：CADM3　切入點(diǎn)：單核細(xì)胞　出處：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的缺氧是許多疾病的致病因素,也是臨床常見的病理過程。近年研究發(fā)現(xiàn),當(dāng)吸入氣體氧分壓或氧濃度下降時(shí),外周血來源的單核細(xì)胞(CD45+/CD11b+)在肺部的浸潤顯著增多,尤其在肺血管周圍的聚集最為廣泛;同時(shí),肺組織中可以檢測到大量炎癥介質(zhì)的合成和分泌。越來越多的研究表明,這些炎細(xì)胞和炎癥因子是促進(jìn)缺氧性肺動(dòng)脈高壓(Hypoxic pulmonary hypertension,HPH)發(fā)生發(fā)展的重要因素。有意思的是,在同樣的實(shí)驗(yàn)條件下,體循環(huán)血管周圍沒有檢測到類似的炎癥反應(yīng)。CADM3(cell adhesion molecular 3)作為一種類免疫球蛋白粘附分子,屬于Nectin分子樣家族蛋白,主要表達(dá)于細(xì)胞膜上。以往研究表明,CADM3是神經(jīng)組織特異表達(dá)的細(xì)胞粘附分子,對神經(jīng)元的形成具有重要作用。我們前期實(shí)驗(yàn)首次發(fā)現(xiàn),CADM3在缺氧人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(Human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)中表達(dá)增加并參與促進(jìn)單核細(xì)胞粘附。但CADM3是否介導(dǎo)肺循環(huán)特異的單核細(xì)胞浸潤,目前尚未見報(bào)道。本課題旨在研究CADM3在缺氧肺血管特異性炎細(xì)胞粘附中的作用。方法實(shí)驗(yàn)以大鼠肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞(rat pulmonary arterial endothelial cell,RPAEC)、大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞(rat aortic endothelial cell,RAEC)、人外周血單核細(xì)胞系(U937,THP-1)以及外周血白細(xì)胞為研究模型,按實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)分組,U937粘附實(shí)驗(yàn):常氧RPAEC+常氧U937組(CPE+CU),缺氧RPAEC+常氧U937組(HPE+CU),缺氧RPAEC+缺氧U937組(HPE+HU),常氧RAEC+常氧U937組(CAE+CU),缺氧RAEC+常氧U937組(HAE+CU)和缺氧RAEC+缺氧U937組(HAE+HU)(n=3);THP-1粘附實(shí)驗(yàn):常氧RPAEC+常氧THP-1組(CPE+CT),缺氧RPAEC+常氧THP-1(HPE+CT),缺氧RPAEC+缺氧THP-1組(HPE+HT),常氧RAEC+常氧THP-1組(CAE+CT),缺氧RAEC+常氧THP-1組(HAE+CT)和缺氧RAEC+缺氧THP-1組(HAE+HT)(n=3)。缺氧處理(1%O2)組細(xì)胞置于三氣培養(yǎng)箱連續(xù)培養(yǎng)6h,常氧對照(21%O2)組細(xì)胞置于普通培養(yǎng)箱培養(yǎng)至相應(yīng)時(shí)間。1.采用流式細(xì)胞術(shù)檢測Di I+細(xì)胞比例;熒光定量酶標(biāo)儀檢測細(xì)胞裂解液中熒光值;倒置顯微鏡觀察細(xì)胞粘附并計(jì)數(shù)。2.采用免疫印跡法檢測CADM3,HIF-1α蛋白表達(dá)差異;采用免疫熒光染色觀察CADM3和p65蛋白表達(dá)及其分布。3.采用抗CADM3抗體封閉和流式細(xì)胞檢測術(shù),檢測Di I+細(xì)胞比例。結(jié)果1.缺氧對內(nèi)皮細(xì)胞與U937細(xì)胞粘附影響:流式檢測結(jié)果與熒光酶標(biāo)儀檢測結(jié)果顯示,HPE+CU組Di I+細(xì)胞比例以及細(xì)胞裂解液中熒光值顯著增加,與CPE+CU組相比,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);HPE+HU組與HPE+CU組相比,兩組間無差異;RAEC與U937粘附各組間無差異。倒置熒光顯微鏡觀察結(jié)果顯示,HPE+CU組與CPE+CU組相比,U937細(xì)胞粘附率,內(nèi)皮細(xì)胞粘附力均顯著增加,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),雖內(nèi)皮細(xì)胞粘附率相應(yīng)增高,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。HPE+HU組與HPE+CU組相比,各指標(biāo)差異無顯著性意義。2.缺氧促進(jìn)RPAEC與THP-1細(xì)胞、外周血CD11b+白細(xì)胞粘附:分別采用流式細(xì)胞術(shù)與熒光定量酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測。流式結(jié)果顯示,HPE+CT組與CPE+CT組相比,Di I+細(xì)胞比例顯著增加,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);HPE+HT組與HPE+CT組相比,兩組間無差異;RAEC與THP-1粘附實(shí)驗(yàn)各組間差異均無顯著意義。熒光定量酶標(biāo)儀結(jié)果顯示,缺氧RPAEC+外周血白細(xì)胞組與常氧RPAEC+外周血白細(xì)胞組相比,細(xì)胞裂解液中CD11b+熒光強(qiáng)度明顯增加,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而其他類型白細(xì)胞不具有此特性。另外,RAEC與外周血白細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn),各組間細(xì)胞裂解液熒光強(qiáng)度無明顯差異。3.采用免疫印跡和免疫熒光染色檢測CADM3表達(dá)水平,缺氧RPAEC組與常氧RPAEC組相比,CADM3表達(dá)水平升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。常氧RPAEC+LPS組與常氧RPAEC組比較以及缺氧RPAEC+LPS組與缺氧RPAEC組相比,CADM3表達(dá)均無明顯差異。RAEC各組間CADM3表達(dá)無明顯差異。4.采用免疫熒光實(shí)驗(yàn)觀察p65蛋白定位,結(jié)果顯示,常氧RPAEC組與缺氧RPAEC組中,p65蛋白主要位于細(xì)胞胞漿;常氧RPAEC+LPS(5ug/ml)組與缺氧RPAEC+LPS(5ug/ml)組中,p65蛋白主要位于細(xì)胞胞核。5.流式細(xì)胞術(shù)檢測抗CADM3抗體封閉對缺氧條件下RPAEC與U937粘附的影響,結(jié)果顯示,缺氧+抗CADM3抗體組與缺氧組相比,Di I+細(xì)胞比例顯著下降,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論1.缺氧導(dǎo)致RPAEC與單核細(xì)胞/CD11b+細(xì)胞的粘附增加,且單核細(xì)胞是否缺氧活化對粘附?jīng)]有影響,表明缺氧特異性活化肺循環(huán)來源的RPAEC-單核細(xì)胞粘附。2.缺氧特異性誘導(dǎo)RPAEC表達(dá)CADM3增加;LPS刺激對CADM3的表達(dá)沒有影響。3.缺氧誘導(dǎo)的CADM3表達(dá)參與RPAEC與單核細(xì)胞的特異性粘附。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R544.1

【參考文獻(xiàn)】

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1 謝琰臣;孫兆林;孟云霄;杜怡峰;張華;滕繼軍;潘旭東;王海萍;韓仲巖;;抗細(xì)胞間黏附分子-1單克隆抗體對老年人中性粒細(xì)胞與缺氧內(nèi)皮細(xì)胞黏附的影響[J];中華老年醫(yī)學(xué)雜志;2005年12期

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本文編號：1618373