本文選題：半乳糖凝集素-3　切入點(diǎn)：AF　出處：《第二軍醫(yī)大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：一、研究背景心房顫動(dòng)(房顫,AF)是臨床最常見(jiàn)的房性心律失常,在器質(zhì)性心臟病患者中AF發(fā)生率尤高,心臟瓣膜病則是AF患者中最常見(jiàn)的基礎(chǔ)病變,但引起瓣膜病持續(xù)性AF的發(fā)生機(jī)制至今尚未完全明確。目前認(rèn)為AF時(shí)存在心房離子通道電重構(gòu)和心房組織結(jié)構(gòu)重構(gòu),隨著國(guó)內(nèi)外對(duì)AF的臨床和基礎(chǔ)研究的不斷深入,人們明確心房肌間質(zhì)纖維化是AF發(fā)生和維持的重要原因。半乳糖凝集素-3(Galectin-3)作為一種炎性因子,參與了心衰心肌纖維化及心臟重塑等病理生理過(guò)程。有研究認(rèn)為,Galectin-3主要通過(guò)介導(dǎo)纖維母細(xì)胞的激活及巨噬細(xì)胞的浸潤(rùn),使細(xì)胞膠原蛋白等多種蛋白的表達(dá)增加從而加速心肌纖維化進(jìn)程,且Galectin-3的表達(dá)與細(xì)胞周期蛋白D1(CyclinD1)有關(guān)。反映成纖維細(xì)胞活化存在兩個(gè)標(biāo)志物,α-平滑肌動(dòng)蛋白(α-SMA)是肌成纖維細(xì)胞的標(biāo)志,堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)是纖維細(xì)胞的促有絲分裂劑,兩者均可從某一個(gè)側(cè)面反應(yīng)纖維化的進(jìn)程。近年來(lái),研究發(fā)現(xiàn),血清Galectin-3水平與房顫相關(guān),而心肌中Galectin-3的表達(dá)變化,及其在瓣膜性AF的發(fā)展中的作用至今尚不明確。二、研究目的1、明確瓣膜性AF患者血清及左、右心房組織中Galectin-3表達(dá)的變化規(guī)律;2、探討心肌Galectin-3表達(dá)水平變化,對(duì)心房肌纖維化的影響及其與AF維持的關(guān)系。三、研究方法選取2016年1月至2016年12月在第二軍醫(yī)大學(xué)附屬長(zhǎng)征醫(yī)院心臟外科住院的心臟二尖瓣瓣膜病變擬行瓣膜手術(shù)的患者50例,根據(jù)病史及術(shù)前心電圖有無(wú)持續(xù)性心房顫動(dòng)將患者分為兩組,持續(xù)性房顫組(房顫組,AF組),n=29,(男11例,女18例),竇性心律組(竇律組,SR組),n=21,(男10例,女11例)。兩組患者在性別、年齡,體重,體重指數(shù)(BMI),心功能分級(jí)(NYHA分級(jí))等無(wú)明顯差別。所有患者入院后收集一般資料,包括:性別、年齡、體重、身高、體質(zhì)指數(shù)、吸煙史、心律失常病史等。所有患者均需簽署知情同意書,于術(shù)前抽取外周血行肝腎功能、甲狀腺功能、總膽固醇、甘油三酯、血糖、血鉀、血鈉、B型腦利鈉肽(BNP)、C-反應(yīng)蛋白(CRP)等實(shí)驗(yàn)室檢查;并留取手術(shù)中切除的左心房(LAA)、右心房(RAA)的剩余組織,用于本研究。采用心臟超聲檢查來(lái)評(píng)價(jià)左房?jī)?nèi)徑(lad)、左心室舒張末徑(lvdd)、左心室收縮末徑(lvds),采用simpson法測(cè)量左心室射血分?jǐn)?shù)(lvef)等指標(biāo),采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(elisa)檢測(cè)血清galectin-3水平。采用光鏡蘇木素一伊紅染色(he)觀察心肌組織病理變化,采用masson染色觀察心肌纖維化的情況,計(jì)算出膠原容積分?jǐn)?shù)(cvf)%,采用免疫組化法、熒光定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)法(q-pcr)、蛋白質(zhì)印跡法(wb)分別檢測(cè)左、右心房肌組織中g(shù)alectin-3、cyclind1、α-sma、bfgf、colⅠ、colⅢmrna及蛋白的表達(dá)分布情況。所有數(shù)據(jù)均采用spss21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析,p0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。四、研究結(jié)果(一)一般臨床資料af組與sr組患者在年齡、性別、bmi、瓣膜病種類、nyha分級(jí)、lvef、bnp等方面無(wú)明顯差異(p0.05);af組患者lad明顯大于sr組(53.97±8.37vs41.81±8.18,p0.01)。(二)galectin-3表達(dá)的變化af組血清galectin-3水平明顯高于sr組(2471.87±734.81vs1781.84±624.08pg/ml,p=0.001);同時(shí),af組的左、右心房肌組織中g(shù)alectin-3蛋白表達(dá)水平(laa:0.91±0.33vs0.72±0.31,p=0.043;raa:0.97±0.31vs0.78±0.28,p=0.035)及mrna表達(dá)水平(laa:2.49±0.39vs2.23±0.34,p=0.016;raa:2.43±0.37vs2.17±0.35,p=0.012)均顯著高于sr組;但是無(wú)論是af組還是sr組,左、右心房間的galectin-3表達(dá)水平無(wú)明顯差異。(三)心房肌纖維化形態(tài)學(xué)變化1、he染色顯示,心臟瓣膜病患者,無(wú)論是af組還是sr組,左、右心房肌組織中均有一定的纖維化表現(xiàn),但在af組的左、右心房肌組織中表現(xiàn)的更為明顯,肌纖維排列紊亂,連續(xù)性差,細(xì)胞數(shù)目減少;兩組左、右心房之間無(wú)明顯差別。2、masson染色顯示,af組左、右心房肌中陽(yáng)性表達(dá)均強(qiáng)于sr組,af組中藍(lán)染的纖維更多,排列更雜亂;且af組患者左、右心房肌組織中的cvf均明顯高于竇性心律組(laa:36.41±5.29%vs32.11±8.23%,p=0.044;raa:36.23±5.64%vs31.23±8.64%,p=0.027),但膠原容積分?jǐn)?shù)在左、右心房肌組織之間的差異兩組均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(四)心房肌組織中g(shù)alectin-3相關(guān)cyclind1表達(dá)水平1、蛋白表達(dá)水平af組,cyclind1在左、右心房肌組織中蛋白表達(dá)水平均顯著高于sr組(laa:0.92±0.15vs0.79±0.20,p=0.013;raa:0.87±0.16vs0.76±0.19,p=0.037);但兩組左、右心房肌之間cyclind1表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2、mrna表達(dá)水平af組,cyclind1在左、右心房肌組織中mrna表達(dá)水平均顯著高于sr組(laa:1.90±0.38vs1.67±0.35,p=0.037;raa:1.89±0.30vs1.71±0.35,p=0.044);但兩組患者左、右心房肌之間cyclind1表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(五)心房肌組織中α-sma、bfgf表達(dá)水平1、分布情況免疫組化結(jié)果顯示:兩組左、右心房肌組織中均有α-sma、bfgf表達(dá);其中bfgf在af組的陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)于sr組,而α-sma的免疫組化陽(yáng)性表達(dá)兩組差異并不顯著。2、蛋白表達(dá)水平af組左、右心房肌組織中,bfgf在蛋白水平的表達(dá)高于sr組(laa:0.27±0.09vs0.22±0.08,p=0.047;raa:0.28±0.07vs0.23±0.08,p=0.038);而α-sma在af組左、右心房肌組織中蛋白表達(dá)水平雖有上調(diào)的趨勢(shì)(laa:0.84±0.23vs0.75±0.22,p=0.171;raa:0.82±0.20vs0.75±0.20,p=0.186),但兩組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;兩組患者左、右心房肌之間bfgf、α-sma表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。且兩組左、右心房肌之間α-sma、bfgf表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。3、mrna表達(dá)水平af組左、右心房肌組織中,bfgfmrna的表達(dá)水平高于sr組(laa:0.63±0.14vs0.55±0.13,p=0.044;raa:0.60±0.13vs0.51±0.10,p=0.009),而α-sma在mrna的表達(dá)水平兩組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(laa:3.07±0.35vs2.90±0.33,p=0.091;raa:3.06±0.35vs2.93±0.30,p=0.173)。且兩組左、右心房肌之間α-sma、bfgf表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。通過(guò)bfgf、α-sma的表達(dá)情況,可以看出在af患者心肌組織中纖維母細(xì)胞的活性增強(qiáng)。(六)心房肌組織中colⅠ、colⅢ表達(dá)水平1、分布情況免疫組化結(jié)果顯示:兩組左、右心房肌組織中均有colⅠ、colⅢ的表達(dá);其中colⅠ在af組的陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)于sr組,而colⅢ的免疫組化陽(yáng)性表達(dá)兩組差異并不顯著。2、蛋白表達(dá)水平af組左、右心房肌組織中colⅠ蛋白表達(dá)水平均高于sr組(laa:0.56±0.09vs0.49±0.09,p=0.013;raa:0.52±0.07vs0.47±0.11,p=0.035);而af組,colⅢ蛋白水平的表達(dá)雖有上升趨勢(shì),兩組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(laa:1.10±0.27vs1.01±0.21,p=0.181;raa:1.16±0.26vs1.04±0.22,p=0.092);且兩組左、右心房肌之間colⅠ、colⅢ表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。3、mrna表達(dá)水平af組左、右心房肌組織中colⅠmrna表達(dá)水平均顯著高于sr組(laa:1.07±0.10vs0.97±0.17,p=0.024;raa:1.06±0.21vs0.92±0.18,p=0.011);而colⅢmrna水平的表達(dá)雖有上升趨勢(shì),兩組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(laa:1.08±0.27vs1.02±0.29,p=0.450;raa:1.12±0.31vs1.11±0.20,p=0.820);且兩組左、右心房肌之間colⅠ、colⅢ表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。af組患者,colⅠ表達(dá)增高,colⅢ雖表達(dá)升高不顯著,但colⅠ/colⅢ比率增高,提示af組患者心肌組織中確實(shí)發(fā)生了與galectin-3相關(guān)的纖維母細(xì)胞活性增強(qiáng)導(dǎo)致的心房纖維化的程度的加重。(七)galectin-3與心房肌纖維化的相關(guān)性分析左、右心房肌組織中,galectin-3mrna表達(dá)水平與lad、cvf、colⅠ、cyclind1mrna表達(dá)水平均呈顯著正相關(guān);左心房肌組織中g(shù)alectin-3mrna表達(dá)水平與colⅢ呈顯著正相關(guān),而在右心房組織中,galectin-3mrna表達(dá)水平與colⅢ表達(dá)相關(guān)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,無(wú)論左、右心房肌組織,galectin-3mrna表達(dá)水平與α-sma、bfgf相關(guān)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。五、研究結(jié)論(一)af患者心房肌組織及血清中g(shù)alectin-3水平均明顯升高,提示galectin-3與af的發(fā)生維持有關(guān)。(二)Galectin-3可能通過(guò)影響Cyclin D1的表達(dá),影響纖維母細(xì)胞活性及功能增強(qiáng),增加ColⅠ的表達(dá)促進(jìn)心房肌纖維化,影響房顫的維持。(三)心房肌組織房顫與纖維化相關(guān)研究未發(fā)現(xiàn)明顯的心腔差異。
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【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R541.75

【參考文獻(xiàn)】

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1 周自強(qiáng),胡大一,陳捷,張仁漢,李奎寶,趙秀麗;中國(guó)心房顫動(dòng)現(xiàn)狀的流行病學(xué)研究[J];中華內(nèi)科雜志;2004年07期

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本文編號(hào)：1610255