本文選題：前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草溶菌素9　切入點：血脂異常　出處：《北京協(xié)和醫(yī)學院》2017年博士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的:前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草溶菌素 9(proprotein convertase subtilisin kexin type 9,PCSK9)可降解肝臟低密度脂蛋白受體(low density lipoprotein receptor,LDLR),在調(diào)節(jié)膽固醇代謝中發(fā)揮著至關重要的作用。同時,PCSK9與膽固醇相關的心血管風險密切關聯(lián)。眾所周知,動脈粥樣硬化心血管疾病是以脂代謝紊亂和慢性炎癥為重要病理特征的多因素復雜疾病。因此,我們提出假設,血漿PCSK9水平與傳統(tǒng)血脂及慢性炎性指標相關;并與前者存在分離現(xiàn)象,從而為機體致動脈粥樣硬化性血脂紊亂增添重要信息。內(nèi)容與方法:本研究內(nèi)容分兩部分:(1)血漿PCSK9水平與冠心病(coronary artery disease,CAD)患者脂炎類指標的相關性評價;(2)PCSK9水平與傳統(tǒng)血脂異常分類的關系評價。第一部分為小樣本CAD人群的橫斷面研究,納入了 251例連續(xù)入選的未經(jīng)降脂藥治療的穩(wěn)定型CAD患者。首先,收集患者入院前完整的病史及入院后的基線材料包括輔助檢查資料和肘靜脈血標本;其次,采用酶聯(lián)免疫吸附測定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)檢測血漿 PCSK9 水平;最后,分析PCSK9水平與血脂指標包括甘油三酯(triglyceride,TG)、總膽固醇(total cholesterol,TC)、高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、載脂蛋白A1(apolipoproteinA1,apoA1)、載脂蛋白 B(apoB)、脂蛋白(a)[lipoprotein(a),Lp(a)]、游離脂肪酸(free fatty acid,FFA)水平,和慢性炎癥指標白細胞及其亞型計數(shù)的相關性。第二部分以1605例連續(xù)入選的經(jīng)冠狀動脈造影的患者為研究對象,按其血脂異常類型分成五組:單純高甘油三酯、單純高膽固醇血癥、混合型高脂血癥、低HDL膽固醇血癥及血脂正常組。資料收集與臨床檢測如上所述。該部分的研究主要圍繞以下三方面開展:探討血漿PCSK9水平與血脂異常分類的關系,并評價PCSK9水平在各類血脂異常診斷中的價值;考察PCSK9水平與血脂指標在各類血脂異常中可能的相互作用;分析PCSK9水平與目前血脂異常分類的分離現(xiàn)象,揭示PCSK9是否為評價機體血脂的又一重要指標。結(jié)果:(1)在穩(wěn)定型CAD患者中,簡單相關分析結(jié)果顯示,血漿PCSK9水平與血脂指標中 TC(相關系數(shù) r =0.294,p0.001)、HDL-C(r =0.128,p =0.042)、LDL-C(r =0.256,p0.001)、apoA1(r=0.229,p0.001)、apoB(r =0.278,p0.001)和慢性炎性指標白細胞(r =0.167,p =0.008)及其亞型淋巴細胞計數(shù)(r=0.219,p0.001)顯著相關。多因素回歸分析發(fā)現(xiàn),在校正性別、年齡、體質(zhì)指數(shù)、吸煙、飲酒、高血壓、糖尿病、CAD家族史及血脂指標后,PCSK9與白細胞及淋巴細胞計數(shù)的相關性仍然存在。(2)與血脂正�；颊叩腜CSK9水平(228.87 ± 67.24 ng/ml)相比,單純高膽固醇血癥患者(255.30 ±70.82 ng/ml)和混合型血脂異�；颊�(251.99± 65.63 ng/ml)的PCSK9水平顯著升高,而單純高甘油三酯血癥患者(231.10 ± 68.58 ng/ml)及低HDL膽固醇血脂患者(221.30±67.03 ng/ml)的PCSK9無明顯差異。繪制受試者工作特征曲線(receiver operating characteristic curve,ROC曲線)而得,PCSK9水平對單純高膽固醇血癥及混合型血脂異常具有較高的診斷價值(診斷界值均為 235 ng/ml),曲線下面積分別是 0.609[0.564-0.654],p0.001;0.606[0.563-0.648],p0.001。隨著高膽固醇血癥嚴重程度的加重,PCSK9水平與LDL-C的相互作用也增加。有趣的是,PCSK9與LDL-C水平存在明顯的分離現(xiàn)象。結(jié)論:血漿PCSK9水平與CAD患者的致動脈粥樣性相關脂炎性指標呈明顯正相關,PCSK9水平的測定或可在臨床上為患者血脂的評價與管理提供重要參考。目的:前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草溶菌素 9(proprotein convertase subtilisin kexin type 9,PCSK9)是新近被發(fā)現(xiàn)的與膽固醇代謝調(diào)節(jié)密切相關的蛋白。眾多研究資料共同顯示,PCSK9功能性改變與血液中膽固醇水平及冠心病(coronary artery disease,CAD)風險有關。PCSK9功能的揭示為血脂與心血管領域的研究帶來了重大的知識革新,更為心血管疾病的臨床管理帶來了新的防治思路。近年來,血漿PCSK9水平的檢測受到醫(yī)學研究者和臨床工作者的重視。然而,PCSK9水平與CAD嚴重程度及預后的關系之研究尚顯不足�；谏鲜霈F(xiàn)狀,本研究擬率先在中國人群中探討血漿PCSK9水平與CAD嚴重程度及預后的關系,評價PCSK9水平在CAD發(fā)生發(fā)展中是否存在獨立的檢測意義和預測價值。內(nèi)容與方法:本研究納入自2012年10月至2015年1月連續(xù)入院的穩(wěn)定型冠心病患者616例,所有入選患者均在入院前至少3個月未服用降脂類藥物,并具有完整的病史資料及實驗室檢查結(jié)果。血漿PCSK9水平采用酶聯(lián)免疫吸附劑法(ELISA)測定。CAD的嚴重程度采用病變支數(shù)以及SYNTAX、Gensini和Jeopardy評分系統(tǒng)評價。自患者出院至2015年4月,平均隨訪時間為17個月。疾病預后的主要觀察終點:心源性死亡、急性腦血管疾病、急性心肌梗死、血運重建和不穩(wěn)定型心絞痛。結(jié)果:根據(jù)基線心血管危險因素的數(shù)量,我們把CAD患者分成三組:0-2(n=66),3-5(n=348)和≥6個(n=202)組。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),血漿PCSK9水平隨著危險因素數(shù)量的增加而增高,PCSK9水平在三組的中位數(shù)及四分位間距分別為222.12[118.40-273.91]vs.230.19[190.38-277.77]vs.271.06[211.33-327.19]ng/ml(p0.05)。同時,我們也發(fā)現(xiàn),血漿PCSK9水平與CAD患者的冠脈病變嚴重程度相關:病變支數(shù)越多的患者PCSK9水平越高(單支222.55[185.65-278.31],雙支226.61[191.63-271.01],多支 236.58[191.37-292.69]ng/ml);SYNTAX、Gensini 和Jeopardy評分高的患者PCSK9水平亦高于相應評分低的患者(p0.05)。本研究觀察結(jié)束時,我們獲得了 603例患者的隨訪資料,余13例為失訪患者;發(fā)生至少一件終點事件的患者共72例(4心源性死亡,4急性腦血管疾病,6非致死性急性心肌梗死,28血運重建和30不穩(wěn)定型心絞痛),發(fā)生率為11.9%。多因素Cox回歸模型提示,經(jīng)校正年齡、性別、體質(zhì)指數(shù)、高血壓、糖尿病、高膽固醇血癥、低高密度脂蛋白膽固醇血癥、吸煙、CAD家族史、尿酸和高敏C反應蛋白,PCSK9水平和冠脈嚴重程度評分均可獨立預測心血管事件的發(fā)生(p0.05)。有趣的是,PCSK9水平和冠脈嚴重程度評分在藥物治療患者這一亞組中對心血管事件的預測價值更有意義(p0.05)。結(jié)論:血漿PCSK9水平與CAD患者的冠脈病變嚴重程度有關,且對其未來心血管事件具有獨立的預測價值。目的:脂代謝紊亂與炎癥是動脈粥樣性心血管疾病發(fā)生的重要學說,但二者確切的致病作用,尤其是相互作用網(wǎng)絡尚待闡明。前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草溶菌素9(proprotein convertase subtilisin kexin type9,PCSK9)為較新發(fā)現(xiàn)的脂代謝調(diào)節(jié)蛋白,能降解肝細胞膜上的低密度脂蛋白受體(low density lipoprotein receptor,LDLR),使血LDL膽固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)水平升高。我們推測 PCSK9可能聯(lián)系著炎癥與脂代謝兩大機制。本項目擬從細胞學水平,采用C-反應蛋白(C reactive protein,CRP)作為炎癥刺激物觀察其對PCSK9表達及LDL-C攝取的影響,并探究該通路的分子機制。內(nèi)容與方法:本研究主要包括兩方面。其一,在人類肝癌細胞株HepG2細胞水平上觀察炎癥刺激(CRP,10μg/mL)對PCSK9表達的影響以及各炎癥刺激發(fā)揮該作用所依賴的分子通路。觀察指標:(1)CRP對PCSK9蛋白及mRNA水平的改變;(2)CRP激活的相關炎癥信號轉(zhuǎn)導蛋白;(3)PCSK9基因上游轉(zhuǎn)錄因子水平,即上游調(diào)節(jié)因子固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-2(sterol regulatory element binding protein-2,SREBP-2)和肝核轉(zhuǎn)錄因子-α(hepatocyte nuclear factor-1α,HNF-1α);(4)PCSK9基因與被激活轉(zhuǎn)錄因子的基因蛋白結(jié)合活性。其二,觀察PCSK9通路在CRP 1 Oμg/mL刺激對HepG2細胞LDLR及LDL攝取的可能影響。觀察指標:(1)單純CRP刺激下,HepG2細胞LDLR蛋白、mRNA水平及LDL攝取能力的改變;(2)CRP和PCSK9通路抑制劑刺激下,HepG2細胞LDLR蛋白、mRNA水平及LDL攝取能力的改變。結(jié)果:首先,我們發(fā)現(xiàn)CRP 1Oμg/mL可明顯上調(diào)HepG2細胞PCSK9蛋白及mRNA水平,而抑制LDLR蛋白及mRNA的表達。值得指出的是,CRP刺激24h后,LDLR mRNA水平出現(xiàn)回升而LDLR蛋白水平仍繼續(xù)下降。可見,CRP對LDLR的影響除了轉(zhuǎn)錄前調(diào)節(jié)外,還存在轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)通路。其次,我們觀察到PCSK9抑制劑PCSK9siRNA可明顯緩解CRP介導的LDLR水平的下降及LDL攝取能力的降低。此外,p38 絲裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38MAPK)抑制劑SB203580表現(xiàn)為抑制CRP介導的PCSK9上調(diào),而增加LDLR水平及LDL的攝取;該通路中,CRP刺激促進了 p38MAPK的磷酸化進而激活HNF-1α而非SREBP-2與PCSK9基因的結(jié)合活性。結(jié)論:CRP可通過激活p38MAPK-HNF-1α通路上調(diào)HepG2細胞PCSK9的表達,進而影響LDLR的轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)和LDL的攝取。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學院
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R541.4

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本文編號：1601068