本文選題：血管內(nèi)皮生長因子165　切入點：L型鈣電流　出處：《鄭州大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：研究背景和目的細胞因子VEGF(165)是治療缺血性心臟病和心力衰竭的潛在靶點。研究已證實VEGF165不僅促進形成缺血區(qū)域新生血管,還發(fā)揮抑制心肌細胞凋亡、減少纖維組織生成以及提高干細胞移植成功率的作用。這些研究結(jié)果表明VEGF165不單能夠以內(nèi)皮細胞為靶點進行血管生物學調(diào)節(jié),還會影響心肌細胞本身活動。運用不同濃度VEGF165蛋白干預時,心肌細胞的機械活動和電活動可能會發(fā)生變化。L型鈣通道是心肌細胞膜上重要的電壓依賴性鈣離子通道,經(jīng)L型鈣通道流入的鈣離子,一方面激活鈣介導鈣釋放引發(fā)心肌收縮,另一方面參與心肌細胞膜動作電位平臺期的形成。在不同濃度VEGF165蛋白的干預下,通過研究心肌細胞膜L型鈣電流變化及動作電位的變化,目的在于探索VEGF165對心肌細胞電活動的影響。研究方法首先分離豚鼠心室肌細胞,運用膜片鉗技術(shù)分別進行電流鉗與電壓鉗實驗。1、電壓鉗實驗首先運用硝苯地平檢測電壓鉗設(shè)置,得到單個心室肌細胞膜L型鈣電流(全細胞)。將分離的心室肌細胞分為0、10、40、100、300 ng/ml VEGF165干預組。在不同濃度VEGF165蛋白干預下,記錄各組L型鈣電流的電流-電壓曲線關(guān)系、標準化最大電流值,L型鈣通道穩(wěn)態(tài)激活曲線和穩(wěn)態(tài)失活曲線的斜率因子k和半數(shù)激活電壓V1/2值并比較。在100 ng/ml、300 ng/ml VEGF165干預下,運用VEGF2型受體抑制劑SU5416,檢測并比較運用抑制劑前后L型鈣電流的電流-電壓曲線關(guān)系和標準化最大電流值。2、電流鉗實驗在300 ng/ml VEGF165干預下,以自身作為對照,觀察并比較刺激前后靜息電位、動作電位時程50、動作電位時程90、動作電位幅度和最大電壓變化率。研究結(jié)果1、成功確認L型鈣電流的電壓鉗設(shè)置。與對照組相比,硝苯地平組的標準化電流為0.04±0.02(P0.05);2、VEGF165以劑量依賴方式刺激豚鼠心室肌細胞膜L型鈣電流增強。與未添加VEGF165的對照組相比,40(-1.070±0.049)、100(-1.170±0.042)和300ng/m L(-1.220±0.060)VEGF165干預組標準化L型鈣電流明顯增加(P0.05)。與40 ng/m L組比較,100和300 ng/m L VEGF165干預組標準化L型鈣電流明顯增加(P0.05);3、分別比較100 ng/m L VEGF165干預組和對照組的心室肌細胞L型鈣通道的穩(wěn)態(tài)激活和穩(wěn)態(tài)失活曲線,兩組間半數(shù)激活電壓(V1/2)和斜率系數(shù)(k)無明顯差異;4、VEGFR2抑制劑明顯消除100 ng/m L(-1.170±0.019 vs-0.923±0.033)和300ng/m L(-1.220±0.025 vs-0.911±0.030,P0.05)VEGF165介導的L型鈣電流增加;5、高濃度的VEGF165干預前后,心室肌細胞膜APD90和動作電位的其他參數(shù)沒有明顯變化。研究結(jié)論在10-100 ng/m L濃度范圍內(nèi),通過與細胞膜上的VEGFR2結(jié)合,VEGF165能夠以劑量依賴方式增強心室肌細胞膜L型鈣電流。VEGF165介導的鈣電流增強作用與心室肌細胞膜L型鈣通道的電壓門控特性無關(guān),且不影響心肌細胞動作電位特性,有助于心臟電活動穩(wěn)定性。
[Abstract]:Background and objective the cytokine VEGF 165) is a potential target for the treatment of ischemic heart disease and heart failure. It has been demonstrated that VEGF165 not only promotes the formation of neovascularization in ischemic regions, but also inhibits cardiomyocyte apoptosis. These results suggest that VEGF165 can not only target endothelial cells for vascular biological regulation, but also increase the success rate of stem cell transplantation. When treated with different concentrations of VEGF165 protein, the mechanical and electrical activities of cardiomyocytes may change. L-type calcium channel is an important voltage-dependent calcium channel in myocardial cell membrane. Calcium ion influx via L-type calcium channel, on the one hand, activates calcium-mediated calcium release and induces myocardial contraction, on the other hand, participates in the formation of action potential plateau of myocardial cell membrane. Under the intervention of different concentrations of VEGF165 protein, By studying the changes of L-type calcium current and action potential of myocardial cell membrane, the purpose of this study was to explore the effect of VEGF165 on the electrical activity of cardiac myocytes. The patch-clamp technique was used to carry out current clamp and voltage clamp experiments respectively. First, nifedipine was used to detect the setting of voltage clamp. L-type calcium current (L-type calcium current) of single ventricular myocyte membrane was obtained. The isolated ventricular myocytes were divided into two groups: one group was treated with different concentrations of VEGF165 protein, the other was divided into three groups. Under different concentrations of VEGF165 protein, the current-voltage curves of L-type calcium current were recorded. The slope factor k and the half activation voltage V1 / 2 of the normalized maximum current value / L type calcium channel steady-state activation curve and steady-state inactivation curve were compared and compared. VEGF2 receptor inhibitor SU5416 was used to detect and compare the relationship between current and voltage curve of L-type calcium current before and after the use of the inhibitor and the standardized maximum current value of .2.Current-clamp experiment was carried out under the intervention of 300 ng/ml VEGF165 and itself as control. Observe and compare the resting potential, action potential duration 50, action potential duration 90, action potential amplitude and maximum voltage change rate before and after stimulation. The standardized current of nifedipine group was 0.04 鹵0.02P0.05P0.05VEGF165 increased the L-type calcium current in guinea pig ventricular myocytes in a dose-dependent manner. Compared with the control group without VEGF165, the standardized L-type calcium current increased significantly between the control group (40 鹵1.070 鹵0.049) and the control group (300ngr 路m L-1.220 鹵0.060 VEGF165) and the control group (300ngmL-1.220 鹵0.060VEGF165). The standardized L-type calcium current in 40 ng/m L group was significantly increased than that in 300 ng/m L VEGF165 group. The steady-state activation and steady-state inactivation curves of L-type calcium channel in ventricular myocytes were compared between the 100 ng/m L VEGF165 intervention group and the control group. There was no significant difference between the two groups in the half activation voltage (V 1 / 2) and slope coefficient (k). 4 VEGFR2 inhibitors significantly eliminated 100 ng/m L ~ + -1.170 鹵0.019 vs-0.923 鹵0.033) and 300 ng / m L ~ (-1) -1.220 鹵0.025 vs-0.911 鹵0.030 vs-0.911 鹵0.030 vs-0.911 鹵0.030 vs-0.911 鹵0.030 vs-0.911 鹵0.030 vs-0.911 鹵0.030 vs-0.911 鹵0.030 vs-0.911 鹵0.030 vs-0.911 鹵0.030 vs-0.911 鹵0.030 vs-0.911, respectively. There was no significant change in APD90 and other parameters of action potential in ventricular myocytes. VEGF165 could enhance the L-type calcium current in ventricular myocytes in a dose-dependent manner. The enhancement of calcium currents mediated by VEGF165 was independent of the voltage-gated characteristics of L-type calcium channels in ventricular myocytes. And it does not affect the action potential characteristics of cardiomyocytes and contributes to the stability of cardiac electrical activity.
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R54

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本文編號：1576480