本文關(guān)鍵詞： 納米粒 轉(zhuǎn)鐵蛋白 柔紅霉素 凋亡 靶向給藥系統(tǒng)　出處：《東南大學(xué)》2015年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的目前為止化療仍然是腫瘤系統(tǒng)化治療的主要手段,但是化療的毒副作用限制了其臨床運(yùn)用。為了增加腫瘤藥物的化療效果,減少藥物對正常組織器官的損傷,我們研制一種新型的化療藥物納米運(yùn)載系統(tǒng)DNR-PLGA-PLL-PEG-Tf靶向治療惡性血液病,并探討其抗腫瘤的機(jī)制。方法采用高分辯透射電鏡、掃描電子顯微鏡、激光粒度分析儀、紫外分光光度計對載藥納米粒DNR-PLGA-PLL-PEG-Tf進(jìn)行物理表征。用倒置熒光顯微鏡及流式細(xì)胞技術(shù)(FCM)檢測人白血病細(xì)胞株K562細(xì)胞內(nèi)柔紅霉素(DNR)的累積。構(gòu)建K562細(xì)胞株荷瘤鼠模型,觀察納米藥物的抑瘤率及藥物的安全性,TUNEL法檢測腫瘤組織細(xì)胞的凋亡,免疫組化方法檢測凋亡蛋白的表達(dá),Western blotting分析凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)。FCM檢測急性白血病原代細(xì)胞的凋亡及細(xì)胞內(nèi)DNR的累積量。結(jié)果1、DNR-PLGA-PLL-PEG-Tf納米粒用去離子水分散超聲后通過掃描電子顯微鏡(SEM)和高分辯透射電鏡(HRTEM)觀察到的納米粒形態(tài)大多數(shù)為球型或近似球型。激光粒度分析儀測得納米載藥粒平均粒徑為176.4±11.0 nm,Zeta電位為-19.24±0.12 mV。DNR的包封率和載藥量分別為75.12%±1.68%和5.32%±0.15%。結(jié)果表明DNR-PLGA-PLL-PEG-Tf納米載藥粒大小、形狀相似、載藥量高、穩(wěn)定,易于保存。2、對于人白血病細(xì)胞株K562細(xì)胞,無論單藥DNR或是載藥納米粒DNR-PLGA-PLL-PEG-Tf作用于細(xì)胞后,倒置熒光顯微鏡下DNR組和DNR-PLGA-PLL-PEG-Tf-NPs組細(xì)胞內(nèi)均可見DNR分布,后者細(xì)胞內(nèi)DNR濃度高于前者。FCM測得單藥DNR和DNR-PLGA-PLL-PEG-Tf處理K562細(xì)胞后,相對熒光強(qiáng)度(RFI)分別為8.14±0.29和14.26±0.39,二組之間具有統(tǒng)計學(xué)差異(P005)。3、人白血病細(xì)胞株K562細(xì)胞接種裸鼠成瘤率100%。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)空白對照組和空白載體納米組的腫瘤體積分別增長至1,099±238 mm3和1,034±178 mm,兩組腫瘤生長速率無明顯差別,且腫瘤體積無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。單藥DNR組和DNR-PLGA-PLL-PEG-Tf組腫瘤體積分別536±137 mm3和237±85 mm3。用藥組腫瘤體積明顯小于空白對照組,有顯著差異(P0.05)。DNR-PLGA-PLL-PEG-Tf組腫瘤體積明顯比單藥DNR組小,具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),納米藥物抑瘤率比單藥DNR明顯。而且DNR-PLGA-PLL-PEG-Tf組瘤重量明顯低于單藥DNR組,兩者具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明載藥納米柔紅霉素抗腫瘤效果優(yōu)于單藥DNR。空白對照組和空白載體納米組的腫瘤組織細(xì)胞凋亡率分別為4.9±0.45%和5.18±0.47%,兩組腫瘤細(xì)胞凋亡率無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。單藥DNR組和DNR-PLGA-PLL-PEG-Tf組細(xì)胞凋亡率分別為22.82±1.38%和31.09±2.63%。用藥組腫瘤細(xì)胞凋亡率明顯高于空白對照組,有顯著差異(P0.05)。DNR-PLGA-PLL-PEG-Tf組腫瘤細(xì)胞凋亡率比單藥DNR組高,兩組之間腫瘤細(xì)胞凋亡率,具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。表明納米載藥系統(tǒng)可以增強(qiáng)化療藥物促腫瘤細(xì)胞凋亡的作用。凋亡蛋白(Caspase 9、Caspase 3及c-PARP)在空白對照組和空白載體納米組兩組表達(dá)量無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),在用藥組表達(dá)量明顯高于空白對照組,且DNR-PLGA-PLL-PEG-Tf組表達(dá)量高于單藥DNR組,兩組之間具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)�？瞻讓φ战M和空白載體納米組凋亡調(diào)節(jié)蛋白Bcl-2和Bax表達(dá)量無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。用藥組Bcl-2表達(dá)量及Bcl-2/Bax比值明顯低于空白對照組,統(tǒng)計學(xué)有顯著差異(P0.05)。DNR-PLGA-PLL-PEG-Tf組Bcl-2表達(dá)量及Bcl-2/Bax比值低于單藥DNR組,兩組之間具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示納米藥物通過內(nèi)源性凋亡途徑促進(jìn)腫瘤組織細(xì)胞凋亡。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)過程中裸鼠治療前后體重?zé)o明顯變化,飲食、睡眠、精神等無明顯異常。荷瘤裸鼠重要臟器無明顯損傷,表明納米藥物體內(nèi)安全性良好。4、急性白血病原代細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn),DNR-PLGA-PLL-PEG-Tf誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的能力略高于單藥DNR,兩者無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)；但前者能增加白血病原代細(xì)胞內(nèi)藥物濃度,兩者有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。結(jié)論1、DNR-PLGA-PLL-PEG-Tf載藥納米粒形狀均勻,載藥量較高,其結(jié)構(gòu)中的PEG成分及顆粒表面連接的Tf使納米載藥顆粒具備了靶向給藥的能力。2、在體外DNR-PLGA-PLL-PEG-Tf對白血病細(xì)胞株K562細(xì)胞及急性白血病原代細(xì)胞,可以增加細(xì)胞內(nèi)化療藥物的累積。DNR-PLGA-PLL-PEG-Tf在體內(nèi)對K562細(xì)胞株荷瘤鼠的腫瘤生長有明顯抑制作用,且安全性良好。我們推測納米粒與腫瘤細(xì)胞特異性結(jié)合,通過受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用進(jìn)入腫瘤細(xì)胞內(nèi),隨著納米材料骨架的降解緩慢釋放化療藥物,同時納米載藥系統(tǒng)可以延長化療藥物在體內(nèi)的半衰期,增加藥物在體內(nèi)的蓄積時間,發(fā)揮抗腫瘤作用。3、DNR-PLGA-PLL-PEG-Tf通過下調(diào)凋亡調(diào)節(jié)蛋白Bcl-2/Bax比值及上調(diào)凋亡蛋白Caspase 9、Caspase 3及c-PARP的表達(dá),通過內(nèi)源性的凋亡途徑增加化療藥物誘導(dǎo)腫瘤組織細(xì)胞凋亡的能力。4、新型的納米載藥系統(tǒng)PLGA-PLL-PEG-Tf有可能成為化療藥物的載體,將化療藥物靶向作用于腫瘤,提高化療藥物的療效,減少藥物的副反應(yīng)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：東南大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R733

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本文編號：1533622