本文關(guān)鍵詞： 冠心病 蛋白質(zhì)組學(xué) 血小板因子4 分泌型卷曲相關(guān)蛋白1　出處：《北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院》2016年博士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：目的：冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病(coronary artery disease,CAD,冠心病)是最主要的心血管疾病之一,每年在全球約有8,140,000人死于冠心病,占到死亡總?cè)藬?shù)的16.8%。有關(guān)冠心病的病因和發(fā)病機(jī)制,目前有多種假說(shuō),但確切的機(jī)制尚未明確。文獻(xiàn)中有不少關(guān)于冠心病分子生物學(xué)機(jī)制的研究成果,這些發(fā)現(xiàn)為理解冠心病的發(fā)病機(jī)制提供了各種依據(jù)。利用全基因組關(guān)聯(lián)研究(genome wide association study,GWAS)的方法,至少已經(jīng)發(fā)現(xiàn)有100多處單核苷酸變異(single nucleotide variants,SNVs)與冠心病發(fā)病相關(guān)。與此同時(shí),也出現(xiàn)了不少研究血漿蛋白變化與某些可能與冠心病相關(guān)病理過(guò)程,如：炎癥反應(yīng)、血小板活化、凝血功能等關(guān)系的研究。然而,參與冠心病發(fā)病的蛋白質(zhì),尤其是在那些需要接受冠狀動(dòng)脈旁路移植術(shù)(coronary artery bypass grafting,CABG)的復(fù)雜冠脈病變中的蛋白質(zhì),其變化趨勢(shì)可能尤為復(fù)雜,目前也沒(méi)有相關(guān)的研究。本研究的目的在于借助同位素標(biāo)記相對(duì)和絕對(duì)定量技術(shù)(Isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ),將患有三支病變合并／不合并左主干病變、需要行CABG術(shù)的患者的血漿與非冠心病患者進(jìn)行比較,從而找出特殊表達(dá)的蛋白質(zhì)組。方法：從2013年4月22日至2015年9月24日,共有320名行冠脈造影檢查的受試者序貫入選本研究,并分為兩組：CABG組(160人,冠心病,行CABG術(shù))、Control組(對(duì)照組160人)。CABG組的患者均為經(jīng)冠脈造影證實(shí)存在三支病變合并/不合并左主干病變者；Control組的160名患者則經(jīng)冠脈造影檢查排除了冠心病的可能。入選者排除標(biāo)準(zhǔn)：二次心臟手術(shù)；神經(jīng)系統(tǒng)疾病(如：腦血管事件(CVA))；嚴(yán)重的肺部疾病(肺功能檢查提示暫不宜手術(shù)者)；腎功能衰竭(術(shù)前測(cè)定肌酐、尿素氮)；肝臟疾病(術(shù)前測(cè)定轉(zhuǎn)氨酶)；活動(dòng)性炎性疾��；術(shù)前有凝血性疾�。恍g(shù)前有房顫病史；甲狀腺功能異常。在進(jìn)行CABG手術(shù)前或造影術(shù)中,使用EDTA管收集血液標(biāo)本2ml。將收集到的血樣盡快用3,500rpm離心15min,將上層血漿小心分離至凍存管中,標(biāo)記編號(hào),并放置于-80℃的低溫冰箱內(nèi)。在兩組中分別選出隨機(jī)選出20例男性、20例女性的血漿標(biāo)本,共4組80例標(biāo)本。每例標(biāo)本取l00ul,按組混合為2ml的樣本,4份樣本分別標(biāo)記為：CABGM(CABG組,男性),CABGF(CABG組,女性),CM(control組,男性)及CF(control group,女性),用于iTRAQ檢測(cè)。使用Mascot搜索引擎完成蛋白檢索、定量分析。各組蛋白差異蛋白倍數(shù)大于1.2且p0.05時(shí),確定為差異蛋白。利用CABG組(n=120,男性=61)和control組(n=120,男性=60)的血漿標(biāo)本,選取差異蛋白中的6種進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(humanenzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)驗(yàn)證。結(jié)果：iTRAQ測(cè)定共檢測(cè)出544種蛋白,其中有35種蛋白上調(diào)表達(dá),41種蛋白下調(diào)表達(dá)(CABG vs.control,p0.05)。選取的6種蛋白質(zhì)中,凝血因子X(jué)III B鏈(coagulation factor XIII B chain,F13B)、血小板因子4 (platelet factor 4, PF4)及分泌型卷曲相關(guān)蛋白1 (secreted frizzled-related protein 1,sFRPl)上調(diào)表達(dá),維生素D結(jié)合蛋白(vitamin D-binding protein, DBP)、甘油醛-3-磷酸脫氫酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,G3PDH)及備解素(properdin,CFP)下調(diào)表達(dá)(p0.05)。在ELISA檢測(cè)中,CFP、DBP、PF4及sFRP1的血漿水平明顯上調(diào)(CABG vs.control,p0.05)。其中DBP、PF4和sFRPl均與冠心病、心肌梗死病史分別呈正相關(guān)關(guān)系(p0.05)。PF4行ROC檢測(cè),其曲線下面積為0.858,最佳工作點(diǎn)為1021.00,該點(diǎn)的敏感度為77.4%,特異度為93.3%(YI=0.707)。結(jié)論：本研究中共發(fā)現(xiàn)76種蛋白質(zhì)的表達(dá)在冠心病患者和非冠心病患者之間存在差異。參與凝血、血小板活化、補(bǔ)體激活及Wnt/fz信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的蛋白,可能在冠心病的發(fā)病過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用。PF4和sFRPl在復(fù)雜血管病變的冠心病患者中的表達(dá)明顯上調(diào)。ROC測(cè)試提示,PF4在臨床上可作為輔助診斷復(fù)雜血管病變冠心病的一種生物標(biāo)記物。
[Abstract]:Objective : Coronary artery disease ( CAD ) , coronary artery disease ( CAD ) , coronary artery disease ( CAD ) is one of the most important cardiovascular diseases . A total of 544 proteins were collected from two groups : CABGM ( CABG group , male ) , CABGF ( CABG group , female ) , CM ( control group , male ) and CF ( control group , female ) . Among the six proteins selected , coagulation factor XIII B chain , F13B , platelet factor 4 ( PF4 ) and secreted frizzled - related protein 1 ( sFRPI ) were up - regulated , vitamin D - binding protein ( DBP ) , glyceraldehyde - 3 - phosphate dehydrogenase ( G3pdh ) , and preparation ( properdin , cfp ) were down - regulated ( p . 05 ) . In ELISA assay , the plasma levels of cfp , DBP , PF4 and sFRP1 were significantly up - regulated ( CABG vs . control , p . 05 ) . Results : In this study , 76 kinds of protein expression in coronary heart disease ( CHD ) and non - coronary heart disease ( CHD ) were detected by ROC test . The results showed that the expression of PF4 and sFRPI plays an important role in the pathogenesis of coronary heart disease . Conclusion : The results showed that PF4 and sFRPI could be used as a biomarker for the diagnosis of coronary heart disease complicated with complex vascular disease .

【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R541.4

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本文編號(hào)：1520384