本文關(guān)鍵詞： 血小板凋亡 血小板反應(yīng)性 急性冠脈綜合征 經(jīng)皮冠脈介入治療 血小板微小 RNA microRNA-15b 血小板反應(yīng) 急性冠脈綜合征 經(jīng)皮冠脈介入治療 microRNA-15b 凋亡 巨核細(xì)胞 血小板　出處：《北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院》2015年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：急性冠狀動脈綜合征患者介入術(shù)后血小板反應(yīng)性與血小板相關(guān)microRNA差異表達(dá)背景：血小板P2Y12受體拮抗劑是急性冠脈綜合征(ACS)及經(jīng)皮冠狀動脈介入治療(PCI)患者的主要抗血小板藥物。然而,患者對血小板P2Y12受體拮抗劑氯吡格雷的反應(yīng)顯示出明顯的個體差異,部分患者表現(xiàn)為血小板高反應(yīng),易發(fā)生缺血事件；另有部分患者表現(xiàn)為血小板低反應(yīng),易發(fā)生出血事件,即同一種抗血小板藥物產(chǎn)生不同的抗血小板效應(yīng)稱之為血小板反應(yīng)多樣性。目前有關(guān)血小板反應(yīng)多樣性發(fā)生機(jī)制主要集中在遺傳學(xué)機(jī)制的研究。相關(guān)研究顯示：攜帶CYP2C19*2功能缺失等位基因的冠心病患者與未攜帶者相比,顯著增加了血小板高反應(yīng)及血栓性事件的風(fēng)險(xiǎn),然而CYP2C19單核苷酸多肽性(SNP)只能解釋5-12%血小板反應(yīng)個體差異,是否有其它遺傳學(xué)因素影響血小板的反應(yīng)性尚有待研究探索。近年來相關(guān)研究證實(shí)血小板中存在微小RNA (miRNAs),并可能參與調(diào)控血小板反應(yīng)性及功能。目的：篩選ACS行PCI患者的血小板miRNAs表達(dá)譜,并探索有血小板高反應(yīng)和低反應(yīng)的患者中差異表達(dá)的血小板miRNA。方法：連續(xù)入選PCI后接受阿司匹林和氯吡格雷雙聯(lián)抗血小板治療的ACS患者290例。在PCI術(shù)后第一天凌晨(12-24小時)和第二天凌晨(36-48小時)對初步入選的研究對象進(jìn)行兩次VerifyNow血小板功能檢測,將P2Y12反應(yīng)單位(PRU)≥300的患者納入血小板高反應(yīng)(HPR)組,將PRU170的患者納入血小板低反應(yīng)(LPR)組。制備患者的去白細(xì)胞血小板,利用人miRNA表達(dá)譜芯片檢測4名有血小板低反應(yīng)和4名有血小板高反應(yīng)的PCI術(shù)后患者血小板的miRNA表達(dá)譜。對其余17名血小板低反應(yīng)組的患者和22名血小板高反應(yīng)組的患者進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄-定量聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)驗(yàn)證芯片檢測結(jié)果。結(jié)果：研究初步入選了290例ACS行PCI患者,根據(jù)血小板功能檢測的結(jié)果,21例PRU170患者納入血小板低反應(yīng)組(LPR),26例PRU≥300的患者納入血小板高反應(yīng)組(HPR)。在入組患者的血小板中共陽性檢出420種miRNA。其中,miR-145和miR-15b在有血小板低反應(yīng)和高反應(yīng)的患者中差異表達(dá)(P0.05)。利用RT-PCR檢測17例有血小板低反應(yīng)和22例有血小板高反應(yīng)的患者血小板中miR-145和miR-15b的表達(dá)量。血小板低反應(yīng)者,其血小板miR-15b的表達(dá)量顯著高于血小板高反應(yīng)者(P=0.020)。將危險(xiǎn)因素校正后,血小板miR-15b的表達(dá)量是血小板低反應(yīng)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(比值比,118.10；95%置信區(qū)間(3.40,4102.96))。結(jié)論：(1)在急性冠脈綜合征經(jīng)皮冠脈介入治療的患者中,血小板表達(dá)的miRNA有420種；(2)血小板miR-15b的表達(dá)量與血小板反應(yīng)呈負(fù)相關(guān),即表現(xiàn)為血小板高反應(yīng)性組miR-15b表達(dá)量明顯降低,而在血小板低反應(yīng)性組miR-15b表達(dá)量則明顯增加；(3) miR-15b可能參與調(diào)控血小板功能。microRNA-15b作用于靶基因Bcl-2而促進(jìn)巨核細(xì)胞凋亡背景：在急性冠脈綜合征(ACS)經(jīng)皮冠脈介入治療(PCI)的患者中,血小板miR-15b在血小板低反應(yīng)者的表達(dá)量顯著高于血小板高反應(yīng)者。既往的研究證實(shí)Bcl-2是miR-15b的靶基因,miR-15b能夠通過抑制Bcl-2蛋白表達(dá)而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡。然而,miR-15b在血小板中的功能尚不清楚。血小板miRNA的功能研究多在巨核細(xì)胞系--人成巨核細(xì)胞白血病細(xì)胞MEG-01中進(jìn)行。目的：觀察轉(zhuǎn)染miR-15b模擬物或抑制劑后MEG-01細(xì)胞的凋亡比例和細(xì)胞中Bcl-2和procaspase-3蛋白的表達(dá)水平。方法：利用RNAiMAX轉(zhuǎn)染試劑將miR-15b模擬物或抑制劑轉(zhuǎn)染入MEG-01細(xì)胞中,培養(yǎng)36小時后收集細(xì)胞做western blot檢測蛋白表達(dá)水平或流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡。結(jié)果：在MEG-01細(xì)胞中,轉(zhuǎn)染miR-15b模擬物導(dǎo)致Bcl-2蛋白表達(dá)量減少24%,轉(zhuǎn)染miR-15b抑制劑導(dǎo)致Bcl-2蛋白表達(dá)量增加80%(P=0.018；P=0.019)。另外,轉(zhuǎn)染miR-15b模擬物導(dǎo)致procaspase-3蛋白表達(dá)量減少42%,而轉(zhuǎn)染miR-15b抑制劑導(dǎo)致Bcl-2蛋白表達(dá)量增加30%(P=0.006；P=0.021)。轉(zhuǎn)染miR-15b模擬物能夠促進(jìn)MEG-01細(xì)胞中膜聯(lián)蛋白(Annexin Ⅴ)和碘化丙啶(PI)染色的凋亡事件增加130%,線粒體膜電位(△Ψm)去極化的細(xì)胞增加120%。結(jié)論：miR-15b通過作用于靶基因Bcl-2而促進(jìn)巨核細(xì)胞凋亡,提示miR-15b可能在血小板中有促凋亡的生物學(xué)功能。急性冠狀動脈綜合征患者介入術(shù)后血小板凋亡率與血小板反應(yīng)性的關(guān)聯(lián)研究背景：在急性冠脈綜合征(ACS)經(jīng)皮冠脈介入治療(PCI)的患者中,血小板miR-15b在血小板低反應(yīng)者的表達(dá)量顯著高于血小板高反應(yīng)者。miR-15b通過作用于靶基因Bcl-2而促進(jìn)巨核細(xì)胞凋亡,提示miR-15b可能在血小板中有促凋亡的生物學(xué)功能。然而,ACS行PCI患者的血小板凋亡率與血小板反應(yīng)性之間的關(guān)聯(lián)尚不清楚。目的：探討ACS行PCI患者的血小板凋亡率與血小板反應(yīng)性之間的關(guān)聯(lián)。方法：連續(xù)入選PCI后接受阿司匹林和氯吡格雷雙聯(lián)抗血小板治療的ACS患者51例。在PCI后進(jìn)行VerifyNow血小板功能檢測和流式細(xì)胞術(shù)檢測血小板凋亡率。利用ABT-737--一種類BH3抑制劑在體外誘導(dǎo)患者血小板凋亡,隨后采用光學(xué)比濁法檢測誘導(dǎo)凋亡后血小板的聚集率。制備患者的去白細(xì)胞血小板,用western blot檢測蛋白表達(dá)水平。結(jié)果：在入選的51例ACS行PCI的患者中,血小板凋亡率與血小板反應(yīng)性呈負(fù)相關(guān)(r=-0.643,P0.001)。線性回歸分析顯示,血小板凋亡率與血小板反應(yīng)性呈獨(dú)立負(fù)相關(guān)(標(biāo)準(zhǔn)化回歸系數(shù)β=-0.643,P0.001)。ROC曲線分析顯示,血小板凋亡率≤6.64%是預(yù)測PCI術(shù)后ACS患者血小板反應(yīng)_240的最佳值,靈敏度70.8%,特異度65.0%。ROC曲線下面積為0.715(95%置信區(qū)間(0.564,0.866),P=0.015)。ACS行PCI患者的富血小板血漿與ABT-737 (2.5μM,5μM和10gM)在37℃孵育2小時后,流式檢測血小板凋亡率分別達(dá)到了11.4%,19.9%和46.8%(P0.001)。ABT-737體外干預(yù)使ACS患者PCI后的血小板聚集率隨濃度梯度下降(42.4%,38.5%和29.6%,P0.001)。另外,有血小板高反應(yīng)的ACS行PCI患者血小板中Bcl-2和procaspase-3蛋白的表達(dá)量較血小板低反應(yīng)者分別高出130%和60%(P=0.003,P=0.003)。結(jié)論：在急性冠脈綜合征經(jīng)皮冠脈介入治療的患者中,血小板凋亡率與血小板反應(yīng)性呈負(fù)相關(guān)。體外誘導(dǎo)患者血小板凋亡將降低患者血小板反應(yīng)性。血小板miR-15b通過促進(jìn)凋亡而負(fù)性調(diào)控患者的血小板反應(yīng)性。血小板凋亡可能為PCI術(shù)后克服患者血小板高反應(yīng)性提供新的抗血小板治療靶點(diǎn)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R541.4

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：1510082