發(fā)布時(shí)間：2017-12-29 09:22

  本文關(guān)鍵詞：MiR-486通過靶向HAT1調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞膽固醇流出　出處：《南華大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：[目的]動(dòng)脈粥樣硬化(Atherosclerosis,As)性疾病的罹患率以及致死率現(xiàn)如今已經(jīng)超過癌癥,位居中國人群死因的第一名,嚴(yán)重地威脅著人類的健康。三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1(ATP binding cassette transporter A1,ABCA1)是一種在介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)膽固醇流出的過程中發(fā)揮著重要作用的關(guān)鍵蛋白,該蛋白具有抗As的作用。組蛋白乙�；D(zhuǎn)移酶1(Histone Acetyltransferase 1,HAT1)是一種能夠促進(jìn)組蛋白乙�；拿�。研究顯示,As的發(fā)生發(fā)展受到許多方面的因素影響,包括表觀遺傳學(xué),但是核心組蛋白乙酰化對(duì)ABCA1的轉(zhuǎn)錄和表達(dá),細(xì)胞內(nèi)膽固醇的流出,泡沫細(xì)胞的形成及As發(fā)生發(fā)展的機(jī)理尚未闡明。本研究以THP-1巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞為研究對(duì)象,探討表觀遺傳學(xué)因素對(duì)ABCA1的轉(zhuǎn)錄和表達(dá),細(xì)胞內(nèi)膽固醇流出情況及其在細(xì)胞水平對(duì)As發(fā)生發(fā)展的影響。[方法]使用熒光定量PCR(Real-Time PCR)檢測(cè)THP-1巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞ABCA1的m RNA水平,Western Blot檢測(cè)ABCA1、HAT1的蛋白表達(dá)以及核心組蛋白H4第5位賴氨酸(H4K5)和第12位賴氨酸(H4K12)的乙酰化水平;通過在線生物信息學(xué)網(wǎng)站和熒光素酶報(bào)告基因分析預(yù)測(cè)并判斷mi R-486的結(jié)合靶點(diǎn);分別將mi R-486 mimics和mi R-486inhibitor轉(zhuǎn)染至THP-1巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞后,使用液體閃爍計(jì)數(shù)儀(Liquid Scintillation Counter)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)膽固醇流出的情況,高效液相色譜(HPLC)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)膽固醇的含量。[結(jié)果]生物信息學(xué)在線網(wǎng)站預(yù)測(cè)結(jié)果和熒光素酶報(bào)告基因分析提示,mi R-486直接靶向HAT1 3’UTR,下調(diào)其m RNA水平和蛋白表達(dá);當(dāng)HAT1過表達(dá)時(shí),THP-1巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞中ABCA1的m RNA水平和蛋白水平均升高,同時(shí),H4K5和H4K12乙酰化水平升高;將mi R-486 mimics轉(zhuǎn)染至THP-1巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞后,再過表達(dá)HAT1,ABCA1的m RNA水平和蛋白水平與過表達(dá)mi R-486時(shí)相比較沒有明顯的變化;液體閃爍計(jì)數(shù)儀和高效液相色譜分析結(jié)果顯示,在THP-1巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞中,mi R-486具有抑制細(xì)胞內(nèi)膽固醇流出,促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)膽固醇蓄積的作用。[結(jié)論]在THP-1巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞中,mi R-486通過靶向HAT1,降低核心組蛋白乙�；�,抑制ABCA1介導(dǎo)的膽固醇流出。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R543.5

【參考文獻(xiàn)】

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1 唐艷艷;陳五軍;路倩;唐朝克;;ABCA1的胞內(nèi)運(yùn)輸及功能研究新進(jìn)展[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;2013年06期

2 王和峰;翟純剛;龐文會(huì);王晨;楊敏;趙凱;李大慶;張運(yùn);李繼福;陳文強(qiáng);;PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路在巨噬細(xì)胞自噬及動(dòng)脈粥樣硬化斑塊不穩(wěn)定中的作用[J];中國病理生理雜志;2013年03期

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本文編號(hào)：1349709