本文關(guān)鍵詞：高蛋氨酸飲食對大鼠主動脈平滑肌細胞CCL5和CCR5表達的影響及機制　出處：《新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：背景動脈粥樣硬化(atherosclerosis, AS)是目前發(fā)病率逐年攀升的心血管疾病至關(guān)重要的病理基礎(chǔ),已成為一些發(fā)達國家和我國主要的死亡原因,嚴重危害著人們的健康。近年來,血漿同型半胱氨酸(homocysteine, Hcy)水平被視為導(dǎo)致AS的一個新提出的、關(guān)鍵地非傳統(tǒng)危險因素,日趨受到人們關(guān)注,但其具體致病機制還不清楚。因此,深入探討長期高蛋氨酸(DL-Methionine, Met,又稱甲硫氨酸)飲食引發(fā)的高同型半胱氨酸血癥(hyperhomocysteinemia, HHcy)所導(dǎo)致AS的機制,可以為將來臨床上通過降低血漿Hcy水平來治療AS提供理論依據(jù)和新的治療思路。目的觀察長期高蛋氨酸飲食能否引起HHcy,而HHcy能否通過核轉(zhuǎn)錄因子-κB (NF-κB)傳導(dǎo)通路誘導(dǎo)大鼠胸主動脈平滑肌細胞表達CC趨化因子配體5(CC chemokine ligand 5,CCL5)及其受體CCR5 (chemoattractant cytokines receptor 5)的變化,探討HHcy與AS的相關(guān)性及其致病機制。并觀察葉酸聯(lián)合VitB12用藥和瑞舒伐他汀對高蛋氨酸飲食引起AS的治療效果,為臨床干預(yù)提供理論依據(jù)。方法清潔級、健康、8周齡SD雄性大鼠40只,體重180～220g,適應(yīng)性喂養(yǎng)7天后被隨機分為4組：正常對照組(10只)、高蛋氨酸(Met)飲食組(10只)、葉酸聯(lián)合VitB12治療組(10只)和瑞舒伐他汀治療組(10只)。正常對照組喂食基礎(chǔ)飼料；高蛋氨酸飲食組喂食的基礎(chǔ)飼料中增加1.7%的蛋氨酸；瑞舒伐他汀治療組應(yīng)用高蛋氨酸飲食組飼料喂食4周后加用每日5mg/kg瑞舒伐他汀灌胃；葉酸聯(lián)合VitB12治療組應(yīng)用高蛋氨酸飲食組飼料喂食4周后加用每日3mg/kg葉酸和15ug/kg VitB12灌胃。各組SD大鼠均按實驗設(shè)計分別喂養(yǎng)至實驗12周末,以酶法(一步終點比色法)檢驗各組大鼠血清中甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)濃度；用高效液相色譜方法檢驗每組大鼠血漿Hcy水平；觀察蘇木素伊紅染色、油紅“O”染色后胸主動脈在光鏡下的病理學(xué)改變,并觀察電子顯微鏡下其超微結(jié)構(gòu)變化；通過免疫組化方法檢測各組大鼠主動脈平滑肌細胞中趨化因子CCL5及受體CCR5的蛋白表達情況；免疫組化染色后,使用實時逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)檢驗各組大鼠動脈平滑肌細胞中CCL5、CCR5、核轉(zhuǎn)錄因子-κB (nuclear factor-kappaB, NF-κB)的mRNA表達。結(jié)果1.血脂濃度 每組大鼠的血漿總膽固醇濃度、甘油三脂濃度均無明顯差異(P0.05)。2.血漿同型半胱氨酸(Hcy)濃度 高蛋氨酸飲食組血漿Hcy含量(80.79±23.86mmol/L)明顯高于正常對照組(9.47±4.55 mmol/L, P0.05)和治療組(53.97±12.24 mmol/L,37.88±4.84mmol/L,P0.05)。兩治療組中,葉酸聯(lián)合VitB12治療組血漿Hcy值(37.88±4.84mmol/L)顯著低于瑞舒伐他汀治療組(53.97±12.24 mmol/L,P0.05)。3.大鼠胸主動脈的病理改變①HE染色(光鏡下觀察)：正常對照組胸主動脈表現(xiàn)為內(nèi)皮細胞連續(xù)且規(guī)整,內(nèi)彈力膜基本完整,中膜平滑肌細胞無增生且排列整齊。高蛋氨酸(Met)飲食組大鼠胸主動脈的變化為其內(nèi)膜損傷,內(nèi)皮細胞壞死、脫落,中膜平滑肌細胞疏松、紊亂,內(nèi)膜下有泡沫細胞形成。葉酸聯(lián)合VitB12組和瑞舒伐他汀組主動脈壁病理形態(tài)學(xué)變化介于正常對照組和高Met飲食組之間；②油紅“O”染色(光鏡下觀察)：正常對照組、葉酸聯(lián)合VitB12組和瑞舒伐他汀組胸主動脈在油紅“O”染色之后無明顯差別,未染色。高Met飲食組局部主要表現(xiàn)為內(nèi)膜下紅染；③超微結(jié)構(gòu)觀察(電子顯微鏡下)：高Met飲食組表現(xiàn)為胸主動脈內(nèi)膜局部損傷,可見內(nèi)皮細胞內(nèi)空泡增多。平滑肌細胞排列紊亂,線粒體明顯水腫,并可見較多中膜平滑肌細胞由收縮型向合成型轉(zhuǎn)變。正常對照組的血管內(nèi)皮細胞及平滑肌細胞沒有上述改變。瑞舒伐他汀組與葉酸聯(lián)合VitB12組病變介于高Met飲食組與正常對照組之間。4.免疫組織化學(xué)染色血管平滑肌細胞中CCL5和CCR5蛋白的陽性表達為粗細不均勻的棕黃色顆粒,局限于細胞質(zhì)內(nèi)。CCL5蛋白在高Met飲食組(139.50±15.40)的表達較強,顯著高于正常對照組(112.25±10.75,P0.05)和兩治療組(114.05±10.90,125.89±11.89,P0.05),其在葉酸聯(lián)合VitB12治療組(125.89±11.89)的表達高于瑞舒伐他汀治療組(114.05±10.90,P0.05)。CCR5蛋白在高Met飲食組(139.12±7.71)表達較強,明顯強于正常對照組(125.41±9.93,P0.05)和兩個治療組(121.11±9.15,130.59±8.29,P0.05),在治療組中又以葉酸聯(lián)合VitB12治療組(130.59±8.29)表達較高,強于瑞舒伐他汀治療組(121.11±9.15,P0.05)。5.RT-PCR CCL5 mRNA在高Met飲食組(0.93±0.02)表達高于正常對照組(0.45±0.00,P0.05)和治療組(0.69±0.01,0.87±0.00,P0.05),在葉酸聯(lián)合VitB12組(0.87±0.00)中的表達高于瑞舒伐他汀組(0.69±0.01,P0.05)。CCR5 mRNA在高Met飲食組(1.97±0.36)表達較強,明顯高于正常對照組(1.02±0.04,P0.05)和兩個治療組(1.12±0.23,1.53±0.41,P0.05),在葉酸聯(lián)合VitB12治療組(1.53±0.41)中的表達高于瑞舒伐他汀治療組(1.12±0.23,P0.05)。NF-kB P56在高Met飲食組(2.16±0.43)表達較強,明顯高于正常對照組(1.35±0.06,P0.05)和兩個治療組(1.39±0.18,1.73±0.26,P0.05),在葉酸聯(lián)合VitB12治療組(1.73±0.26)中的表達高于瑞舒伐他汀治療組(1.39±0.18,P0.05)。結(jié)論1.HHcy可能通過NF-κB傳導(dǎo)通路使動脈壁平滑肌細胞表達較高水平的趨化因子CCL5及其受體CCR5,促進AS的發(fā)生發(fā)展。2.瑞舒伐他汀和葉酸聯(lián)合VitB12均能減輕HHcy所致的AS病變,但在抑制趨化因子生成方面瑞舒伐他汀優(yōu)于葉酸聯(lián)合VitB12。
【學(xué)位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R543.5

【參考文獻】

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本文編號：1332220