本文關(guān)鍵詞：參附益心顆粒改善野百合堿誘導(dǎo)肺動(dòng)脈高壓大鼠氧化應(yīng)激水平的研究

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【摘要】：研究背景:肺動(dòng)脈高壓(pulmonary arterial hypertension,PAH)是一類預(yù)后不良的肺血管疾病,它的主要特征為肺動(dòng)脈壓力增高,在疾病形成過程中可伴或不伴有肺動(dòng)脈病變,可以獨(dú)立發(fā)生,也可為并發(fā)癥,還可為一組臨床綜合征,但最終往往演變?yōu)橛倚乃ソ吆退劳觥Ｆ浒l(fā)病機(jī)制相對(duì)復(fù)雜,目前尚未完全闡明,主要包括氧化應(yīng)激、缺氧、基因突變、遺傳、炎癥、神經(jīng)體液以及離子通道等多個(gè)方面。近年來發(fā)現(xiàn)氧化應(yīng)激與肺動(dòng)脈高壓關(guān)系極其密切,并逐漸成為其機(jī)制探討研究的焦點(diǎn)。氧化應(yīng)激(oxidative stress)是指在有害條件影響機(jī)體時(shí),體內(nèi)氧自由基產(chǎn)生過多,機(jī)體對(duì)其消除能力相對(duì)有限,最終導(dǎo)致活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)在體內(nèi)蓄積,引起一系列氧化損傷的過程。乙酰半胱氨酸作為經(jīng)典的抗氧化劑,可在氧化還原反應(yīng)中生成還原型谷胱甘肽,具有極強(qiáng)的肺內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)功能,目前廣泛用于肺血管相關(guān)疾病的治療,因此,將其作為本實(shí)驗(yàn)的陽性對(duì)照藥物。隨著對(duì)肺動(dòng)脈高壓發(fā)病機(jī)制的深入研究,目前已有多種新型靶向治療藥物相繼問世,主要有磷酸二酯酶抑制劑、內(nèi)皮素受體拮抗劑、可溶性鳥苷酸環(huán)化酶激活劑、前列環(huán)素衍生物以及鈣離子通道阻滯劑等。這些藥物療效雖肯定,但長期服用副作用大,經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)重,且并不是所有類型的肺動(dòng)脈高壓都適用。介入治療和外科手術(shù)治療也因其手術(shù)風(fēng)險(xiǎn)較大、并發(fā)癥較多,因此也只在必要時(shí)應(yīng)用。而中藥作為當(dāng)今發(fā)展的新興產(chǎn)業(yè),以中草藥為原料,藥性平和,藥效持久。因此,利用中醫(yī)中藥治療肺動(dòng)脈高壓的思路引起了廣泛關(guān)注。參附益心顆粒是在孫教授經(jīng)驗(yàn)方的基礎(chǔ)上加以創(chuàng)新,主要由人參、益母草、桂枝、丹參、葶藶子等組成,起到活血化瘀、益氣溫陽、利水去飲的作用。多項(xiàng)前期動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究及臨床觀察已證實(shí)參附益心顆粒不僅能改善心力衰竭及抑制心衰所致心肌肥厚,還能顯著緩解肺動(dòng)脈高壓大鼠肺動(dòng)脈壓力,增加心輸出量和心指數(shù),改善肺動(dòng)脈高壓。但參附益心顆粒對(duì)肺動(dòng)脈高壓的干預(yù)作用是否是通過改善其氧化應(yīng)激水平尚未得到完全認(rèn)識(shí)。目的:本研究擬通過注射野百合堿構(gòu)建SD大鼠肺動(dòng)脈高壓模型,探討參附益心顆粒對(duì)野百合堿所致肺動(dòng)脈高壓大鼠氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用及其作用機(jī)制,為臨床應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。方法:1、將Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠50只,隨機(jī)分為5組(按隨機(jī)數(shù)字表法),每組10只:正常對(duì)照組、PAH模型組、參附益心顆粒低劑量組、參附益心顆粒高劑量組、N-乙酰L半胱氨酸組。除正常對(duì)照組給予等量生理鹽水頸背部皮下注射外,其余4組均給予50mg/kg野百合堿注射,正常飼養(yǎng)28天。28天后正常對(duì)照組、PAH模型組均每日給予2ml生理鹽水灌胃;參附益心顆粒低劑量組每日給予參附益心顆粒5.475g/kg灌胃、參附益心顆粒高劑量組每日給予參附益心顆粒21.9g/kg灌胃、N-乙酰L半胱氨酸組每日給予N-乙酰L半胱氨酸300mg/kg灌胃。4周后達(dá)到實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)。2、采用經(jīng)頸外靜脈右心導(dǎo)管法測定右心室收縮壓(RVSP)、平均肺動(dòng)脈壓力(m PAP);計(jì)算右心室/左心室+室間隔,即右心室肥厚指數(shù)。摘除心臟后,通過室間隔將心室分為右心室、左心室+室間隔,分別將二者稱重后計(jì)算比值。取左肺下葉肺組織進(jìn)行石蠟包埋切片后,行常規(guī)HE染色,在電子顯微鏡下觀察肺組織基本病理變化情況,攝片,采用圖像分析系統(tǒng)分析后計(jì)算各組肺小動(dòng)脈管壁厚/管外徑比(WT%)和壁面積/管面積比(WA%);行免疫組化α-SMA抗體染色,以觀察血管肌化程度。采用硝酸鹽還原酶法測定肺勻漿總一氧化氮(NO)濃度。ELISA方法測定肺勻漿8-異前列腺素、3-硝基酪氨酸含量。TBA法測定肺勻漿中丙二醛(MDA)含量。WST-1法測定肺勻漿中超氧化物歧化酶(SOD)的活性。Western blot法檢測肺勻漿中NADPH氧化酶的催化亞基NOX_2和NOX_4的蛋白表達(dá)水平。采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析,各組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(sx±)表示。兩組間進(jìn)行比較用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn),多組間進(jìn)行比較用one-way ANOVA分析,組間兩兩進(jìn)行比較用NSK檢驗(yàn)。P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1、右心導(dǎo)管測得各造模組右心室收縮壓(RVSP)、平均肺動(dòng)脈壓(m PAP)、右心室肥厚指數(shù)(RVHI)均高于正常對(duì)照組,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。說明大鼠肺動(dòng)脈高壓已經(jīng)形成,造模成功。參附益心顆粒治療組與PAH模型組相比,RVSP、m PAP、RVHI均明顯降低,且與中藥劑量的增加成負(fù)相關(guān),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2、PAH模型組大鼠與正常對(duì)照組比較,其肺血管管腔狹窄程度、平滑肌增生程度、管腔肌化度非常明顯;而參附益心顆粒治療組與PAH模型組比較,其肺血管管腔狹窄程度、平滑肌增生程度、管腔肌化程度均明顯改善,且隨著中藥劑量的增加,改善越明顯。3、大鼠肺組織總NO檢測結(jié)果提示,PAH模型組大鼠與正常對(duì)照組相比,NO含量顯著降低;參附益心顆粒治療組與PAH模型組比較,NO含量明顯增加(P0.01),且高劑量組效果更好,優(yōu)于抗氧化劑N-乙酰L半胱氨酸組(P0.05)。4、PAH模型組大鼠肺組織8-異前列腺素、MDA、3-硝基酪氨酸與正常對(duì)照組比較,各組值均增大,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。參附益心顆粒治療組與PAH模型組相比,8-異前列腺素、MDA、3-硝基酪氨酸的含量均顯著降低,且增加藥物劑量后,降低程度更明顯,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。5、PAH模型組大鼠與正常對(duì)照組相比,抗氧化酶SOD活性明顯降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。參附益心顆粒治療組與PAH模型組比較,SOD活性明顯增高(P0.05),且高劑量組療效更優(yōu)。而NADPH氧化酶催化亞基NOX_2和NOX_4蛋白的表達(dá)水平PAH模型組大鼠與正常對(duì)照組相比,蛋白表達(dá)上調(diào)。參附益心顆粒治療組與模型組相比,NOX_2和NOX_4的蛋白表達(dá)均明顯降低,且與中藥劑量的增加成負(fù)相關(guān),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1、參附益心顆�？蓽p輕野百合堿誘導(dǎo)肺動(dòng)脈高壓大鼠平均肺動(dòng)脈壓和右心室收縮壓,改善右心室肥厚和肺血管重構(gòu)改變。2、參附益心顆�？赡芡ㄟ^增加肺組織內(nèi)NO濃度來調(diào)節(jié)血管舒縮失衡,改善肺動(dòng)脈高壓。3、參附益心顆�？赡芡ㄟ^降低氧化應(yīng)激損傷,下調(diào)氧化酶蛋白的表達(dá),增加抗氧化因子的活性來改善肺動(dòng)脈高壓。
【學(xué)位授予單位】：河南中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R544.1

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