發(fā)布時(shí)間：2017-12-01 14:17

  本文關(guān)鍵詞：丹蔞片對(duì)雷帕霉素誘導(dǎo)的人主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的保護(hù)機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 人主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞 丹蔞片 雷帕霉素 凋亡相關(guān)蛋白 p-Akt

【摘要】：目的探討丹蔞片對(duì)雷帕霉素誘導(dǎo)的人主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的影響,并試探明其可能的機(jī)制。方法1.用不同劑量的雷帕霉素,依次作用在HAECs上,四甲基偶氮唑鹽法(MTT法)測(cè)定HAECs細(xì)胞的增殖抑制率;通過(guò)計(jì)算細(xì)胞增殖抑制率、繪制增殖抑制曲線等,綜合分析雷帕霉素對(duì)HAECs增殖活性的影響。2.通過(guò)不同濃度的含藥兔血清與雷帕霉素共同作用于HAECs,四甲基偶氮唑鹽法(MTT法)測(cè)定HAEC細(xì)胞的抑制率變化,摸索出適宜的含藥血清濃度進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。3.運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率,觀察含藥血清對(duì)雷帕霉素作用下細(xì)胞凋亡率的變化。4.采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)及蛋白免疫印跡技術(shù)檢測(cè)對(duì)細(xì)胞內(nèi)的相關(guān)凋亡(Caspase-3,Bax,Bcl-2)基因及蛋白表達(dá)的影響,運(yùn)用蛋白免疫印跡技術(shù)檢測(cè)PI3K/Akt通路中p-Akt蛋白表達(dá)的變化。結(jié)果1.雷帕霉素對(duì)HAECs有明顯的抑制細(xì)胞生長(zhǎng)的作用,與陰性對(duì)照組的比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P㩳0.05),并且成劑量和時(shí)間依賴(lài)性。2.各組用不同濃度含藥血清處理后,在12h、24h、48h時(shí)間點(diǎn),含5%、15%、20%濃度空白兔血清的雷帕霉素組與相對(duì)應(yīng)空白組相比,細(xì)胞存活率降低,且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),5%、15%濃度丹蔞片組與雷帕霉素組相比,細(xì)胞存活率上升,且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),但與可定組細(xì)胞存活率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),5%、15%混合組與可定組和丹蔞片組相比細(xì)胞存活率升高,且均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。15%濃度含藥血清作用下各組細(xì)胞存活率最高,含藥血清濃度與細(xì)胞存活率之間不存在劑量依賴(lài)性。3.各組選用1ng/ml濃度雷帕霉素作用下,15%含藥血清濃度處理細(xì)胞24h,流式細(xì)胞儀檢測(cè)凋亡率,丹蔞片組較雷帕霉素組凋亡率降低(18.23±1.36vs23.23±0.76,P0.05),丹蔞片組與可定組之間無(wú)明顯差別(P0.05),混合組與丹蔞片、可定組相比,凋亡率降低(14.87±0.61vs18.23±1.36,P0.05;14.87±0.61vs17.48±0.66,P0.05)。4.熒光定量PCR檢測(cè)1ng/ml濃度雷帕霉素作用下15%含藥血清濃度處理細(xì)胞24h后相關(guān)凋亡基因表達(dá),丹蔞片組與雷帕霉素組相比Bax(4.46±0.45vs5.24±0.56)、Caspase-3(2.37±0.25vs3.96±0.22)表達(dá)量減少(P0.05),Bcl-2表達(dá)量增加(0.58±0.06vs0.47±0.08,P0.05),丹蔞片組與可定組之間Bax、Bcl-2、Caspase-3表達(dá)量均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);混合組與丹蔞片相比Bax(2.88±0.47vs4.46±0.45,P0.05)、Caspase-3(1.63±0.28vs2.37±0.25,P0.05)表達(dá)量降低,Bcl-2表達(dá)量增加(0.83±0.08vs0.58±0.06,P0.05)。5.Western-blot檢測(cè)1ng/ml濃度雷帕霉素作用下15%含藥血清濃度處理細(xì)胞24h后相關(guān)凋亡蛋白表達(dá)及p-Akt蛋白表達(dá),丹蔞片組與雷帕霉素組相比Bax(63.26±5.06vs77.92±5.28)、Caspase-3(112.24±4.81vs147.14±7.94)表達(dá)量減少(P0.05),Bcl-2表達(dá)量增加(34.13±13.23vs11.66±10.40,P0.05),丹蔞片組與可定組之間Bax、Bcl-2、Caspase-3表達(dá)量均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)�；旌辖M與丹蔞片組相比Bax(31.76±5.75vs63.26±5.06)、Caspase-3(76.25±3.88vs112.24±4.81)表達(dá)量減少(P0.05),Bcl-2表達(dá)量增加(63.32±11.68vs34.13±13.23,P0.05)。丹蔞片組與雷帕霉素組相比,p-Akt表達(dá)量減少(134.56±20.21vs97.90±15.71,P0.05),混合組與丹蔞片組相比p-Akt表達(dá)量減少(58.83±6.09vs97.90±15.71,P0.05),丹蔞片組與可定組相比無(wú)明顯差異(97.90±15.71vs83.15±9.99,P0.05)。結(jié)論1.雷帕霉素對(duì)HAECs有促凋亡作用,且成劑量及時(shí)間依賴(lài)性,劑量越大,作用時(shí)間越長(zhǎng),對(duì)細(xì)胞抑制率越大。2.丹蔞片能抑制雷帕霉素誘導(dǎo)的HAECs凋亡,在雷帕霉素為1ng/ml時(shí),15%濃度含藥血清抑制凋亡效果最佳。3.丹蔞片能上調(diào)抗凋亡基因Bcl-2表達(dá),下調(diào)促凋亡基因Bax、caspase-3表達(dá)量,抑制雷帕霉素誘導(dǎo)的HAECs凋亡。4.丹蔞片可能通過(guò)調(diào)節(jié)p-Akt的表達(dá),調(diào)控抗凋亡基因Bcl-2與促凋亡基因Bax、caspase-3表達(dá)。
【學(xué)位授予單位】：河南中醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R54

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 洪明理,李云生,付啟鋒,李淑賢;實(shí)驗(yàn)性主動(dòng)脈內(nèi)皮免疫損傷的電子顯微鏡觀察[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)影像技術(shù);1986年01期

2 王泰玲,尹鴻軫,姚大林,王石麟,董民達(dá),潘淑琴,徐晶華,潘力,劉玉章;前列腺素E_1對(duì)急性高脂血癥家兔主動(dòng)脈內(nèi)皮屏障的保護(hù)作用[J];白求恩醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1986年02期

3 沈傳陸,張彩英;家兔主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)法的改進(jìn)[J];上海第二醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1991年01期

4 洪明理,李云生,傅治鋒,崔萍,李淑賢;免疫損傷引起家兔實(shí)驗(yàn)性主動(dòng)脈內(nèi)皮通透性增強(qiáng)的電鏡觀察[J];生理科學(xué);1984年Z1期

5 洪明理;李云生;付治峰;崔萍;李淑賢;;動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)病機(jī)理的超微結(jié)構(gòu)研究N免疫損傷引起家兔實(shí)驗(yàn)性主動(dòng)脈內(nèi)皮通透性增強(qiáng)的電鏡觀察[J];電子顯微學(xué)報(bào);1984年03期

6 魏任冰,鄧漪平;不同年齡主動(dòng)脈內(nèi)皮高脂血癥性損傷的掃描電鏡觀察[J];中山醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1988年01期

7 陳劍雄，李立新，，黃紅林，廖端芳，余麟;氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)豬主動(dòng)脈內(nèi)皮粘附分子的表達(dá)及血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑的阻遏作用[J];中國(guó)動(dòng)脈硬化雜志;1995年02期

8 張紅旗;鄺國(guó)璧;;猴主動(dòng)脈內(nèi)皮的掃描電鏡觀察[J];新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1993年04期

9 劉云淑;;梔子果實(shí)提取物對(duì)離體牛主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖的刺激作用[J];國(guó)外醫(yī)藥(植物藥分冊(cè));1991年03期

10 李永紅,董果雄,郭明磊,張社華,李琰;氯沙坦對(duì)大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮損傷后內(nèi)膜厚度影響[J];青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2000年04期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 付云峰;熊燕;付四海;;卡托普利對(duì)同型半胱氨酸損傷大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮的保護(hù)作用[A];湖南省生理科學(xué)會(huì)新世紀(jì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要匯編[C];2002年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 李亮;丹蔞片對(duì)雷帕霉素誘導(dǎo)的人主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的保護(hù)機(jī)制研究[D];河南中醫(yī)學(xué)院;2015年

2 凌宏艷;羅格列酮對(duì)胰島素抵抗大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮功能的保護(hù)作用及機(jī)制[D];南華大學(xué);2005年

3 孫婷茹;纈沙坦對(duì)大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮球囊損傷后Toll樣受體4表達(dá)變化的影響[D];青島大學(xué);2014年

本文編號(hào)：1241391