本文關(guān)鍵詞：ClC-3氯通道蛋白在腎上腺素能受體激動所致心肌肥厚中的作用研究

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【摘要】：目的:獲得Cl C-3氯通道蛋白參與體內(nèi)外腎上腺素能受體激動所致心肌肥厚的實驗證據(jù)。方法:(1)腎上腺素能受體激動劑腹腔注射構(gòu)建心肌肥厚的小鼠模型。(2)小動物超聲心動圖檢測小鼠室間隔,心室前壁厚度,獲得小鼠心臟指數(shù)(HW/BW),結(jié)合心臟組織HE染色分析確定小鼠心肌肥厚的程度。(3)免疫組織化學(xué)法檢測小鼠心肌Cl C-3蛋白的表達(dá)變化。(4)胰蛋白酶消化法原代培養(yǎng)乳鼠心肌細(xì)胞,視頻監(jiān)視其搏動情況。(5)實時熒光定量PCR檢測細(xì)胞和小鼠心臟心肌肥厚標(biāo)志基因心房利鈉因子(ANF)及Cl C-3 m RNA的變化。(6)蛋白免疫印跡技術(shù)(western blot)檢測細(xì)胞和小鼠心臟Cl C-3蛋白表達(dá)的變化。(7)Countstar自動細(xì)胞計數(shù)分析儀檢測分析細(xì)胞體積的變化。結(jié)果:(1)成功構(gòu)建腎上腺素能受體激動劑誘導(dǎo)的心肌肥厚模型。超聲心動圖顯示單獨(dú)給予β腎上腺素能受體激動劑異丙腎上腺素(ISO)或α腎上腺素能受體激動劑去甲腎上腺素(NE)處理的小鼠室間隔增厚,心室前壁厚度增加;小鼠心臟指數(shù)(HW/BW)亦明顯升高;HE染色結(jié)果顯示:ISO、NE處理組較對照組心肌結(jié)構(gòu)松散、膠原纖維含量增多、心肌纖維明顯增粗,肌原纖維橫截面積明顯增大、細(xì)胞核聚集且增大。(2)與對照組相比,ISO和NE實驗組小鼠心肌肥厚標(biāo)志基因ANF表達(dá)量增加,而Cl C-3的m RNA表達(dá)量減少,免疫組化和蛋白免疫印記結(jié)果同樣顯示Cl C-3氯通道蛋白的表達(dá)量降低。(3)β腎上腺素能受體拮抗劑普萘洛爾(Pro)能減輕ISO誘導(dǎo)的心肌肥厚,與對照相比,心臟指數(shù)HW/BW顯著下降,α腎上腺素能受體拮抗劑酚妥拉明(Phe)處理組與NE處理組相比,心臟指數(shù)HW/BW亦有降低的趨勢。(4)普萘洛爾和酚妥拉明分別處理組小鼠心肌肥厚因子與模型組比較,心肌肥厚標(biāo)志基因心房利鈉因子(Atrial natriuretic factor,ANF)的表達(dá)明顯下調(diào),而Cl C-3的表達(dá)恢復(fù)至接近正常。(5)腎上腺素能受體激動劑ISO和NE均能誘導(dǎo)原代代養(yǎng)的乳鼠心肌細(xì)胞和H9c2心肌細(xì)胞的細(xì)胞體積增大。(6)ISO和NE能誘導(dǎo)心肌細(xì)胞ANF表達(dá)量增加,而Cl C-3的m RNA表達(dá)量減少,Cl C-3氯通道蛋白表達(dá)量也顯著下調(diào)。結(jié)論:腎上腺素能受體激動在誘導(dǎo)心肌肥厚的同時下調(diào)心肌細(xì)胞Cl C-3的表達(dá)。
【學(xué)位授予單位】：廣東藥科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R54

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本文編號：1240778