發(fā)布時(shí)間：2017-11-26 08:18

  本文關(guān)鍵詞：攜IL-8單克隆抗體的超聲造影劑對(duì)心肌梗死細(xì)胞的靶向性研究

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【摘要】：目的：建立兔心肌梗死模型檢測(cè)血清及梗死心肌組織中IL-8的表達(dá)并制備攜IL-8單克隆抗體靶向超聲造影劑,在此基礎(chǔ)上通過體外尋靶實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)該造影劑的靶向粘附效能,并探討IL-8在心肌梗死早期所起的作用,為臨床早期診斷和治療急性心肌梗死提供新的影像學(xué)依據(jù)奠定了基礎(chǔ)。方法：1.兔心肌梗死模型的建立：選取30只成年日本大耳兔(雌雄不限),體重2.5-3.0kg,將兔隨機(jī)分成2組,處理方式如下：A組為心梗組,結(jié)扎兔冠狀動(dòng)脈前降支,B組為假手術(shù)組,縫線只穿過心肌但不結(jié)扎。術(shù)中全程心電監(jiān)護(hù),記錄術(shù)前、術(shù)中及術(shù)后兩組兔心電圖的改變情況；術(shù)后6h及一周常規(guī)超聲心動(dòng)圖檢查,記錄室壁運(yùn)動(dòng)情況；兩組兔均于術(shù)前及術(shù)后0.5h及6h留取靜脈血離心后檢測(cè)IL-8的濃度實(shí)驗(yàn)結(jié)束后取出兔心臟行病理學(xué)檢查,為進(jìn)一步確定兔急性心肌梗死提供依據(jù)。2.損傷心肌組織中IL-8表達(dá)的監(jiān)測(cè)：兔心肌梗死模型建立成功,取A組兔(心梗組)及B組兔(假手術(shù)組)心肌細(xì)胞病理蠟塊,行免疫組化染色,驗(yàn)證心肌梗死細(xì)胞IL-8表達(dá)水平。3.靶向聲學(xué)造影劑的制備及鑒定：采用共價(jià)偶聯(lián)法通過SPDP交聯(lián)劑將IL-8單克隆抗體偶聯(lián)于SonoVue微泡表面,顯微鏡下觀察微泡大小、形態(tài)及分散度并通過玻片凝集實(shí)驗(yàn)及熒光染色實(shí)驗(yàn)證明偶聯(lián)是否成功。4.心肌細(xì)胞的培養(yǎng)及損傷：采用DMEM+10%FBS培養(yǎng)基將大鼠心肌細(xì)胞H9C2培養(yǎng)至細(xì)胞融合度達(dá)到90%以上時(shí)傳代,將細(xì)胞移入4個(gè)35mm的培養(yǎng)皿中,分為兩組,按以下方式處理：一組為對(duì)照組,標(biāo)記為a、b加入高糖培養(yǎng)基；一組為實(shí)驗(yàn)組標(biāo)記為c、d加入低糖培養(yǎng)基。將實(shí)驗(yàn)組放入無氧的純氮?dú)獯?6h后倒置顯微鏡下對(duì)兩組心肌細(xì)胞行形態(tài)學(xué)觀察。5.自制攜IL-8單克隆抗體靶向超聲造影劑與心肌細(xì)胞作用：在對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組中分別加入自制的靶向聲學(xué)微泡懸液與對(duì)照組未偶聯(lián)微泡懸液,分為4組,倒置顯微鏡下觀察四個(gè)培養(yǎng)皿中心肌細(xì)胞對(duì)自制靶向聲學(xué)造影劑的聚集作用。高倍視野下計(jì)數(shù)心肌細(xì)胞及粘附微泡數(shù)目,通過計(jì)算微泡與心肌細(xì)胞的比值對(duì)兩者之間的結(jié)合作用進(jìn)行定量分析。結(jié)果：1.兔心肌梗死模型建立：術(shù)前觀察兩組兔二維超聲、心電圖均無異常。①心電圖檢測(cè)：A組兔心率稍有增快,ST段抬高；B組兔心率稍增快,ST段未見變化；②A組兔二維超聲觀察室壁運(yùn)動(dòng)幅度較術(shù)前及假手術(shù)組均減低。B組兔假手術(shù)組室壁運(yùn)動(dòng)與術(shù)前相比未見異常；③血清學(xué)檢測(cè)顯示A組兔血清中IL-8濃度明顯高于其術(shù)前及B組兔(P0.05),且隨著損傷時(shí)間的延長(zhǎng)IL-8的濃度逐漸增高；B組兔術(shù)前及術(shù)后血清中IL-8的濃度未見明顯變化；④病理結(jié)果顯示：A組兔前降支所供血區(qū)域的心肌組織發(fā)生了心肌梗死,B組兔未見心肌梗死細(xì)胞。2.免疫組化染色實(shí)驗(yàn)對(duì)IL-8的檢測(cè)顯示①A組兔損傷心肌細(xì)胞免疫組化染色顯示損傷心肌細(xì)胞細(xì)胞核呈紫藍(lán)色,而細(xì)胞表面著棕色；②B組兔正常心肌細(xì)胞免疫組化染色顯示心肌細(xì)胞細(xì)胞核同樣呈紫藍(lán)色,但是細(xì)胞表面未見著色。3.未偶聯(lián)的普通SonoVue微泡分布均勻,大小均一,散在分布。偶聯(lián)后的IL-8單克隆抗體微泡懸液及對(duì)照組SonoVue微泡的濃度均隨時(shí)間的延長(zhǎng)而稍減低,但與未偶聯(lián)微泡相比大小、形態(tài)及性狀基本無明顯變化。4.(1)玻片凝集實(shí)驗(yàn)：自制靶向聲學(xué)微泡懸液與二抗混合,倒置顯微鏡下觀察兩者可發(fā)生凝集反應(yīng)；對(duì)照組未偶聯(lián)微泡懸液與二抗混合,倒置顯微鏡下觀察未見凝集。兩種造影劑與冰醋酸混合后倒置顯微鏡下觀察均未發(fā)生凝集反應(yīng)。(2)免疫熒光染色實(shí)驗(yàn)：自制靶向聲學(xué)微泡懸液表面可見熒光顯現(xiàn),而對(duì)照組未偶聯(lián)造影劑微泡表面未顯現(xiàn)熒光。5.心肌細(xì)胞的培養(yǎng)及損傷倒置顯微鏡下觀察：正常心肌細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好,細(xì)胞飽滿,形態(tài)多樣(圓形、梭形及錐形),周圍可見光暈,且折光性強(qiáng)；損傷心肌細(xì)胞,細(xì)胞皺縮,部分細(xì)胞膜破裂,胞漿顆粒增加,細(xì)胞間偶聯(lián)破壞,足突消失,折光性下降。6.倒置顯微鏡下觀察聲學(xué)微泡與心肌細(xì)胞相互作用：自制靶向聲學(xué)微泡懸液與損傷心肌細(xì)胞及損傷初期變形心肌細(xì)胞的粘附作用明顯高于對(duì)照組(P0.05)；同時(shí)自制靶向聲學(xué)微泡懸液與損傷心肌細(xì)胞及損傷初期變形心肌細(xì)胞的粘附作用明顯高于與正常心肌細(xì)胞的作用(P0.05),且隨著損傷程度的增加,微泡粘附數(shù)量逐漸增多。結(jié)論：1.通過結(jié)扎兔左冠狀動(dòng)脈前降支,成功制備兔心肌梗死模型,為下一步進(jìn)行免疫組化實(shí)驗(yàn)提供動(dòng)物模型。2.血清學(xué)監(jiān)測(cè)顯示：在心肌梗死初期血清中便可測(cè)得IL-8,且隨著損傷的加重IL-8分泌逐漸增多,IL-8又可趨化中性粒細(xì)胞加重炎癥反應(yīng),IL-8在血清中呈高表達(dá)。3.免疫組化病理切片染色顯示損傷心肌組織表面IL-8呈高表達(dá),故我們選擇IL-8單克隆抗體作為靶向抗體,將其偶聯(lián)到SonoVue微泡表面能夠?yàn)樵缙跈z測(cè)出心肌梗死細(xì)胞提供新的方法。4.玻片凝集實(shí)驗(yàn)及免疫熒光染色證實(shí)IL-8單克隆抗體已成功偶聯(lián)到SonoVue微泡表面,偶聯(lián)后的微泡與未偶聯(lián)的微泡濃度、大小、形態(tài)、性狀基本相似,說明了通過共價(jià)偶聯(lián)法制備的聲學(xué)造影劑其物理及生物性狀未見明顯變化,故可以作為聲學(xué)造影劑作用于生物體內(nèi)。5.利用使心肌細(xì)胞缺氧、缺糖的方法損傷心肌細(xì)胞,誘導(dǎo)心肌細(xì)胞分泌大量IL-8,為體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)提供了實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀?.體外尋靶實(shí)驗(yàn)可見自制靶向聲學(xué)微泡粘大量附于損傷心肌細(xì)胞表面,說明IL-8單克隆抗體共價(jià)偶聯(lián)到SonoVue微泡表面后仍具有免疫活性。7.體外尋靶細(xì)胞實(shí)驗(yàn)顯示可見部分未偶聯(lián)SonoVue微泡粘附于損傷心肌細(xì)胞表面,但其結(jié)合作用明顯低于自制靶向聲學(xué)微泡懸液,說明攜IL-8單克隆抗體的靶向超聲造影劑微泡對(duì)靶細(xì)胞的結(jié)合具有高效性及特異性等優(yōu)點(diǎn)。8.體外尋靶細(xì)胞實(shí)驗(yàn)通過利用攜IL-8單克隆抗體靶向微泡與損傷心肌細(xì)胞表面的特異性抗原抗體反應(yīng),證明了心肌梗死早期即可產(chǎn)生IL-8,可隨著損傷的加重IL-8呈高表達(dá),IL-8單抗可以特異性地結(jié)合IL-8,對(duì)減輕心梗的發(fā)展有一定作用,因此成功制備攜帶IL-8單克隆抗體的靶向聲學(xué)造影劑對(duì)早期診斷心肌梗死有較高價(jià)值。
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R445.1;R542.22

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中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 蔡明清;心肌細(xì)胞再生和腔室重塑[J];中國(guó)分子心臟病學(xué)雜志;2002年01期

2 李娜;;心肌細(xì)胞可以再生[J];科技導(dǎo)報(bào);2009年08期

3 薛惠文;章靜波;;人類心肌細(xì)胞的更新[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2009年07期

4 崔曉兵;;人類成年心肌細(xì)胞可以更新[J];生理科學(xué)進(jìn)展;2010年06期

5 蘇倩文;;心肌細(xì)胞可以再生[J];心血管病防治知識(shí)(科普版);2013年05期

6 周亮 ,曾曉榮,楊艷,劉智飛,李妙齡,裴杰;豚鼠心肌細(xì)胞急性酶分離方法[J];四川生理科學(xué)雜志;2000年02期

7 萬(wàn)朝敏,俞紅吉,吳泰相,高云欽,周密,鄧建軍,王正榮;免疫損傷對(duì)離體培養(yǎng)心肌細(xì)胞力學(xué)特性的影響[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)物理學(xué)雜志;2000年02期

8 賈士東,修瑞娟;心肌細(xì)胞功能的研究[J];中國(guó)微循環(huán);2000年03期

9 何作云,劉健;心肌細(xì)胞核鈣信號(hào)的研究[J];重慶醫(yī)學(xué);2002年02期

10 張家平;絲裂素活化蛋白激酶與心肌細(xì)胞效應(yīng)[J];重慶醫(yī)學(xué);2002年11期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 張保國(guó);趙萍;張文杰;;鉬對(duì)培養(yǎng)心肌細(xì)胞存活的影響[A];中國(guó)營(yíng)養(yǎng)學(xué)會(huì)首屆微量元素專題討論會(huì)論文摘要匯編[C];1985年

2 房亞東;黃躍生;黨永明;張家平;張東霞;宋華培;張瓊;;上調(diào)微管相關(guān)蛋白4對(duì)缺氧早期心肌細(xì)胞活力影響的實(shí)驗(yàn)研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)燒傷外科學(xué)分會(huì)2009年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2009年

3 唐陶;王世騏;莊茁;;基底應(yīng)變對(duì)心肌細(xì)胞的影響[A];北京力學(xué)會(huì)第14屆學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2008年

4 何作云;劉健;王培勇;;心肌細(xì)胞核鈣信號(hào)的研究[A];21世紀(jì)醫(yī)學(xué)工程學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要匯編[C];2001年

5 何作云;劉健;;心肌細(xì)胞核鈣信號(hào)的研究[A];第九次全國(guó)生物物理大會(huì)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2002年

6 滕苗;黃躍生;黨永明;房亞東;張瓊;;微管干預(yù)劑對(duì)缺氧心肌細(xì)胞糖酵解途徑關(guān)鍵酶的影響[A];第六屆全國(guó)燒傷救治專題研討會(huì)論文匯編[C];2009年

7 宋新愛;林元喜;樊小力;;心肌細(xì)胞的純化[A];中國(guó)病理生理學(xué)會(huì)第九屆全國(guó)代表大會(huì)及學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要[C];2010年

8 劉興茂;陳昭烈;劉紅;熊福銀;;心肌細(xì)胞體外三維培養(yǎng)的初步研究[A];中國(guó)生物工程學(xué)會(huì)第三次全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)討論會(huì)論文摘要集[C];2001年

9 熊江輝;李瑩輝;聶捷琳;張曉鈾;丁柏;;槲皮素對(duì)回轉(zhuǎn)條件下心肌細(xì)胞—氧化氮合成的影響[A];中國(guó)宇航學(xué)會(huì)航天醫(yī)學(xué)工程專業(yè)委員會(huì)、中國(guó)空間科學(xué)學(xué)會(huì)空間生命專業(yè)委員會(huì)聯(lián)合學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2001年

10 陽(yáng)冬梅;吳才宏;程和平;;鈣調(diào)蛋白對(duì)心肌細(xì)胞興奮—收縮耦聯(lián)的調(diào)節(jié)作用[A];第九次全國(guó)生物物理大會(huì)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2002年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 劉黎;荷蘭培育心肌細(xì)胞取得進(jìn)展[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2008年

2 編譯 曉魚;人類心肌細(xì)胞可再生[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2009年

3 孫國(guó)根;心肌細(xì)胞的形成和再生有望被誘導(dǎo)[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2012年

4 吳偉農(nóng);心肌細(xì)胞能自我修復(fù)[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2001年

5 陳丹;移植的人體細(xì)胞可與豚鼠受體心肌同步跳動(dòng)[N];科技日?qǐng)?bào);2012年

6 記者胡德榮;心肌細(xì)胞能體外培養(yǎng)[N];健康報(bào);2002年

7 楊洋;骨髓細(xì)胞生成心肌細(xì)胞[N];衛(wèi)生與生活報(bào);2003年

8 吳理茂 李連達(dá);中藥在心肌細(xì)胞移植中的作用[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2003年

9 ;急性心梗治療獲重要突破 心肌細(xì)胞可以再生[N];中國(guó)保險(xiǎn)報(bào);2003年

10 記者 張曄;基因調(diào)控讓壞死的心肌細(xì)胞“復(fù)活”[N];科技日?qǐng)?bào);2011年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 吳東棟;硫化氫提高Cu/Zn-SOD和Mn-SOD活性的作用及其機(jī)制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

2 徐磊;MMI-0100通過對(duì)心肌細(xì)胞及成纖維細(xì)胞中MK2的抑制作用降低心肌纖維化程度的研究[D];山東大學(xué);2015年

3 牟永潮;基于納米材料再造心肌組織生物學(xué)評(píng)價(jià)與心梗治療研究[D];哈爾濱工業(yè)大學(xué);2015年

4 李娜;PDE5抑制劑Sildenafi1對(duì)心梗后心衰線粒體能量代謝保護(hù)及機(jī)制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

5 陳亮;miR-199a對(duì)大鼠心肌細(xì)胞自噬的調(diào)控研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

6 王曉麗;附子人參配伍對(duì)大鼠心肌細(xì)胞保護(hù)作用的研究[D];長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué);2015年

7 肖劍鋒;碘化-N-正丁基氟哌啶醇對(duì)缺氧心肌細(xì)胞鈣穩(wěn)態(tài)的保護(hù)作用[D];汕頭大學(xué);2011年

8 張翠翠;MG53調(diào)節(jié)心臟輔助亞基KChIP2表達(dá)的分子機(jī)制及在心電穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)中的作用[D];南方醫(yī)科大學(xué);2014年

9 張海彬;miR-711在心肌缺血再灌注損傷中的作用機(jī)制[D];吉林大學(xué);2016年

10 位庚;心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷對(duì)心肌細(xì)胞的影響及通絡(luò)干預(yù)研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2016年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 付麗;硫化氫后處理對(duì)大鼠缺氧/復(fù)氧心肌細(xì)胞的保護(hù)作用及機(jī)制研究[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2015年

2 黃玉潔;miR-218調(diào)控小鼠胚胎干細(xì)胞體外定向分化心肌細(xì)胞研究[D];浙江大學(xué);2015年

3 李品雅;華蟾毒精對(duì)心肌細(xì)胞L型鈣電流，，鈣瞬變和收縮力的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

4 劉洋;野薔薇苷對(duì)H_2O_2誘導(dǎo)心肌細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

5 朱燕梅;銀杏葉提取物保護(hù)心肌細(xì)胞抗氧化損傷及其基于Keap1/Nrf2/ARE通路的作用機(jī)制[D];成都醫(yī)學(xué)院;2015年

6 劉莉;心肌細(xì)胞TLR4促進(jìn)心梗后心臟炎癥反應(yīng)的研究[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2015年

7 盧杏;體外轉(zhuǎn)染CyclinA2基因?qū)υ笫笮募〖?xì)胞增殖的影響[D];新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院;2015年

8 竇夢(mèng)怡;缺氧時(shí)心肌細(xì)胞自噬的變化及其機(jī)理的研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2015年

9 蘭曉東;微管解聚對(duì)心肌細(xì)胞電生理特性的影響及微管定量分析方法研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

10 李熠;TGR5在高糖誘導(dǎo)小鼠心肌細(xì)胞凋亡中的作用及其機(jī)制[D];四川醫(yī)科大學(xué);2015年

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