發(fā)布時(shí)間：2017-11-22 04:26

  本文關(guān)鍵詞：氧化低密度脂蛋白對(duì)巨噬細(xì)胞作用機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究

  更多相關(guān)文章： 氧化低密度脂蛋白 巨噬細(xì)胞 增殖 巨噬細(xì)胞遷移抑制因子 NF-κB通路

【摘要】：目的:通過(guò)體外分離氧化低密度脂蛋白(oxidised low density lipoprotein,oxLDL)及體外誘導(dǎo)THP-1人單核細(xì)胞系分化形成單核細(xì)胞來(lái)源巨噬細(xì)胞(monocytes derived macrophages,MDMs),結(jié)合細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)和免疫學(xué)實(shí)驗(yàn),探討ox LDL對(duì)巨噬細(xì)胞增殖的相關(guān)作用和分泌巨噬細(xì)胞遷移抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MMIF/MIF)的作用,并通過(guò)使用NF-κB通路抑制劑以及使用逆轉(zhuǎn)錄病毒將shp65質(zhì)粒穩(wěn)定轉(zhuǎn)染、敲低MDMs細(xì)胞內(nèi)的p65蛋白表達(dá),以此驗(yàn)證NF-κB通路在MDMs分泌MIF過(guò)程中的作用。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)通過(guò)采集臨床上出現(xiàn)血管介入術(shù)后再狹窄患者的血清,以首次入院動(dòng)脈粥樣硬化閉塞癥(artherosclerosis obliteran,ASO)患者及健康志愿者血清作為對(duì)照,分別檢測(cè)各組MIF水平,旨在觀察MIF在再狹窄患者體內(nèi)是否明顯升高,從而為之后進(jìn)一步研究MIF是否為介入術(shù)后再狹窄發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)因素提供了理論基礎(chǔ)。方法:1.體外研究:(1)佛波酯(phorbol-12-myristate-13-acetate,PMA)成功誘導(dǎo)THP-1分化形成MDMs,經(jīng)油紅O染色證實(shí)為巨噬細(xì)胞后用于實(shí)驗(yàn)。(2)兩步法超高速離心人血清,獲得密度為1.019-1.063g/ml的低密度脂蛋白,再經(jīng)紫外燈照射(254nm,0.5mW/cm2,2h)制備得到oxLDL,過(guò)濾消毒后用于實(shí)驗(yàn)。(3)MDMs分別與25μg/m、50μg/ml和75μg/ml濃度oxLDL培養(yǎng)12h、24h及48h后,CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖,酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)測(cè)定各組上清的MIF濃度;以不加入oxLDL培養(yǎng)組為正常對(duì)照(normal control,NC)。(4)同法誘導(dǎo)含穩(wěn)轉(zhuǎn)NF-κB-Luc質(zhì)粒的THP-1細(xì)胞分化形成NF-κB-Luc-MDMs,同上ox LDL濃度梯度培養(yǎng)后,熒光素酶底物(Luciferase)法通過(guò)化學(xué)發(fā)光儀檢測(cè)各組上清在加入底物后產(chǎn)生的熒光強(qiáng)度,以反映各組細(xì)胞NF-κB通路的激活情況。(5)在MDMs中分別加入終濃度為0和10μM的NF-κB通路抑制劑BAY 11-7082,同法培養(yǎng)并檢測(cè)各組上清中的MIF濃度。(6)利用逆轉(zhuǎn)錄病毒穩(wěn)定轉(zhuǎn)染shp65以敲低THP-1細(xì)胞內(nèi)NF-κB通路活性,同法誘導(dǎo)后檢測(cè)各濃度梯度ox LDL對(duì)shp65-MDMs分泌MIF的影響。t檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較,P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2.再狹窄患者血清中MIF水平的檢測(cè):(1)患者入選標(biāo)準(zhǔn)的制訂,采集無(wú)動(dòng)脈粥樣硬化病變正常志愿者、首次入院ASO患者和ASO介入術(shù)后再狹窄動(dòng)脈患者外周血。實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組各組的患者血清樣本的采集及預(yù)處理。(2)ELISA檢測(cè)各組血清中的MIF濃度。(3)與各對(duì)照組MIF水平對(duì)比,統(tǒng)計(jì)分析各組外周血MIF水平差異。結(jié)果:1.體外研究:(1)與NC組相比,25μg/ml、50μg/ml及75μg/ml oxLDL組12h時(shí)MDMs增殖顯著升高,48h時(shí)分別達(dá)到17.7%、27.8%和41.2%(P0.001);其上清液MIF也在12h起升高,48h時(shí)分別是NC組的1.49、1.67和2.09倍(P0.001)。(2)與NC組相比,oxLDL各組在12h即可檢測(cè)到NF-κB通路明顯激活,24h時(shí)MDMs內(nèi)NF-κB通路活性分別增加38.1%、60.3%和61.1%(P0.001)。(3)加入BAY11-7082后,各組上清液MIF濃度在12h即出現(xiàn)明顯下降,48h時(shí)分別下降58.6%、69.3%、69.7%和73.5%(P0.001)。(4)shp65-MDMs的MIF分泌水平與對(duì)照組相比,各濃度組于12h即出現(xiàn)明顯下降,48h時(shí)分別下降42.6%、48.3%、40.7%和33.5%(P0.001)。2.再狹窄患者血清中MIF水平的檢測(cè):相較于正常對(duì)照組,首次入院動(dòng)脈粥樣硬化閉塞癥患者術(shù)前并無(wú)明顯MIF水平升高(p0.05),而發(fā)生介入術(shù)后再狹窄的患者入院時(shí)可見(jiàn)血清MIF水平的明顯升高(p0.05)。結(jié)論:(1)oxLDL可促進(jìn)MDMs的增殖能力。(2)oxLDL可促使MDMs合成分泌MIF,此過(guò)程涉及NF-κB信號(hào)通路,采用NF-κB抑制劑或敲低細(xì)胞內(nèi)p65蛋白表達(dá)可抑制MIF的分泌。(3)與正常人、未發(fā)生再狹窄患者血清MIF水平相比較,介入治療術(shù)后再狹窄患者的外周血MIF水平升高。
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R543

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 ;豚鼠巨噬細(xì)胞經(jīng)P_(204)處理后的抗石英細(xì)胞毒作用[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)參考資料(衛(wèi)生學(xué)分冊(cè));1976年04期

2 鄧俠進(jìn);;巨噬細(xì)胞的抗癌作用[J];遵義醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1979年02期

3 陸天才;;疾病對(duì)肺巨噬細(xì)胞的影響[J];煤礦醫(yī)學(xué);1982年01期

4 郭瑞清;祝彼得;;一種分離巨噬細(xì)胞的簡(jiǎn)單方法[J];濱州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1990年02期

5 謝志堅(jiān);巨噬細(xì)胞異質(zhì)性[J];醫(yī)學(xué)綜述;2001年06期

6 饒艷;運(yùn)動(dòng)及神經(jīng)內(nèi)分泌對(duì)巨噬細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)[J];體育與科學(xué);2002年05期

7 朱金元;;吸煙對(duì)肺巨噬細(xì)胞的影響[J];浙江醫(yī)學(xué)教育;2003年01期

8 張俊峰;過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體與單核/巨噬細(xì)胞系[J];醫(yī)學(xué)綜述;2004年03期

9 韋錦學(xué);顧軍;;巨噬細(xì)胞的激活誘導(dǎo)死亡[J];生命科學(xué);2006年02期

10 李曉曦;郭寧;曹雪濤;;腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)與轉(zhuǎn)移的研究現(xiàn)狀[J];中國(guó)腫瘤生物治療雜志;2008年01期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 史玉玲;王又明;豐美福;;巨噬細(xì)胞激活作用的研究[A];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)第五次會(huì)議論文摘要匯編[C];1992年

2 吳國(guó)明;周輝;;巨噬細(xì)胞和創(chuàng)傷纖維化[A];2009年浙江省骨科學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2009年

3 李奇;王海杰;;透明質(zhì)酸對(duì)于淋巴結(jié)巨噬細(xì)胞運(yùn)動(dòng)的影響[A];解剖學(xué)雜志——中國(guó)解剖學(xué)會(huì)2002年年會(huì)文摘匯編[C];2002年

4 劉革修;歐大明;劉軍花;黃紅林;廖端芳;;丙丁酚在體外能抑制巨噬細(xì)胞脂質(zhì)氧化介導(dǎo)的低密度脂蛋白氧化并調(diào)節(jié)氧化巨噬細(xì)胞的分泌功能[A];面向21世紀(jì)的科技進(jìn)步與社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展（下冊(cè)）[C];1999年

5 葉金善;楊麗霞;郭瑞威;;環(huán)氧化酶-2/前列腺素E_2在血管緊張素Ⅱ刺激巨噬細(xì)胞表達(dá)細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子中的作用[A];第十三次全國(guó)心血管病學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2011年

6 秦帥;陳希;孔德明;;構(gòu)建由綠色熒光標(biāo)記巨噬細(xì)胞的轉(zhuǎn)基因斑馬魚(yú)系[A];貴州省中西醫(yī)結(jié)合內(nèi)分泌代謝學(xué)術(shù)會(huì)論文匯編[C];2012年

7 武劍華;徐惠綿;;腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞在胃癌中的相關(guān)研究[A];第9屆全國(guó)胃癌學(xué)術(shù)會(huì)議暨第二屆陽(yáng)光長(zhǎng)城腫瘤學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2014年

8 何軍;;血凝素樣氧化型低密度脂蛋白受體升高巨噬細(xì)胞內(nèi)膽固醇水平[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第11次心血管病學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2009年

9 宋盛;周非凡;邢達(dá);;PDT誘導(dǎo)的凋亡細(xì)胞對(duì)巨噬細(xì)胞NO合成的影響[A];第七屆全國(guó)光生物學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2010年

10 張磊;朱建華;黃元偉;姚航平;;血管緊張素Ⅱ?qū)奘杉?xì)胞(THP-1重細(xì)胞)凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體表達(dá)的影響[A];浙江省免疫學(xué)會(huì)第五次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2004年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 通訊員 李靜 記者 胡德榮;惡性腫瘤巨噬細(xì)胞未必皆“惡人”[N];健康報(bào);2014年

2 蘭克;以嘗試用巨噬細(xì)胞治癱瘓[N];科技日?qǐng)?bào);2000年

3 薛佳;免疫系統(tǒng)——人體的“衛(wèi)士”[N];保健時(shí)報(bào);2009年

4 記者 胡德榮;鐵泵蛋白“維穩(wěn)”鐵代謝作用首次闡明[N];健康報(bào);2011年

5 侯嘉 何新鄉(xiāng);硒的神奇功能[N];中國(guó)食品質(zhì)量報(bào);2003年

6 唐穎 倪兵 陳代杰;巨噬細(xì)胞泡沫化抑制劑研究快步進(jìn)行[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2006年

7 劉元江;新發(fā)現(xiàn)解釋腫瘤為何易成“漏網(wǎng)之魚(yú)”[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2007年

8 本報(bào)記者 侯嘉 通訊員 何新鄉(xiāng);今天你補(bǔ)硒了嗎[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2003年

9 左志剛;升血小板藥使用注意[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報(bào);2007年

10 記者 許琦敏;“鐵泵”蛋白幫助回收鐵元素[N];文匯報(bào);2011年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 周赤燕;巨噬細(xì)胞MsrA對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的干預(yù)研究[D];武漢大學(xué);2013年

2 章桂忠;TIPE2蛋白調(diào)控細(xì)胞增殖和炎癥的機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2015年

3 張瑜;DKK1抑制巨噬細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)沉積及其相關(guān)分子機(jī)制[D];山東大學(xué);2015年

4 孟濤;異丙酚對(duì)心臟收縮功能的抑制作用及其對(duì)巨噬細(xì)胞分泌功能調(diào)節(jié)的機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2015年

5 周興;基于酵母微囊構(gòu)建新型口服巨噬細(xì)胞靶向遞送系統(tǒng)的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

6 蔣興偉;Tim-3對(duì)巨噬細(xì)胞極化的調(diào)控機(jī)制研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2015年

7 劉伯玉;清道夫受體A介導(dǎo)小鼠巨噬細(xì)胞吞噬鉤端螺旋體研究[D];上海交通大學(xué);2013年

8 楊紹俊;miRNA-155介導(dǎo)ESAT-6誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制及其在結(jié)核診斷中的作用[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

9 翟光耀;單核/巨噬細(xì)胞Ly6C~(low)亞群在心肌梗死后瘢痕形成期的抗炎特性研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2014年

10 韓露;TRB3介導(dǎo)的脂肪組織巨噬細(xì)胞極化與糖尿病冠狀動(dòng)脈病變關(guān)系的研究[D];山東大學(xué);2015年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 馬春梅;AP0E~(-/-)小鼠TLR9介導(dǎo)巨噬細(xì)胞極化效應(yīng)對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化作用的研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

2 張譯丹;鹽皮質(zhì)激素受體拮抗劑調(diào)控巨噬細(xì)胞表型對(duì)實(shí)驗(yàn)性矽肺的作用[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

3 盧文冉;HCV core蛋白作用的巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清對(duì)肝細(xì)胞生物學(xué)性狀的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

4 李文建;載脂蛋白E影響巨噬細(xì)胞因子表達(dá)及分型的機(jī)制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

5 曹爽;高糖對(duì)巨噬細(xì)胞TLR4信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的調(diào)節(jié)作用[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

6 寧程程;腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞在子宮內(nèi)膜癌雌激素敏感性中的作用及機(jī)制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

7 高龍;PLD4在腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞抑制結(jié)腸癌增殖中的作用研究[D];成都醫(yī)學(xué)院;2015年

8 任虹;感染期子宮頸癌U14細(xì)胞荷瘤小鼠抑制巨噬細(xì)胞CCL5分泌的機(jī)制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

9 李美玲;雙酚A對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞極化影響的體外研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

10 劉瓊;黃芪多糖影響巨噬細(xì)胞向脂肪細(xì)胞趨化的作用及機(jī)制研究[D];新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院;2015年

，

本文編號(hào)：1213495