本文關(guān)鍵詞：遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥患者SLC4A1基因突變分析

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【摘要】：目的遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥(Hereditary Spherocytosis, HS)是一種常見的遺傳性溶血性疾病,以貧血、黃疸和脾腫大為特點(diǎn),外周血涂片中可見球形紅細(xì)胞增多。HS臨床表現(xiàn)、分子基礎(chǔ)和遺傳方式具有顯著異質(zhì)性。HS發(fā)病機(jī)制是基因突變導(dǎo)致紅細(xì)胞膜蛋白缺陷。目前己發(fā)現(xiàn)5種致病基因ANK1, SLC4A1, SPTA1, SPTB和EPB42,分別編碼錨蛋白,帶3蛋白,α-收縮蛋白,β-收縮蛋白和4.2蛋白。歐美國家對(duì)于SLC4A1基因進(jìn)行突變分析,發(fā)現(xiàn)有錯(cuò)義、無義、插入、缺失等突變。雖然國內(nèi)對(duì)該病的病例報(bào)道不少,但對(duì)帶3蛋白SLC4A1基因進(jìn)行突變檢測(cè)的報(bào)道較少。對(duì)HS研究的常用方法主要是凝膠電泳對(duì)膜蛋白進(jìn)行缺陷分析和DNA直接測(cè)序。然而,SDS-PAGE和Western Blot技術(shù)對(duì)膜蛋白分析的靈敏度一般。本研究利用SDS-PAGE電泳和Western Blot技術(shù),先明確HS患者紅細(xì)胞膜蛋白缺陷類型；再結(jié)合DNA直接測(cè)序技術(shù)對(duì)SLC4A1基因全部外顯子和其相鄰內(nèi)含子進(jìn)行突變分析。然后對(duì)其家系成員進(jìn)行突變位點(diǎn)驗(yàn)證,以了解患者SLC4A1基因的突變形式,初步探討中國帶3蛋白缺陷的HS患者分子發(fā)病機(jī)制,進(jìn)一步為患者提供遺傳咨詢和優(yōu)生優(yōu)育指導(dǎo)服務(wù)。方法本研究收集5個(gè)帶3蛋白缺陷的HS患者及其家系成員的外周血,運(yùn)用傳統(tǒng)方法提取患者紅細(xì)胞膜蛋白；利用SDS-PAGE電泳和Western Blot技術(shù)分析患者紅細(xì)胞膜蛋白缺陷的類型；按照DNA試劑盒方法提取患者外周血DNA；針對(duì)缺陷帶3蛋白(SLC4A1基因)設(shè)計(jì)并合成相應(yīng)引物,通過PCR擴(kuò)增得到目的產(chǎn)物。使用DNA直接測(cè)序技術(shù)對(duì)SLC4A1基因全部外顯子及其相鄰內(nèi)含子進(jìn)行突變分析,并與NCBI數(shù)據(jù)庫內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)序列進(jìn)行比對(duì),分析和探討基因突變類型。然后對(duì)其家屬成員進(jìn)行SLC4A1基因相關(guān)突變位點(diǎn)驗(yàn)證,以了解患者SLC4A1基因的突變形式,并初步探討中國帶3蛋白缺陷的HS患者分子發(fā)病機(jī)制。結(jié)果經(jīng)SDS-PAGE和Western Blot技術(shù)分析5個(gè)家系均為帶3蛋白缺陷,對(duì)帶3蛋白SLC4A1基因進(jìn)行DNA測(cè)序發(fā)現(xiàn)均有突變,結(jié)果如下：先證者1為帶3蛋白部分缺陷,SLC4A1基因有2個(gè)突變：第一個(gè)突變是位于4號(hào)外顯子點(diǎn)突變c.113AC突變,Asp38→Ala38 (D38A),為錯(cuò)義突變； 第二個(gè)突變是SLC4A1基因6號(hào)內(nèi)含子c.349+27CT(IVS6nt+27CT)。先證者2為帶3蛋白部分缺陷,SLC4A1基因有2個(gè)突變：第一個(gè)突變是位于13號(hào)外顯子點(diǎn)突變C.1540CT, Cys514 →Arg514 (C514R),為錯(cuò)義突變；第二個(gè)突變是7號(hào)內(nèi)含子c.609+86GA(IVS7nt+86GA)。先證者3為帶3蛋白部分缺陷,SLC4A1基因有2個(gè)突變：第一個(gè)突變是位于4號(hào)外顯子點(diǎn)突變c.113AC, Asp38→Ala38 (D38A),為錯(cuò)義突變；第二個(gè)突變是位于6號(hào)內(nèi)含子C.349+27CT (IVS6nt+27CT)。先證者4為帶3蛋白部分缺陷,SLC4A1基因4號(hào)外顯子有2個(gè)突變：第一個(gè)突變是位于4號(hào)外顯子點(diǎn)突變c.113AC, Asp38→Ala38 (D38A),為錯(cuò)義突變；第二個(gè)突變是位于4號(hào)外顯子點(diǎn)突變c.166AG, Lys56→ Glu56 (K56E),為錯(cuò)義突變。先證者5為帶3蛋白部分缺陷,SLC4A1基因4號(hào)外顯子點(diǎn)突變c.166AG, Lys56→Glu56 (K56E),為錯(cuò)義突變。結(jié)論1.本研究成功運(yùn)用Western Blot方法研究HS患者膜蛋白缺陷類型,Western Blot和SDS-PAGE考馬斯亮藍(lán)染色兩種方法同時(shí)檢測(cè)能更明確膜蛋白缺陷類型。2.HS突變位點(diǎn)分布散在,即使是同一蛋白缺陷,不同家系的HS患者幾乎都有自己的突變類型。但同一個(gè)家系的HS患者表現(xiàn)為相同的突變方式。3.此研究表明,在我們所研究的中國人群中大部分HS患者以帶3蛋白缺陷為主。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R556.6

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中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 Ricketts C.J.;Minton J.A.;Samuel J.;T.G.Barrett;郭戰(zhàn)宏;;對(duì)硫胺素敏感的巨幼紅細(xì)胞性貧血綜合征:對(duì)7家族的長期隨訪和基因突變分析[J];世界核心醫(yī)學(xué)期刊文摘(兒科學(xué)分冊(cè));2006年08期

2 黃梁滸;王志紅;楊渤生;鄭德柱;吳玉水;蘭風(fēng)華;;7個(gè)腎上腺腦白質(zhì)營養(yǎng)不良家系的基因突變分析[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2006年06期

3 蔣建國,李宜雄,夏昆,呂新生,夏家輝;Peutz-Jeghers綜合征STK13基因突變分析[J];中華消化雜志;2004年10期

4 楊文明;李瑞娟;鮑遠(yuǎn)程;汪瀚;汪美霞;;變性高效液相色譜檢測(cè)法在基因突變分析中的應(yīng)用[J];中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志;2008年11期

5 黃梁滸;王志紅;楊渤生;鄭德柱;吳玉水;蘭風(fēng)華;;7個(gè)腎上腺腦白質(zhì)營養(yǎng)不良家系的基因突變分析[J];福州總醫(yī)院學(xué)報(bào);2008年01期

6 阮慶國,陸春葉;基因突變分析技術(shù)綜述[J];國外醫(yī)學(xué).遺傳學(xué)分冊(cè);1998年05期

7 封東寧;楊勇輝;余自華;王道靜;孟大川;付榮;王晶晶;;散發(fā)性激素耐藥型腎病綜合征患兒30例足細(xì)胞基因突變分析[J];實(shí)用兒科臨床雜志;2012年05期

8 謝豐;何湘;任兆瑞;呂志寶;;兒童先天性并多指(趾)畸形HOXD13基因突變分析[J];國際骨科學(xué)雜志;2011年03期

9 吳一波,楊渤生,吳玉水,黃俏佳,蘭風(fēng)華;一例腎上腺腦白質(zhì)營養(yǎng)不良患者及其家系的基因突變分析[J];上海醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志;2002年02期

10 黃梁滸,曾健,楊渤生,黃惠娟,吳玉水,蘭風(fēng)華;3個(gè)腎上腺腦白質(zhì)營養(yǎng)不良家系的基因突變分析[J];中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志;2004年03期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 蘭風(fēng)華;黃梁滸;楊渤生;王志紅;鄭德柱;吳玉水;曾健;吳一波;黃俏佳;;腎上腺腦白質(zhì)營養(yǎng)不良患者的基因突變分析[A];第六次全國醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議文摘匯編[C];2005年

2 侯艷霞;任韻清;陳建軍;高敏;周伏圣;杜文輝;王培光;沈玉君;楊森;林國書;崔勇;梁燕華;袁承達(dá);張學(xué)軍;;遺傳性對(duì)稱性色素異常癥的基因突變分析[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十二次全國皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2006年

3 劉丹如;孫金嶠;俞曄珩;王靜漪;應(yīng)文靜;惠曉瑩;王曉川;;7例重癥聯(lián)合免疫缺陷病患兒臨床特征和基因突變分析[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十七次全國兒科學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編（上冊(cè)）[C];2012年

4 李福秋;金學(xué)洙;;顯性遺傳營養(yǎng)不良型大皰性表皮松解癥1例報(bào)道及基因突變分析[A];2001年中國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2001年

5 宋貴波;鄭芳;袁玉峰;向飛艷;;2例家族性腺瘤性息肉病的基因突變分析[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國中青年檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2012年

6 楊勇輝;余自華;黃雋;聶曉晶;王承峰;夏桂枝;陳光明;任榕娜;;中國漢族散發(fā)性孤立性激素耐藥型腎病綜合征女性患兒WT1基因突變分析[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十七次全國兒科學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編（上冊(cè)）[C];2012年

7 封東寧;余自華;黃雋;聶曉晶;王承峰;夏桂枝;陳光明;任榕娜;;中國南方漢族散發(fā)性激素耐藥型腎病綜合征兒童NPHS2基因突變分析[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十七次全國兒科學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編（上冊(cè)）[C];2012年

8 楊堯;林鵬;何璽玉;伍建;陳小春;楊曉;王春枝;;新一代測(cè)序技術(shù)同時(shí)進(jìn)行染色體異常和基因突變分析[A];第十二次全國醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2014年

9 謝�；�;柯龍鳳;王志紅;黃梁滸;蘭風(fēng)華;;1個(gè)有3名女性雜合子病人的X-ALD家系及其基因突變分析[A];第八次全國醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議(中華醫(yī)學(xué)會(huì)2009年醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)年會(huì))論文摘要匯編[C];2009年

10 田興亞;黃尤光;;云南少數(shù)民族G6PD缺陷的基因突變分析[A];新世紀(jì) 新機(jī)遇 新挑戰(zhàn)——知識(shí)創(chuàng)新和高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)發(fā)展（上冊(cè)）[C];2001年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 楊旺;遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥患者SLC4A1基因突變分析[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2016年

2 王媛;2例Omenn綜合癥臨床、免疫學(xué)特征及基因突變分析[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2013年

3 龔夢(mèng)妮;遺傳性痙攣性截癱伴胼胝體變薄一家系臨床特點(diǎn)及基因突變分析[D];南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院;2013年

4 王晶晶;中國南方漢族腎小球疾病兒童NPHS2和WT1基因遺傳學(xué)變異分析[D];福建醫(yī)科大學(xué);2009年

5 賈海;高效毛細(xì)管電泳在基因突變分析中的方法學(xué)及應(yīng)用研究[D];蘭州大學(xué);2006年

6 潘麗麗;Crigler-Najjar綜合征II型UGT1A1基因突變分析[D];山西醫(yī)科大學(xué);2013年

7 李黎;自身免疫性淋巴增生綜合征及DiGeorge綜合征臨床、免疫學(xué)特征及基因突變分析[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

8 張?chǎng)?GIGYF2基因突變分析[D];中南大學(xué);2009年

9 廖林;遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥患者EPB42基因突變分析[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2014年

10 鹿蕾娜;中國VHL綜合征家系和佩—梅病致病基因突變分析[D];中國醫(yī)科大學(xué);2009年

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本文編號(hào)：1204213