本文關(guān)鍵詞：枸杞中抑制血管緊張素轉(zhuǎn)化酶有效成分的篩選

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【摘要】：高血.壓是一種常見病、多發(fā)病,具有“三高三低”的特點(diǎn),即高發(fā)病率、高致殘率、高死亡率：低知曉率、低服藥率、低控制率。因此,如何針對高血壓的特點(diǎn)有效的控制高血壓已經(jīng)成為醫(yī)學(xué)界關(guān)注的焦點(diǎn)。目前市場上主要的的降血壓藥物大多是合成藥物,雖然療效比較好,但是基本上都有作用時(shí)間短、依賴性較強(qiáng)、毒副作用大等問題。我國中藥資源豐富,且有悠久的用藥歷史,藥物藥效穩(wěn)定、安全。因此,尋找有效降血壓的中藥以及開發(fā)降血壓的中藥產(chǎn)品具有重要的現(xiàn)實(shí)意義�，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)證明,構(gòu)杞具有降血壓、降血糖、調(diào)節(jié)免疫、抗疲勞、抗癌、抗氧化等多種生物活性。然而,枸杞降血壓的機(jī)制和有效成分尚不明朗,因此有必要對枸杞中降血壓的活性成分做全面、深入的研究。本研究用血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)模型為手段,對枸杞的降壓活性做全面評價(jià),利用高速逆流色譜(HSCCC)對枸杞中的活性成分進(jìn)行制備型分離。期望能夠獲得枸杞中具有降血壓的單體成分,為下一步藥理研究奠定基礎(chǔ)。 本研究的主要內(nèi)容有：(1)ACE粗酶的提取以及用高效液相色譜法(HPLC)測定ACE的活性；(2)以ACE為靶標(biāo),評價(jià)32味中藥對ACE抑制作用的活性；(3)采用D-101大孔樹脂對枸杞的乙醇提取物進(jìn)行粗分,同時(shí)以ACE追蹤大孔樹脂的活性部位：(4)采用硅膠柱層析和凝膠柱層析對大孔樹脂中活性最高的部位進(jìn)行分離純化并以ACE為靶標(biāo)進(jìn)行活性部位及活性成分的追蹤；(5)采用D-101大孔樹脂對枸杞的乙醇提取物進(jìn)行除雜和粗分后,用HSCCC以氯仿-甲醇-水(10：7：3,v/v/v)為溶劑體系,對枸杞中的莨菪亭進(jìn)行了制備型分離。 通過以上實(shí)驗(yàn)得到結(jié)果如下： (1)用梯度冷凍離心法從新鮮兔肺中提取得到ACE粗酶,其活性較高。用底物馬尿酰-組氨酰-亮氨酸(HHL)-ACE為反應(yīng)體系,HPLC法測定反應(yīng)體系中馬尿酸(Hip)含量,Hip的峰面積與ACE濃度呈很好的線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)r2=0.99,說明此法可以精確檢測ACE的活性,能夠反映酶與底物的反應(yīng)程度,從而確定酶的合適劑量。 (2)對32味中藥進(jìn)行ACE的活性評價(jià),實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：32味藥材中,澤瀉、決明子、知母、山楂、五味子、黃芪、佛手、枸杞對ACE的抑制率都高于60%,其中枸杞的抑制率最高,達(dá)到92.30%,說明枸杞中含有能有效抑制ACE的活性成分。因此,選取枸杞進(jìn)行下一步的研究。 (3)用D-101大孔樹脂對枸杞乙醇提取物粗分,得到6個(gè)部位,實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：50%的乙醇洗脫部位活性最高,抑制率達(dá)到35.46%。 (4)用桂層析方法分離活性部位中的有效成分,硅膠柱層析粗分得到7個(gè)洗脫部位,其中乙酸乙酯-甲醇(6：4)洗脫部位活性最高,抑制率達(dá)到56.26%。用硅膠柱層析和和凝膠柱層析進(jìn)行再次分離,得到6個(gè)化合物,其中莨菪亭糖苷類這個(gè)化合物活性最高,抑制率達(dá)到96.67%,初步認(rèn)定枸杞中抑制ACE的活性物質(zhì)為莨菪亭糖苷類化合物。 (5)用高速逆流色譜法對枸杞的乙醇提取物中的大孔樹脂50%乙,醇洗脫部分進(jìn)行了分離,經(jīng)薄層色譜-熒光分析法篩選高速逆流色譜的溶劑體系。用氯仿-甲醇-水(10：7：3,v/v/v)為溶劑體系,以連續(xù)進(jìn)樣的方法,首次從枸杞中分離得到了較多量的莨若亭。
【學(xué)位授予單位】：西南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R285;R544.1

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本文編號：1176212