發(fā)布時間：2017-11-10 13:38

  本文關(guān)鍵詞：Sirtuin 3在心肌細胞鈣超載時對細胞凋亡的影響及分子機制研究

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【摘要】：目的研究外源性Sirtuin 3在H9c2心肌細胞鈣超載時對細胞凋亡的影響以及可能的分子機制。方法將培養(yǎng)好的H9c2心肌細胞株隨機分為4組：1組,對照組(control group); 2組,Sirtuin 3組(Sirtuin 3 group);3組, ionomycin組(ionomycin group); 4組, ionomycin聯(lián)合Sirtuin 3組(ionomycin Sirtuin 3 group)。其中3組,4組采用ionomycin誘導法構(gòu)建H9c2心肌細胞鈣超載模型。采用分光光度法檢測各組心肌細胞內(nèi)鈣離子濃度([Ca2+]i)；采用蛋白質(zhì)印跡法(Western blot, WB)檢測各組心肌細胞線粒體內(nèi)和胞質(zhì)中細胞色素C (CytC)的蛋白表達；采用Western blot檢測各組心肌細胞胞質(zhì)中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)的蛋白表達；采用分光光度法檢測各組心肌細胞中caspase-3的活性；采用流式細胞術(shù)結(jié)合Annexin V-FITC/PI雙染色法檢測各組H9c2心肌細胞的凋亡比率。結(jié)果測得各組心肌細胞[Ca2+]i分別為(nmol/L)：112.31±20.12,110.28±19.83,374.82±26.29,186.45±23.14。與對照組相比,Sirtuin3組[Ca2+]i無明顯改變(P0.05),ionomycin組[Ca2+]i明顯增高(P0.05)；而ionomycin聯(lián)合Sirtuin 3組[Ca2+]i較ionomycin組明顯減少(P0.05)。提示使用ionomycin誘導法可以成功構(gòu)建H9c2心肌細胞鈣超載模型,而經(jīng)過外源性Sirtuin 3處理心肌細胞內(nèi)鈣超載明顯減輕。Western blot檢測Cyt C的結(jié)果(1)各組心肌細胞線粒體內(nèi)的Cyt C蛋白表達結(jié)果比較：與對照組相比,Sirtuin 3組無明顯改變(P0.05),ionomycin組明顯低于對照組(P0.05),ionomycin聯(lián)合Sirtuin 3組明顯高于ionomycin組(P0.05)； (2)各組心肌細胞胞質(zhì)中Cyt C的蛋白表達比較：與對照組相比,Sirtuin 3組無明顯改變(P0.05),ionomycin組明顯高于對照組(P0.05),ionomycin聯(lián)合Sirtuin 3組明顯低于ionomycin組(P0.05)。Caspase-3的檢測結(jié)果(1)Western blot結(jié)果顯示caspase-3在胞質(zhì)中的蛋白表達比較：與對照組相比,Sirtuin 3組無明顯改變(P0.05),ionomycin組明顯高于對照組(P0.05),ionomycin聯(lián)合Sirtuin 3組caspase-3的表達明顯低于ionomycin組(P0.05)； (2)分光光度法檢測各組caspase-3活性分別為(nmol/h):1.231±0.13,1.128±0.19,4.825±0.21,2.253±0.23。與對照組相比,Sirtuin 3組caspase-3活性無明顯改變(P0.05),ionomycin組中caspase-3活性高于對照組(P0.05), ionomycin聯(lián)合Sirtuin 3組明顯低于ionomycin組(P0.05)。各組心肌細胞凋亡比率(雙染色結(jié)合流式細胞術(shù))結(jié)果分別為：(29.22±0.3)%,(28.30±0.2)%,(67.24±0.5)%,(38.78±0.7)%。Sirtuin 3組的凋亡比率與對照組相比無明顯差異(P0.05),ionomycin組的凋亡比率明顯高于對照組(P0.05),ionomycin聯(lián)合Sirtuin 3組的凋亡比率明顯低于ionomycin組(P0.05)。結(jié)論在H9c2心肌細胞發(fā)生鈣超載時,外源性Sirtuin 3可以減少心肌細胞發(fā)生凋亡；其可能的機制為Sirtuin 3通過減輕心肌細胞鈣超載,減少線粒體內(nèi)Cyt C向胞質(zhì)中釋放,繼而減少caspase-3的激活,抑制了線粒體凋亡通路的啟動。
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R54

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本文編號：1166906