本文關鍵詞：ACE抑制肽的設計與抗酶解，抑制機理的研究

  更多相關文章： 血管緊張素轉(zhuǎn)化酶 ACE抑制肽 抗酶解 抑制機制

【摘要】：目的：高血壓是心血管疾病的重要危險因素，開發(fā)安全有效且無副作用的降壓藥物是預防和治療高血壓病的首要任務。ACE抑制肽因其安全性高，毒副作用小等優(yōu)點作為新型降壓作用的功能食品具有重要的研究意義。本研究以花生蛋白源ACE抑制肽（KIFLRLS）為母肽，ACE抑制率為69%。通過對凈電荷和疏水性這兩個重要結構參數(shù)的改變，設計了一系列的衍生肽，研究凈電荷及疏水性對ACE抑制肽活性，抗酶解，及與ACE相互作用的影響和規(guī)律，作為研究和開發(fā)降壓肽功能食品的實驗依據(jù)。 方法：對凈電荷（Q）+2，疏水性殘基比率（H）57%的母肽ACEIP用序列修飾法設計得到一系列的衍生肽（P1：Q=0，H=57%，P2：Q=0，H=42%，P3：Q=0，，H=71%，P4：Q=+1，H=71%，P5：Q=+1，H=57%，P6：Q=+1，H=42%，P7：Q=+2，H=42%，P8：Q=+2，H=71%），用預測軟件分析了母肽及衍生肽的理化性質(zhì)。MTT法研究其對腫瘤細胞生長的影響，并用HPLC研究了其在胃蛋白酶及胰蛋白酶酶解后的保留率。探討了體外活性與凈電荷，疏水性之間的關系，并根據(jù)熒光光譜和分子對接來探究ACE抑制肽與ACE的相互作用模式。 結論：MTT實驗表明，母肽及衍生肽對HepG2細胞的抑制作用與凈電荷呈顯著正相關（P＜0.05）。母肽與衍生肽在胃蛋白酶（0.01mg/mL）水解2h后，P3，P4，P8的抗胃蛋白酶酶解性質(zhì)最好，在2h后保留率均在70%以上，其余肽的保留率均在50%左右；胰蛋白酶（0.01mg/mL）水解2h后，P1，P5，ACEIP抗胰蛋白酶酶解的性質(zhì)較弱，保留率均在40%左右，其余肽的保留率均在50%以上。相關性分析表明凈電荷對其抗酶解的影響較小，其疏水性對其抗酶解的性質(zhì)呈正相關（P＜0.05），在相同的酶解條件下，相對疏水性高的肽水解度低。在經(jīng)過消化酶水解后，雖然母肽及衍生肽均有所降解，但其抑制活性并沒有相應的下降， P2，P7，P8經(jīng)胃蛋白酶水解后ACE抑制活性還有所上升。體外活性實驗表明，疏水性高的肽ACE抑制活性要優(yōu)于其他肽。通過熒光光譜的研究發(fā)現(xiàn)P1，P2，P4，P6對ACE的熒光猝滅是通過與ACE形成結合物或者與ACE分子發(fā)生動態(tài)碰撞引起的；P3，P5，P8，ACEIP與ACE的熒光猝滅在低濃度下以靜態(tài)為主，高濃度時動態(tài)分子碰撞與靜態(tài)分子結合同時發(fā)生；而P6，P7并沒有進入到ACE分子內(nèi)部，只是猝滅了蛋白分子表面氨基酸的熒光。通過分子對接，發(fā)現(xiàn)P1，P2，P4，ACEIP均能與ACE的活性中心的Zn2+和其附近的氨基酸（His383/His387/Glu411）產(chǎn)生作用，而顯示出其良好的抑制活性。
【關鍵詞】：血管緊張素轉(zhuǎn)化酶 ACE抑制肽 抗酶解 抑制機制
【學位授予單位】：江南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R544.1;R151.3
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-6
• 主要縮略詞匯總6-7
• 目錄7-9
• 1 緒論9-17
• 1.1 腎素-血管緊張素系統(tǒng)9-10
• 1.2 血管緊張素轉(zhuǎn)化酶（ACE）10-11
• 1.3 ACE 抑制劑（ACEI）11
• 1.4 ACE 抑制肽11-13
• 1.4.1 概述11-13
• 1.4.2 ACE 抑制肽結構與活性的關系13
• 1.5 活性肽的結構與抗酶解13-14
• 1.6 分子對接14-15
• 1.6.1 概述14-15
• 1.6.2 ACE 的晶體結構15
• 1.7 待解決的問題及主要研究內(nèi)容15-16
• 1.8 研究目的及意義16-17
• 2 材料與方法17-22
• 2.1 試劑與儀器17
• 2.1.1 主要實驗原料及試劑17
• 2.1.2 實驗儀器17
• 2.2 實驗方法17-21
• 2.2.1 ACE 抑制肽的衍生肽的設計17-18
• 2.2.2 肽的理化性質(zhì)分析18
• 2.2.3 理論酶解分析18
• 2.2.4 肽的合成18-19
• 2.2.5 ACE 抑制活性的體外測活19
• 2.2.6 肽對腫瘤細胞的毒性分析19-20
• 2.2.7 酶解分析20
• 2.2.8 ACE 抑制肽的熒光效應與猝滅機制20-21
• 2.2.9 分子對接21
• 2.3 數(shù)據(jù)分析21-22
• 3 結果與討論22-42
• 3.1 ACE 抑制肽及衍生肽序列22
• 3.2 母肽及衍生肽理化特性分析22-23
• 3.3 母肽及衍生肽酶解理論分析23
• 3.4 肽的體外 ACE 抑制活性23-24
• 3.5 肽對 HepG2 細胞毒性的分析24-25
• 3.6 酶解分析25-28
• 3.6.1 母肽及衍生肽與胃蛋白酶酶解反應分析25-26
• 3.6.2 母肽及衍生肽與胰蛋白酶酶解反應分析26-27
• 3.6.3 母肽及衍生肽酶解前后的活性比較27
• 3.6.4 相關性分析27-28
• 3.7 肽的熒光效應與猝滅機制28-30
• 3.8 分子對接30-42
• 主要結論與展望42-44
• 主要結論42
• 展望42-44
• 致謝44-45
• 參考文獻45-51
• 附錄A：作者在攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文51-52
• 附錄B：分子對接結果52-56

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 黃文奕;血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑的藥理機制及其臨床應用[J];抗感染藥學;2005年03期

2 于婷婷;韓飛;陳光;;大豆降壓肽研究進展[J];糧油食品科技;2008年02期

3 張碧玫,余文博;作用于RAAS的抗高血壓藥研究進展[J];藥學進展;2005年03期

本文編號：1128212