本文關(guān)鍵詞：智能納米微載體負(fù)載血小板衍生生長因子C防治靜脈血栓形成的初步研究

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【摘要】：目的：(1)觀察血小板衍生生長因子C (platelet-derived growth factor-C, PDGF-C)寸血管內(nèi)皮細(xì)胞及間充質(zhì)干細(xì)胞的影響;(2)制備具有靶向抗凝負(fù)載PDGF-C的納米微載體;(3)驗證靶向抗凝納米微載體負(fù)載PDGF-C對血管內(nèi)皮損傷修復(fù)的治療作用。方法：(1)體外培養(yǎng)血管內(nèi)皮細(xì)胞及骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞并進行鑒定,不同濃度梯度的PDGF-C干預(yù),觀察對兩種細(xì)胞增殖能力及遷移能力的影響。MTT法繪制生長曲線,比較細(xì)胞增殖能力;流式檢測細(xì)胞周期；細(xì)胞劃痕實驗及transwell細(xì)胞遷移實驗比較對細(xì)胞遷移能力影響。(2)雙乳相法合成納米殼聚糖微載體,磺化反應(yīng)合成磺酸化殼聚糖微載體,利用微載體吸附PDGF-C及月幾球蛋白4抗體。通過透射電鏡描述其形態(tài)特征,紅外光譜及體外抗凝試驗對其理化特征進行描述,采用溶血實驗、細(xì)胞毒性實驗評價其生物安全性。(3)機械夾閉小鼠腎靜脈下段下腔靜脈建立內(nèi)皮損傷模型,動物實驗分三組,均在1、2、3天給藥并給予肝素抗凝治療防止血栓形成,給藥后第1、3、7天取出損傷段下腔靜脈,HE染色及vWF免疫熒光染色觀察血管損傷及修復(fù)情況;活體伊文氏藍(lán)染料(Evans blue)染色損傷的下腔靜脈，采用Lucia軟件計算染色血管和總血管面積,計算再內(nèi)皮化程度。結(jié)果：(1) PDGF-C能明顯刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖,增加兩種細(xì)胞S期細(xì)胞的比例,對內(nèi)皮細(xì)胞增殖成劑量依賴關(guān)系,對間充質(zhì)干細(xì)胞的促增殖作用在20ng/ml達高峰。同時,PDGF-C增強了內(nèi)皮細(xì)胞和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的遷移能力,對間充質(zhì)干細(xì)胞遷移作用強于血管內(nèi)皮細(xì)胞;(2)掃描電鏡顯示微載體藥物具有良好的形態(tài)結(jié)構(gòu),粒徑大小50-100nm;紅外圖譜提示存在磺化取代;微載體對PDGF-C包封率為54.42%,載藥率為20.33%：微載體體外72小時緩釋PDGF-C累計釋放率82.25%;體外凝血實驗表明藥物微載體具有顯著抗凝血作用(P0.05),抗凝血效果呈劑量效應(yīng)關(guān)系,當(dāng)濃度為50mg/ml時其抗凝血效果與肝素相比,差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P≥0.05);溶血實驗顯示,樣品濃度為10mg/ml、30mg/ml、50mg/ml 時,溶血率分別為0.81%、1.08%、1.21%，符合國標(biāo)關(guān)于溶血率小于5%的安全標(biāo)準(zhǔn);細(xì)胞毒性試驗，，微載體藥物濃度為10mg/ml時,細(xì)胞毒性級別為0級,濃度為30mg/ml、50mg/ml時,細(xì)胞毒性級別為1級,表明凝血微載體藥物的浸提液無明顯的細(xì)胞毒性;(3)微載體藥物移植后,血管內(nèi)皮修復(fù)速度明顯增加,7d修復(fù)率達到93.87%,且明顯減少了微血栓及內(nèi)膜增生的發(fā)生。結(jié)論：(1)血小板衍生生長因子-C可促進培養(yǎng)的血管內(nèi)皮細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖與遷移能力;(2)成功制備具有靶向抗凝血作用微載體,其生物安全性符合國家標(biāo)準(zhǔn)；(3)移植微載體藥物后,靜脈血管內(nèi)皮損傷修復(fù)速度明顯加快，減少相關(guān)并發(fā)癥。
【關(guān)鍵詞】：深靜脈血栓 內(nèi)皮細(xì)胞損傷修復(fù) 血小板衍生生長因子C 殼聚糖 納米微載體
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R543.6
【目錄】：

• 縮略詞表5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-11
• 第一部分 血小板衍生生長因子C的細(xì)胞生物學(xué)評價11-25
• 材料與方法11-16
• 結(jié)果16-23
• 討論23-24
• 結(jié)論24-25
• 第二部分 負(fù)載PDGF-C靶向納米殼聚糖微載體的制備及體內(nèi)外評價25-35
• 材料與方法25-30
• 結(jié)果30-34
• 討論34-35
• 結(jié)論35
• 第三部分 負(fù)載PDGF-C的納米殼聚糖微載體治療血管內(nèi)皮損傷體內(nèi)研究35-42
• 材料與方法36-37
• 結(jié)果37-40
• 討論40-41
• 結(jié)論41-42
• 參考文獻42-45
• 綜述45-61
• 參考文獻53-61
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的文章61-62
• 致謝62

本文編號：1107999