本文關(guān)鍵詞：MiRNA-26a對大鼠心臟重構(gòu)的調(diào)控作用

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【摘要】：【背景】心臟重構(gòu)在近年來被國內(nèi)外研究者認為是心力衰竭發(fā)生發(fā)展的根本原因之一,心臟重構(gòu)是由包括心臟成纖維細胞、心肌細胞和細胞外基質(zhì)共同參與、通過一系列復雜的分子途徑和細胞激活所誘導的動態(tài)發(fā)展過程。心臟重構(gòu)的病理形態(tài)主要表現(xiàn)為心肌細胞肥大、心肌間質(zhì)纖維化和心肌細胞凋亡,其中心肌間質(zhì)纖維化可以通過限制心肌細胞活動,增加心肌僵硬度,從而降低心室順應性,影響心肌的收縮和舒張功能。微小RNA(mi RNA)是一類長度約19-23個堿基的單鏈非編碼RNA分子,通過與靶基因的結(jié)合,抑制或降解靶基因的m RNA,實現(xiàn)轉(zhuǎn)錄后水平的負調(diào)控。大量研究證實mi R-26a在心臟重構(gòu)動物模型心肌組織中的表達下調(diào)[1.2],結(jié)合生物信息學軟件分析,TGF-β-smads相關(guān)通路很可能是mi R-26a的靶目標之一,而TGF-β-smads相關(guān)通路是心臟重構(gòu)、心衰發(fā)病過程中的重要信號轉(zhuǎn)導通路,mi R-26a可能會通過調(diào)控TGF-β-smads相關(guān)通路的表達,進而影響心臟重構(gòu)。為此,我們通過建立心臟重構(gòu)大鼠動物模型和細胞模型,研究mi RNA-26a對TGF-β-smads蛋白及其相關(guān)通路和膠原代謝的調(diào)控作用,以明確在心衰、心臟間質(zhì)纖維化發(fā)生發(fā)展過程中起重要作用蛋白的表達,從而基于該蛋白設(shè)計其特異性的mi RNA的分子藥物以調(diào)控該特異蛋白的表達,從而在心臟重塑過程中對膠原的代謝起調(diào)控作用,mi RNA及其下游特異性的靶蛋白和膠原代謝相關(guān)性的研究將為心肌重塑提供新的研究方向,建立起全新的針對心衰的治療靶點,對于心血管疾病治療的臨床應用具有重大的指導意義。一、研究目的1.探索mi R-26a在大鼠心臟重構(gòu)動物模型和細胞模型中的可能角色;2.通過細胞實驗,了解mi R-26a、TGF-β-smads相關(guān)通路蛋白和心臟重構(gòu)三者之間的關(guān)系。二、研究內(nèi)容1.手術(shù)制備大鼠心臟肥厚模型并心臟超聲檢測心臟結(jié)構(gòu)和功能,以驗證動物模型;2.采用QRT-PCR(Real time Quantitative PCR實時熒光定量PCR)連續(xù)檢測大鼠動物模型制備過程中血漿mi RNA-26a的表達變化;3.細胞水平研究mi RNA-26a對RCF(Rat Cardiac Fibroblasts大鼠心臟成纖維細胞)膠原合成的影響,并驗證其可能作用位點TGF-β、Smads相應m RNA及蛋白表達水平的變化。三、研究方法1.腹主動脈縮窄法建立大鼠壓力過負荷心臟重構(gòu)模型,用動物心臟彩超、病理組織切片染色等方法證實壓力過負荷心臟重構(gòu)模型建立成功。2.QRT-PCR法連續(xù)檢測TAAC(Transverse Abdominal Aortic Constrition腹主動脈縮窄術(shù))組及Sham(假手術(shù))組大鼠血漿mi R-26a的表達水平。3.RCF轉(zhuǎn)染mi R-26a mimics(擬似物)和inhibitor(抑制劑)及其各自NC(陰性對照)后,研究mi RNA-26a通過靶向TGF-β、smads蛋白通路調(diào)節(jié)膠原合成的功能。QRT-PCR法檢測各組mi R-26a的表達水平;Western blot檢測I型、III型膠原蛋白量的變化,QRT-PCR檢測各組間I型、III型膠原蛋白m RNA水平的變化;并Western blot方法檢測TGF-β及smads通路相關(guān)蛋白的變化(TGF-β1、smad4、smad7),QRT-PCR檢測各組TGF-β及smads通路蛋白的m RNA的改變(TGF-β1、smad4、smad7)。四、結(jié)果1.用TAAC法成功建立大鼠壓力過負荷心臟重構(gòu)模型;2.TAAC心臟重構(gòu)大鼠血漿中mi R-26a的水平與對照組(Sham)相比,第二周開始下調(diào),第三周達到高峰,之后處于穩(wěn)定水平但較對照組及術(shù)前仍有所下降(P㩳0.01);3.RCF轉(zhuǎn)染mi R-26a mimics后,mi R-26a表達量較其陰性對照組明顯升高(P㩳0.01);轉(zhuǎn)染mi R-26a inhibitor后,mi R-26a的表達量較其陰性對照組明顯下降(P㩳0.01);4.RCF轉(zhuǎn)染mi R-26a mimics后,TGF-β1、smad4 m RNA的表達量減少(P㩳0.01),TGF-β1、smad4的蛋白表達量減少(P㩳0.01),而轉(zhuǎn)染mi R-26a inhibitor后,TGF-β1、smad4 m RNA的表達量增多(P㩳0.01),TGF-β1、smad4的蛋白表達量增多(P㩳0.01);而smad7 m RNA及蛋白水平表達均未見明顯差異(P0.05)。5.RCF轉(zhuǎn)染mi R-26a mimics后,I型、III型膠原m RNA及蛋白表達增加(P㩳0.01),而轉(zhuǎn)染mi R-26a inhibitor后,I型、III型膠原m RNA及蛋白表達減少(P㩳0.01)。五、結(jié)論1.mi R-26a在大鼠心臟重構(gòu)模型中表達下調(diào)且發(fā)生在心臟重構(gòu)之前,對于臨床心衰或心肌重構(gòu)可能具有早期診斷意義。2.mi R-26a可能通過作用于靶點TGF-β-smads相關(guān)通路蛋白調(diào)控心臟重構(gòu)過程。
【關(guān)鍵詞】：miRNA 心臟重構(gòu) TGF-β-smads相關(guān)通路
【學位授予單位】：福建醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R541.6
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 第一章 前言11-14
• 第二章 材料與方法14-23
• 2.1 實驗材料14-17
• 2.1.1 儀器14
• 2.1.2 細胞與動物14
• 2.1.3 實驗試劑14-15
• 2.1.4 引物15-17
• 2.2 實驗方法17-23
• 2.2.1 動物實驗17-20
• 2.2.2 細胞實驗20-23
• 第三章 結(jié)果23-36
• 第四章 討論36-42
• 第五章 結(jié)論42-43
• 參考文獻43-46
• 綜述46-56
• 參考文獻53-56
• 致謝56

【參考文獻】

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1 朱霓;秦永文;荊清;;microRNAs:心血管疾病重要的調(diào)控因子[J];生命科學;2008年02期

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本文編號：1100719