本文關鍵詞：PH-LHD循環(huán)標志物的變化及其參與肺血管重構的機制

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【摘要】：研究背景:肺高壓(pulmonary hypertension,PH)是左心疾病(left heart disease,LHD)常見的并發(fā)癥,而LHD也是造成PH最常見的病因�，F(xiàn)行歐洲、美國及我國PH指南把左心疾病相關肺高壓(pulmonary hypertension due to left heart disease,PH-LHD)列為PH第二大類。肺血管收縮及肺血管重構是PH形成后得以維持并迅速進展的病理生理基礎,但其機制及治療方案均不是很明確。PH-LHD的形成機制可能與第一大類肺動脈高壓并不相同,因此,需要進一步深入研究PH-LHD的病理生理機制,為逆轉PH進展和臨床治療提供新的依據(jù)。在LHD患者中,PH起病隱匿,其癥狀如呼吸困難、乏力、胸痛等均不典型,往往被臨床忽視。心臟超聲在評估肺動脈收縮壓(pulmonary artery systolic pressure,PASP)時相對誤差較大,而右心導管屬于有創(chuàng)檢查,在臨床應用中也具有局限性。因此,臨床上需要進一步研究PH簡便易行的檢測和評估方法。近年來,生化標志物逐漸被廣泛應用,生物標志物能夠反映正常生物學過程和病理狀態(tài)。傳統(tǒng)的PH相關的標志物,包括腦鈉肽(BNP)、膽紅素、紅細胞分布寬度、尿酸、肌酐、胱抑素C和高密度脂蛋白等,雖缺乏特異性,但易于檢測。新近發(fā)現(xiàn),microRNA在疾病中發(fā)生表達水平變化,參與疾病的病理機制,而且microRNA在血清或血漿中穩(wěn)定存在,可以被檢測,有望成為新的生化標志物。但LHD導致PH時,循環(huán)標志物的變化目前尚不清楚。研究目的:1.探討預測PH-LHD的敏感普通生化標志物。2.利用microRNA芯片對合并和不合并PH的LHD患者的血清樣本,篩選出循環(huán)microRNA的差異表達譜,找出有預測PH意義的microRNA。3.利用主動脈弓縮窄的方法建立左心超負荷小鼠模型,觀察篩選microRNA表達變化,探討其與肺血管重構的關系。4.探討人肺動脈內皮細胞miR-206對人肺動脈平滑肌細胞增殖的影響及與Notch3信號的關系。研究方法:1.2014年1月至2015年5月在第三軍醫(yī)大學附屬新橋醫(yī)院住院的lhd患者共計353例,所有患者均行心臟超聲檢測評估pasp,參照2009年歐洲ph指南以pasp≥50mmhg作為診斷ph的依據(jù),其中有l(wèi)hd但不合并ph的患者216例(lhd對照組),lhd合并ph的患者137例(ph-lhd組)。另設年齡、性別匹配的健康對照64例(健康對照組)。分析普通生化標志物預測ph-lhd的價值。2.2014年6月至2015年5月在第三軍醫(yī)大學附屬新橋醫(yī)院住院的lhd患者共計82例,所有患者均行心臟超聲檢測評估pasp,參照2009年歐洲ph指南以pasp≥50mmhg作為診斷ph的依據(jù),其中有l(wèi)hd但不合并ph的患者47例(lhd對照組),lhd合并ph的患者35例(ph-lhd組)。另設年齡、性別匹配的健康對照17例(健康對照組)。另隨機選2例lhd患者和2例ph-lhd患者采集血清樣本行microrna芯片分析。所有受試者采集血清樣本,用qrt-pcr技術檢測血清microrna水平,分析microrna預測ph-lhd的準確性。3.建立主動脈弓縮窄(tac)及假手術(sham)小鼠模型(每組n=6),肺組織he染色觀察小動脈結構變化,檢測肺組織jagged2、notch3和mir-206的水平變化。4.對人肺動脈內皮細胞轉染mir-206mimics和mir-206inhibitors,檢測jagged2水平變化。建立jagged2穩(wěn)定過表達人肺動脈內皮細胞系,以及利用sirna干擾技術使人肺動脈內皮細胞jagged2表達下調,檢測mir-206水平變化。利用內皮細胞和平滑肌細胞的共培養(yǎng)技術,觀察人肺動脈內皮細胞mir-206和jagged2對人肺動脈平滑肌細胞notch3表達和增殖活性的影響。結果:1.與健康對照組及l(fā)hd對照組相比,ph-lhd組肺動脈以及心臟四室直徑均顯著增加,左室射血分數(shù)顯著降低(p均0.001)。生化標志物中,與健康對照組及l(fā)hd對照組相比,ph-lhd組的腦鈉肽(bnp)、總膽紅素、直接膽紅素(db)、間接膽紅素、紅細胞分布寬度(rdw)、尿酸和胱抑素c等水平均顯著升高(p均0.001)并且與pasp呈正相關(p均0.001),高密度脂蛋白(hdl)水平顯著降低(p0.001)且與pasp呈負相關(p0.001)。采用二元logistic正向逐步回歸篩選出預測ph-lhd的聯(lián)合標志物為bnp、db和rdw并獲得其預測模型,roc分析表明預測模型曲線下面積(auc)為0.858(95%ci:0.819~0.897,p0.001),閾值為0.256時敏感度為0.822,特異度為0.783,較單獨生化標志物預測價值高。2.芯片分析結果表明,PH-LHD患者外周血清中2個microRNA水平上調,16個microRNA水平下調。對mi R-206進一步驗證,表明PH-LHD患者外周循環(huán)的mi R-206水平下調,與PASP呈負相關,與循環(huán)動脈血壓無顯著相關性,與左室射血分數(shù)呈正相關。ROC分析表明miR-206對PH-LHD有預測價值(AUC=0.734,95%CI:0.636~0.832,P0.001),且通過Logistic預測方法分析,聯(lián)合miR-206、左心房舒張末期內徑(LAD)和BNP的預測價值更高(AUC=0.911,95%CI:0.854~0.968,P0.001)。3.TAC組小鼠模型的右心室收縮壓與Sham組相比差異無統(tǒng)計學意義(P0.05),但右心室等容收縮期壓力上升的最大速率(max dP/dt)顯著降低(P0.001),肺小動脈發(fā)生血管重構,肺組織Jagged2表達水平下調,Notch3表達水平上調,miR-206水平下調。4.人肺動脈內皮細胞miR-206可以抑制Jagged2的表達,并促進人肺動脈平滑肌細胞Notch3表達和細胞增殖活性。人肺動脈內皮細胞Jagged2可以促使miR-206表達,并抑制人肺動脈平滑肌細胞Notch3表達和細胞增殖活性。結論:LHD導致PH發(fā)生時,循環(huán)生化標志物水平和microRNA表達均發(fā)生顯著改變,且與肺動脈收縮壓具有相關性。血清miR-206水平降低與PH-LHD和心功能密切相關。mi R-206可能通過調節(jié)肺動脈內皮細胞Jagged2和肺動脈平滑肌細胞的Notch3信號參與肺血管重構。
【關鍵詞】：左心疾病 肺高壓 生化標志物 microRNA 血管重構
【學位授予單位】：第三軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R544.1
【目錄】：

• 縮略語表5-7
• 英文摘要7-11
• 中文摘要11-14
• 第一章 前言14-16
• 第二章 PH-LHD患者外周靜脈血生化標志物的特征及預測肺高壓的價值16-30
• 2.1 引言16
• 2.2 研究對象及材料16-17
• 2.3 方法17-18
• 2.4 結果18-26
• 2.5 討論26-30
• 第三章 PH-LHD患者血清microRNA的變化及預測肺高壓的價值30-47
• 3.1 引言30
• 3.2 研究對象及材料30-32
• 3.3 方法32-35
• 3.4 結果35-44
• 3.5 討論44-47
• 第四章 血管內皮miR-206 調節(jié)人肺動脈平滑肌細胞增殖的作用和機制47-73
• 4.1 引言47-48
• 4.2 材料48-53
• 4.3 方法53-63
• 4.4 結果63-70
• 4.5 討論70-73
• 全文結論73-74
• 本研究的創(chuàng)新之處74-75
• 本研究的局限性75-76
• 參考文獻76-82
• 文獻綜述 PH-LHD的發(fā)病機制82-95
• 參考文獻89-95
• 附錄 融解曲線95-96
• 攻讀學位期間的研究成果96-97
• 致謝97

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1 申霖;高芬;;低氧性肺動脈高壓肺血管重構中的細胞因子調控[J];社區(qū)醫(yī)學雜志;2011年02期

2 荊志成;;肺血管重構[J];中華醫(yī)學信息導報;2006年02期

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5 劉瀚e，

本文編號：1087045