本文關(guān)鍵詞：聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1在糖尿病心肌病中的作用及機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 糖尿病心肌病 PARP-1 高糖血癥 炎癥反應(yīng) 凋亡

【摘要】：背景糖尿病是一種慢性,漸進(jìn)性的代謝性疾病,其主要特征是胰島素缺乏和/或抵抗,導(dǎo)致血漿葡萄糖水平的升高,并且確實(shí)是21世紀(jì)人類健康的一大威脅,由于發(fā)病率的上升,其狀況令人擔(dān)憂,在過去二十年里,吸引了相當(dāng)多的關(guān)注。糖尿病心肌病(DCM)是糖尿病患者心功能不全且沒有冠狀動(dòng)脈硬化和高血壓因素的影響,它也是人類健康的一大威脅,也是亟待解決的臨床問題。根據(jù)本課題組之前的研究結(jié)果,高血糖能夠誘導(dǎo)大鼠心肌細(xì)胞凋亡,因此本實(shí)驗(yàn)使用葡萄糖刺激大鼠心肌細(xì)胞,構(gòu)建高血糖細(xì)胞模型,高糖刺激是否引起細(xì)胞氧化應(yīng)激和DNA損傷,并且影響PARP-1表達(dá)和活性。PARP-1在高糖導(dǎo)致的炎癥反應(yīng)和凋亡信號(hào)通路中扮演著什么樣的作用。PARP-1在氧化應(yīng)激和DNA損傷中扮演者重要的角色。本實(shí)驗(yàn)對(duì)PARP-1進(jìn)行干預(yù),以期闡明PARP-1在糖尿病心肌病中的潛在作用機(jī)制以及找到治療糖尿病心肌病的可行的治療方法。目的構(gòu)建小鼠糖尿病心肌病疾病模型,研究PARP-1在糖尿病心肌病中的潛在作用機(jī)制,同時(shí)構(gòu)建心肌細(xì)胞高血糖模型,進(jìn)一步研究PARP-1在心肌細(xì)胞凋亡中的具體調(diào)控機(jī)制。方法小鼠糖尿病心肌病建模,20只10周齡雄性C57BL/6野生型小鼠和20只10周齡雄性PARP-1基因敲除小鼠(美國杰克森實(shí)驗(yàn)室),模型組小鼠給予腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ),劑量為50mg/kg,對(duì)照組小鼠腹腔注射等體積的檸檬酸鹽緩沖液,連續(xù)注射5天。從小鼠尾靜取少量血液,使用羅氏血糖儀檢測(cè)小鼠血糖變化,如果小鼠隨機(jī)血糖濃度16.7 mmol/l,則認(rèn)為小鼠糖尿病模型建模成功。老鼠被飼養(yǎng)在無病原微生物的動(dòng)物房并且確保有足夠的食物和水。用瓊脂糖凝膠PCR鑒定PARP-1敲基因小鼠的基因型。老鼠取材前進(jìn)行超聲心動(dòng)圖檢測(cè),心臟直徑和功能用加拿大小動(dòng)物成像儀檢測(cè)。檢測(cè)左心室射血分?jǐn)?shù),縮短分?jǐn)?shù),E/A峰(二尖瓣血流速度),左心室舒張末期內(nèi)徑。所有的測(cè)量必須在統(tǒng)一觀測(cè)條件下的5個(gè)心動(dòng)周期。尾靜脈測(cè)量小鼠心率,收縮壓和舒張壓。之后收集老鼠心肌標(biāo)本,用Western Bolt and RT-PCR檢測(cè)基因和蛋白表達(dá)情況,HE染色和免疫組化觀察心臟形態(tài)學(xué)變化。培養(yǎng)細(xì)胞并造高血糖心肌細(xì)胞模型,PARP-1干預(yù)之后用Western Blot and Realtime-PCR檢測(cè)心肌細(xì)胞相關(guān)炎癥因子和凋亡因子變化,闡明PARP-1在糖尿病心肌病中的潛在作用機(jī)制。結(jié)果(1)高糖通過誘導(dǎo)DNA損傷增加了PARP-1的活性和表達(dá)。(2)PARP-1抑制劑在體外實(shí)驗(yàn)中減輕了高糖引起的炎癥因子上調(diào)。(3)PARP-1抑制劑減輕了高糖誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。(4)PARP-1抑制劑在體外實(shí)驗(yàn)中增加了IGF-1R/Akt的磷酸化水平。(5)PARP-1缺失恢復(fù)了糖尿病小鼠的心功能并且減輕了高糖血癥引起的心肌重塑。(6)高糖血癥增加了硝基酪氨酸的水平并且增加了PARP-1的活性和表達(dá)。結(jié)論1、在體外,高糖刺激增加了氧化應(yīng)激并且增加了高糖誘導(dǎo)的DNA損傷引起的PARP-1的活性和表達(dá)。PARP-1干擾顯著地減少了高糖引起的炎癥因子表達(dá),包括TNF-α,IL-1β,IL-6,ICAM-1和iNOS。同時(shí)PARP-1干擾通過下調(diào)乳溝半胱天冬酶和激活I(lǐng)GF-1R/Akt信號(hào)通路減輕了心肌細(xì)胞凋亡。2、在體內(nèi),高糖血癥增加了硝基酪氨酸的表達(dá)和PARP-1的活性和表達(dá)。與正常小鼠相比,PARP-1缺失顯著地減少了高糖血癥引起的細(xì)胞凋亡和炎癥反應(yīng),并改善了心肌的組織學(xué)異常和心功能。
【關(guān)鍵詞】：糖尿病心肌病 PARP-1 高糖血癥 炎癥反應(yīng) 凋亡
【學(xué)位授予單位】：河南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R587.2;R542.2
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-11
• 縮略詞表11-13
• 引言13-15
• 1 前言15-17
• 2 材料、儀器與試劑17-23
• 2.1 材料與試劑17-18
• 2.2 儀器18-20
• 2.3 部分溶劑配制方法20-23
• 3 實(shí)驗(yàn)方法23-33
• 3.1 動(dòng)物模型建立23
• 3.2 動(dòng)物模型指標(biāo)檢測(cè)23-25
• 3.3 細(xì)胞培養(yǎng)與干預(yù)25-27
• 3.4 總RNA提取27
• 3.5 引物設(shè)計(jì)27
• 3.6 實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)27-28
• 3.7 小鼠基因型的鑒定28-29
• 3.8 彗星實(shí)驗(yàn)29
• 3.9 ELISA29
• 3.10 Western Blot蛋白凝膠電泳29-31
• 3.11 流式細(xì)胞術(shù)31
• 3.12 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析31-33
• 4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果33-43
• 4.1 動(dòng)物模型的成功構(gòu)建33-34
• 4.1.1 小鼠基因型的結(jié)果鑒定33
• 4.1.2 各組小鼠一般情況33
• 4.1.3 小鼠的通用指標(biāo)檢測(cè)33-34
• 4.2 形態(tài)學(xué)觀察及部分基因檢測(cè)34-38
• 4.2.1 小鼠心肌HE染色34-35
• 4.2.2 小鼠心動(dòng)超聲結(jié)果35-36
• 4.2.3 小鼠心肌凋亡相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)36-37
• 4.2.4 小鼠心肌炎癥反應(yīng)相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)37-38
• 4.3 分子學(xué)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)38-43
• 4.3.1 氧化應(yīng)激以及DNA損傷檢測(cè)38-39
• 4.3.2 細(xì)胞炎癥因子表達(dá)檢測(cè)39-40
• 4.3.3 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡40-41
• 4.3.4 信號(hào)通路蛋白檢測(cè)41-43
• 討論43-45
• 結(jié)論45-47
• 參考文獻(xiàn)47-50
• 綜述 糖尿病心肌病的研究進(jìn)展50-59
• 參考文獻(xiàn)55-59
• 致謝59-61
• 在讀期間參加的學(xué)術(shù)會(huì)議及研究成果61-62

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 余國膺;糖尿病心肌病:一種特異的表型[J];中國慢性病預(yù)防與控制;2005年01期

2 任駿;糖尿病心肌病的基礎(chǔ)與臨床研究現(xiàn)狀[J];心血管病學(xué)進(jìn)展;2001年05期

3 李偉 ,吳智勇;糖尿病心肌病的研究進(jìn)展[J];海南醫(yī)學(xué);2002年04期

4 張風(fēng)雷,玄軍華,崔良民;腫瘤壞死因子-α與糖尿病心肌病關(guān)系的研究[J];濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2003年03期

5 安濰洲,龔敏,董硯虎;糖尿病心肌病發(fā)病機(jī)理的研究進(jìn)展[J];遼寧實(shí)用糖尿病雜志;2004年03期

6 王先銀,李樹森,廖明松;糖尿病心肌病的防治研究進(jìn)展[J];西南國防醫(yī)藥;2004年04期

7 李長江,胡燕燕;糖尿病心肌病的研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué).心血管疾病分冊(cè);2004年04期

8 龔明,肖謙;過氧化物酶體增殖物激活受體α與糖尿病心肌病[J];國外醫(yī)學(xué).內(nèi)分泌學(xué)分冊(cè);2004年06期

9 曾琳琳,張曉剛;糖尿病心肌病發(fā)病機(jī)制的研究[J];國外醫(yī)學(xué).心血管疾病分冊(cè);2005年05期

10 王先銀,李樹森,廖明松;糖尿病心肌病的研究進(jìn)展[J];西部醫(yī)學(xué);2005年06期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 白淑芝;孫健;張寧;李宏霞;侯俊青;孔凡娟;徐長慶;;鈣敏感受體在糖尿病心肌病發(fā)生中的作用[A];第八屆海峽兩岸心血管科學(xué)研討會(huì)論文集[C];2011年

2 崔金濤;許祖建;;糖尿病心肌病的研究近況[A];第七次中國中西醫(yī)結(jié)合糖尿病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年

3 吳濤;胡申江;;結(jié)締組織生長因子在糖尿病心肌病中作用的研究進(jìn)展[A];2004年浙江省心血管病學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2004年

4 黃靜;倪青;;糖尿病心肌病的中西醫(yī)研究進(jìn)展[A];5TH全國中西醫(yī)結(jié)合內(nèi)分泌代謝病學(xué)術(shù)大會(huì)暨糖尿病論壇論文集[C];2012年

5 張薇;鐘明;張運(yùn);;糖尿病心肌病心肌損傷機(jī)制研究進(jìn)展[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十一次全國心血管病學(xué)術(shù)會(huì)議專題報(bào)告匯編[C];2009年

6 王東;周麗諾;;糖尿病心肌病大鼠的心肌基因表達(dá)譜分析及意義[A];2006年中華醫(yī)學(xué)會(huì)糖尿病分會(huì)第十次全國糖尿病學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2006年

7 劉冬戈;喬旭柏;杜俊;楊重慶;方芳;馬正中;陳曼麗;錢貽簡;;糖尿病心肌病的病理組織學(xué)觀察[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)病理學(xué)分會(huì)2007年學(xué)術(shù)年會(huì)暨第九屆全國病理大會(huì)論文匯編[C];2007年

8 張冉;江力勤;趙圣剛;陳善漿;葉先才;;新西蘭大白兔糖尿病心肌病模型的建立[A];2012年浙江省內(nèi)科學(xué)年會(huì)論文集[C];2012年

9 廖明松;王先銀;鄧旦;陳重;梁燕;賴小今;;糖尿病心肌病左室功能的多普勒組織成像評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)研究[A];2013中國西部聲學(xué)學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集（下）[C];2013年

10 夏國蓮;馬偉斌;江榮林;雷澍;王靈聰;吳建濃;黃立權(quán);吳艷春;智屹惠;朱美飛;;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激蛋白在糖尿病心肌病大鼠表達(dá)的變化[A];第三屆全國中西醫(yī)結(jié)合重癥醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2013年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 記者 白毅;燈盞花素為糖尿病心肌病治療辟新徑[N];中國醫(yī)藥報(bào);2009年

2 記者　應(yīng)洪舒;糖尿病心肌病中氧自由基作用新研究[N];中國醫(yī)藥報(bào);2006年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王佳興;Pink1/Parkin介導(dǎo)的線粒體自噬在糖尿病心肌病中的作用[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

2 柏丹娜;Inpp5f在糖尿病心肌病變中的作用及其機(jī)制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

3 肖鳳英;崔金濤學(xué)術(shù)思想與臨床經(jīng)驗(yàn)總結(jié)及益氣養(yǎng)陰法治療糖尿病心肌病臨床與實(shí)驗(yàn)研究[D];湖北中醫(yī)藥大學(xué);2015年

4 李建濤;Peli1蛋白在糖尿病心肌病中的作用及其機(jī)制研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2014年

5 相田園;中藥有效組分配伍調(diào)控p38MAPK通路改善糖尿病心肌病的機(jī)理研究[D];中國中醫(yī)科學(xué)院;2016年

6 瞿華;1,25(OH)_2D_3對(duì)PARP1/SIRT1/mTOR通路介導(dǎo)的糖尿病心肌病的保護(hù)作用研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2016年

7 叢麗;心肌胃促胰酶與糖尿病心肌病變關(guān)系的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2004年

8 張楠;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療糖尿病心肌病的研究[D];浙江大學(xué);2007年

9 常文光;黃連素對(duì)糖尿病心肌病的保護(hù)作用及機(jī)制研究[D];吉林大學(xué);2013年

10 鄒敬韜;九里香葉總黃酮及其單體對(duì)糖尿病心肌病的保護(hù)作用及機(jī)制[D];吉林大學(xué);2014年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 秦瑞婕;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在糖尿病心肌病中的分子機(jī)制及蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D];山東大學(xué);2015年

2 初銘鈺;糖心舒合劑改善糖尿病心肌病的臨床及實(shí)驗(yàn)研究[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2015年

3 王瑩;ACE2-ACE平衡及炎癥反應(yīng)與糖尿病心肌病[D];大連醫(yī)科大學(xué);2015年

4 王巖飛;基于ERS介導(dǎo)的凋亡信號(hào)通路探討中藥治療糖尿病心肌病的機(jī)制[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2016年

5 黃玉妹;糖心康治療氣陰兩虛兼絡(luò)脈瘀阻型糖尿病心肌病的臨床研究[D];黑龍江中醫(yī)藥大學(xué);2016年

6 荊哲;MICU1下調(diào)介導(dǎo)的線粒體鈣攝取障礙在糖尿病心肌病發(fā)生中的作用及機(jī)制[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2016年

7 周鵬飛;Corin介導(dǎo)的pro-ANP活化途徑與糖尿病心肌病關(guān)系的實(shí)驗(yàn)研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2016年

8 胡亞會(huì);Corin在糖尿病心肌病發(fā)病機(jī)制中的作用[D];天津醫(yī)科大學(xué);2016年

9 陶劍;肝X受體激動(dòng)劑T0901317對(duì)糖尿病心肌病大鼠心肌細(xì)胞炎癥及凋亡的影響[D];南昌大學(xué);2016年

10 孟哲穎;MiR-182靶向基因Rac1調(diào)控糖尿病心肌病變的研究[D];上海交通大學(xué);2015年

，

本文編號(hào)：1074721