本文關(guān)鍵詞：循環(huán)內(nèi)皮細(xì)胞在心血管疾病中檢測(cè)方法的建立與驗(yàn)證

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【摘要】：目的:循環(huán)內(nèi)皮細(xì)胞(circulating endothelial cells,CECs)產(chǎn)生于血管損傷過(guò)程。血管損傷與多種疾病的發(fā)生息息相關(guān),這其中包括了急性心肌梗塞(acute myocardial infarction,AMI)。因此CECs可能作為這些疾病的發(fā)生及預(yù)后標(biāo)記物。本實(shí)驗(yàn)研究CECs在AMI病患和小鼠疾病模型的外周血中的水平,并監(jiān)測(cè)其在預(yù)后中的表達(dá)狀況。方法:基于標(biāo)準(zhǔn)流式細(xì)胞術(shù)的穩(wěn)定,本實(shí)驗(yàn)組設(shè)計(jì)了多參數(shù)共同標(biāo)記CECs體系,檢測(cè)人體外周血中CECs的表達(dá)抗體為Hoechst33342+/CD45-/CD31+/CD146+/CD133-,檢測(cè)小鼠外周血中CECs的表達(dá)抗體為Hoechst 33342+/CD45-/CD31+/KDR+/CD117-。首先,為了研究本設(shè)計(jì)體系的穩(wěn)定性,本實(shí)驗(yàn)組構(gòu)建了VEGF處理小鼠,收集其外周血,同時(shí)收集了AMI病患的外周血做組內(nèi)穩(wěn)定性檢測(cè)。其次,為了研究此檢測(cè)系統(tǒng)的有效性,本實(shí)驗(yàn)組用Real-time PCR和流式細(xì)胞術(shù)共同檢測(cè)樣品中CEC含量。最后,用流式檢測(cè)臨床的大量樣本中CECs占外周血單核細(xì)胞群體的比例,這批臨床樣本包括61名AMI患者,45名健康成年人,以及19名治療一個(gè)月后的AMI病患。結(jié)果:本實(shí)驗(yàn)做設(shè)計(jì)的基于流式細(xì)胞術(shù)的多參數(shù)共同標(biāo)記CECs體系是準(zhǔn)確可行。在AMI病患的外周血中CECs的水平確實(shí)顯著高于正常健康機(jī)體外周血中CECs的含量。經(jīng)過(guò)一個(gè)月的治療,AMI病患外周血系統(tǒng)中CECs含量較治療前有了明顯的下降。結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)建立的基于多抗體流式細(xì)胞術(shù)的CECs水平檢測(cè)方法可針對(duì)AMI患者的診斷和預(yù)后進(jìn)行更為精準(zhǔn)的檢測(cè)。
【關(guān)鍵詞】：循環(huán)內(nèi)皮細(xì)胞(CECs) 急性心肌梗塞(AMI) 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF) 流式細(xì)胞術(shù)
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R54
【目錄】：

• 摘要10-12
• ABSTRACT12-14
• 主要縮略詞14-15
• 第一部分 循環(huán)內(nèi)皮細(xì)胞在急性心肌梗塞疾病中檢測(cè)方法的設(shè)計(jì)及其臨床有效性驗(yàn)證15-50
• 前言15-20
• 第一章 多參數(shù)共同標(biāo)記CEC體系的設(shè)計(jì)與體系變異性檢測(cè)20-37
• 1.1 材料和方法20-30
• 1.1.1 主要試劑和儀器20-22
• 1.1.2 細(xì)胞培養(yǎng)22
• 1.1.3 VEGF小鼠模型構(gòu)建22
• 1.1.4 人體外周血樣本22-23
• 1.1.5 外周血樣本采集23
• 1.1.6 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)血液樣本23-26
• 1.1.7 Real-time PCR檢測(cè)CECs水平26-29
• 1.1.8 實(shí)驗(yàn)變異性檢測(cè)29
• 1.1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析29-30
• 1.2 結(jié)果30-35
• 1.2.1 組內(nèi)檢測(cè)本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性30-32
• 1.2.2 Real-time PCR檢測(cè)KDR基因表達(dá)對(duì)比流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CECs的含量32-33
• 1.2.3 時(shí)間對(duì)CECs檢測(cè)含量變化的影響33-35
• 1.3 討論35-37
• 第二章 多參數(shù)共同標(biāo)記CEC體系在臨床中的應(yīng)用37-45
• 2.1 材料和方法37-41
• 2.1.1 主要試劑和儀器37-38
• 2.1.2 人體外周血樣本38-39
• 2.1.3 外周血樣本采集39
• 2.1.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)血液樣本39-41
• 2.1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析41
• 2.2 結(jié)果41-44
• 2.2.1 檢驗(yàn)CECs在臨床AMI病患中水平表達(dá)41-43
• 2.2.2 檢驗(yàn)CECs在臨床AMI病患預(yù)后中水平表達(dá)43-44
• 2.3 討論44-45
• 總結(jié)45-46
• 參考文獻(xiàn)（列出全部作者）46-50
• 第二部分 葉酸受體靶標(biāo)的近紅外熒光探針的合成及其細(xì)胞成像性驗(yàn)證50-71
• 前言50-55
• 3.1 設(shè)計(jì)思路55-56
• 3.2 儀器與試劑56-57
• 3.3 目標(biāo)化合物及中間體的合成57-60
• 3.3.1 化合物3的合成57
• 3.3.2 化合物5的合成57-58
• 3.3.3 化合物6的合成58
• 3.3.4 化合物7的合成58
• 3.3.5 熒光染料的合成58
• 3.3.6 目標(biāo)產(chǎn)物FA-EDBEA-CS2的合成58-59
• 3.3.7 目標(biāo)產(chǎn)物的光學(xué)性質(zhì)檢測(cè)59
• 3.3.8 細(xì)胞培養(yǎng)與成像59-60
• 3.4 結(jié)果與討論60-66
• 3.4.1 熒光染料的合成60-61
• 3.4.2 化合物3的合成61-62
• 3.4.3 化合物 5、6、7 的合成62
• 3.4.4 目標(biāo)產(chǎn)物FA-EDBEA-CS2的合成62-63
• 3.4.5 FA-EDBEA-CS2光譜性能的研究63-65
• 3.4.6 FA-EDBEA-CS2的生物成像65-66
• 3.5 討論66-68
• 參考文獻(xiàn)（列出全部作者）68-71
• 致謝71-72
• 附錄一 共同第一作者，已接受發(fā)表的文章72-80
• 附錄二 化學(xué)反應(yīng)所合成的中間產(chǎn)物、目標(biāo)產(chǎn)物的核磁（NMR），質(zhì)譜（LMS）譜圖80-83
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文83

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