本文關(guān)鍵詞：匯利心康對心肌纖維化的影響及其與miR-199關(guān)系的初步研究

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【摘要】：心肌纖維化(myocardial fibrosis,MF)是指心肌組織中膠原纖維過量堆積,膠原蛋白含量明顯升高或膠原蛋白成分發(fā)生改變,主要表現(xiàn)為心肌成纖維細胞增殖并分泌大量膠原蛋白。心肌纖維化是多種心臟血管疾病的共同病理改變,是心室重構(gòu)的主要表現(xiàn)之一,可導(dǎo)致心室舒張功能異常、心臟電生理紊亂、心律失常,終末期可因冠狀動脈儲備顯著下降而導(dǎo)致猝死。近年來,減緩或逆轉(zhuǎn)心肌纖維化已成為當前治療高血壓及慢性充血性心力衰竭的重要目標之一。目前,心肌纖維化的發(fā)病機制尚不清楚,其特異性防治藥物也亟待進一步發(fā)展。小RNA(microRNAs,mi RNAs)是一段22~25個核苷酸的非編碼單鏈RNA,它通過與下游靶基因的3’非編碼區(qū)(untranslated region,UTR)發(fā)生特異性結(jié)合,參與細胞的生長,屬轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)。已有研究提示一些miRNAs在心臟重構(gòu)中表達異常,但mi RNAs在心肌纖維化過程中的表達變化規(guī)律及作用機制尚待進一步研究。在心肌纖維化等心臟重構(gòu)過程中,鳥苷酸結(jié)合蛋白Gq處于核心地位,多種導(dǎo)致心臟重構(gòu)的主要信號通路都通過與Gq蛋白相偶聯(lián)而激活下游信號。十余年來,本實驗室研究開發(fā)了Gq蛋白α亞單位羧基末端模擬肽匯利心康(HLXK),已在多種動物和細胞模型中證實,具有良好的抗心肌肥大作用。本研究擬在我們預(yù)實驗工作的基礎(chǔ)上,開展HLXK防治心肌纖維化與miRNA的關(guān)系研究,旨在為深化對HLXK防治心肌纖維化機制的認識和尋找新的有效分子靶標提供實驗基礎(chǔ)。方法:1.雄性SPF級昆明小鼠,采用去甲腎上腺素(Norepinephrine,NE 1.5mg/kg)制備心肌纖維化模型,連續(xù)20天;用5mg/kg的氯沙坦作為陽性對照;HLXK組在給予去甲腎上腺素的同時給予HLXK(30μg/kg,90μg/kg)。給藥后第21天,處死小鼠,稱量并計算左心室質(zhì)量指數(shù);每組取6只小鼠的左心室組織,置于4%多聚甲醛中固定2天后,苦味酸-天狼星紅染色,觀察小鼠左心室心肌組織膠原纖維變化;每組取6只小鼠左心室組織,精確稱取濕重后,試劑盒檢測小鼠左心室組織羥脯氨酸含量。HE染色觀察小鼠左心室心肌組織形態(tài)學變化。采用RT-q PCR方法,檢測小鼠左心室組織mirna表達變化。2.離體培養(yǎng)大鼠心臟成纖維細胞中,給予終濃度為1×10-7mol/l的angⅡ造模,并檢測hlxk對angⅡ誘導(dǎo)的心臟成纖維細胞中mirna的表達變化的影響,分別觀察hlxk和mir-199對成纖維細胞膠原蛋白Ⅰ、Ⅲ基因和蛋白表達水平的影響,轉(zhuǎn)染mir-199inhibitor或者mimic,觀察mir-199對心臟成纖維細胞中膠原蛋白Ⅰ、Ⅲ基因和蛋白表達變化的影響。3.離體培養(yǎng)大鼠心肌細胞,給予終濃度為1×10-6mol/l的ne造模,檢測hlxk對ne誘導(dǎo)的離體培養(yǎng)的心肌細胞mirna表達變化的影響,分別觀察hlxk和mir-199對心肌細胞[3h]-亮氨酸摻入量的影響,轉(zhuǎn)染mir-199inhibitor或者mimic,觀察mir-199對心肌細胞[3h]-亮氨酸摻入量的影響。結(jié)果:1.造模第21天,模型組lvmi顯著高于對照組;與模型組相比,90μg/kghlxk可顯著降低模型組lvmi�？辔端�-天狼猩紅染色發(fā)現(xiàn),模型組心肌組織膠原纖維沉積顯著增加(p0.01),hlxk組的膠原纖維沉積較模型組明顯減少(p0.01);模型組小鼠左心室組織羥脯氨酸含量顯著增加了24.66%,90μg/kghlxk可顯著減少羥脯氨酸含量(p0.01)。體外試驗發(fā)現(xiàn),與angⅡ模型組相比,30及90μg/kghlxk均可顯著降低膠原蛋白Ⅰ基因和蛋白表達量(p0.01),但對膠原蛋白Ⅲ基因和蛋白表達無明顯影響。he染色表明,hlxk組心肌細胞排列基本整齊,心肌細胞纖維化明顯減輕,未見明顯的炎細胞浸潤。在該動物模型中,模型組左心室中mir-199、mir-499和mirna-1-2-5p的表達顯著增高,分別升高了731%、148%、242%;在給予hlxk防治心臟肥大的同時,也可明顯抑制mirna表達增加(p0.01)。2.在培養(yǎng)的離體心臟成纖維細胞中,給予終濃度1×10-7mol/langⅡ造�？娠@著上調(diào)心臟成纖維細胞mir-199的含量(p0.01);同時給予hlxk11.3mg/l可顯著抑制mir-199的基因和蛋白表達(p0.01)。mir-199inhibitor可顯著減少膠原蛋白Ⅰ基因和蛋白表達(p0.01),僅轉(zhuǎn)染mir-199mimic即可顯著增加114.80%膠原蛋白Ⅰ的表達(p0.01),而mir-199inhibitor對膠原蛋白Ⅲ基因和蛋白表達量影響不明顯。3.在培養(yǎng)的離體乳鼠心肌細胞中,終濃度1×10-6mol/lne可顯著增加心肌細胞[3h]-亮氨酸摻入,hlxk可顯著降低ne導(dǎo)致的[3h]-亮氨酸摻入量30.5%,還可顯著抑制ne升高的mir-499、mir-1-2-5p和mir-199的表達。30nmol/lmir-199inhibitor可顯著減少ne導(dǎo)致的心肌細胞[3h]-亮氨酸摻入量的增加,而30nmol/lmir-199mimic可明顯增加心肌細胞[3h]-亮氨酸的摻入量。結(jié)論:1.HLXK可減少模型動物心臟中I型膠原蛋白的生成,顯著抑制心肌纖維化的發(fā)生。2.HLXK防治心肌纖維化及心臟重構(gòu)的機制可能與其降低miR-199的表達改變有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：心肌纖維化 HLXK miR-199
【學位授予單位】：第三軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R54
【目錄】：

• 英文縮寫詞表4-5
• 英文摘要5-8
• 中文摘要8-11
• 前言11-13
• 材料和方法13-27
• 結(jié)果27-38
• 討論38-42
• 全文結(jié)論42-43
• 參考文獻43-47
• 文獻綜述 心肌成纖維細胞與miRNA47-61
• 參考文獻55-61
• 碩士在讀期間發(fā)表的論文61-62
• 致謝62

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 王妍;盧小嵐;楊華;李曉輝;張海港;;多肽藥物匯利心康對小鼠心肌肥大與肌球蛋白重鏈表達的影響[J];中國藥學雜志;2011年20期

2 盧小嵐;楊華;徐亞莉;劉雅;王妍;李曉輝;張海港;;G蛋白抑制肽GCIP-27對大鼠慢性心力衰竭的影響[J];中國新藥與臨床雜志;2011年02期

3 王秀琴;李曉輝;張海港;程軼群;;GCIP-27對自發(fā)性高血壓大鼠左心室結(jié)構(gòu)影響的實驗研究[J];中國藥理學通報;2007年08期

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本文編號：1039641