本文關(guān)鍵詞：匯利心康對(duì)心肌纖維化的影響及其與miR-199關(guān)系的初步研究

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【摘要】：心肌纖維化(myocardial fibrosis,MF)是指心肌組織中膠原纖維過(guò)量堆積,膠原蛋白含量明顯升高或膠原蛋白成分發(fā)生改變,主要表現(xiàn)為心肌成纖維細(xì)胞增殖并分泌大量膠原蛋白。心肌纖維化是多種心臟血管疾病的共同病理改變,是心室重構(gòu)的主要表現(xiàn)之一,可導(dǎo)致心室舒張功能異常、心臟電生理紊亂、心律失常,終末期可因冠狀動(dòng)脈儲(chǔ)備顯著下降而導(dǎo)致猝死。近年來(lái),減緩或逆轉(zhuǎn)心肌纖維化已成為當(dāng)前治療高血壓及慢性充血性心力衰竭的重要目標(biāo)之一。目前,心肌纖維化的發(fā)病機(jī)制尚不清楚,其特異性防治藥物也亟待進(jìn)一步發(fā)展。小RNA(microRNAs,mi RNAs)是一段22~25個(gè)核苷酸的非編碼單鏈RNA,它通過(guò)與下游靶基因的3’非編碼區(qū)(untranslated region,UTR)發(fā)生特異性結(jié)合,參與細(xì)胞的生長(zhǎng),屬轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)。已有研究提示一些miRNAs在心臟重構(gòu)中表達(dá)異常,但mi RNAs在心肌纖維化過(guò)程中的表達(dá)變化規(guī)律及作用機(jī)制尚待進(jìn)一步研究。在心肌纖維化等心臟重構(gòu)過(guò)程中,鳥(niǎo)苷酸結(jié)合蛋白Gq處于核心地位,多種導(dǎo)致心臟重構(gòu)的主要信號(hào)通路都通過(guò)與Gq蛋白相偶聯(lián)而激活下游信號(hào)。十余年來(lái),本實(shí)驗(yàn)室研究開(kāi)發(fā)了Gq蛋白α亞單位羧基末端模擬肽匯利心康(HLXK),已在多種動(dòng)物和細(xì)胞模型中證實(shí),具有良好的抗心肌肥大作用。本研究擬在我們預(yù)實(shí)驗(yàn)工作的基礎(chǔ)上,開(kāi)展HLXK防治心肌纖維化與miRNA的關(guān)系研究,旨在為深化對(duì)HLXK防治心肌纖維化機(jī)制的認(rèn)識(shí)和尋找新的有效分子靶標(biāo)提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法:1.雄性SPF級(jí)昆明小鼠,采用去甲腎上腺素(Norepinephrine,NE 1.5mg/kg)制備心肌纖維化模型,連續(xù)20天;用5mg/kg的氯沙坦作為陽(yáng)性對(duì)照;HLXK組在給予去甲腎上腺素的同時(shí)給予HLXK(30μg/kg,90μg/kg)。給藥后第21天,處死小鼠,稱(chēng)量并計(jì)算左心室質(zhì)量指數(shù);每組取6只小鼠的左心室組織,置于4%多聚甲醛中固定2天后,苦味酸-天狼星紅染色,觀察小鼠左心室心肌組織膠原纖維變化;每組取6只小鼠左心室組織,精確稱(chēng)取濕重后,試劑盒檢測(cè)小鼠左心室組織羥脯氨酸含量。HE染色觀察小鼠左心室心肌組織形態(tài)學(xué)變化。采用RT-q PCR方法,檢測(cè)小鼠左心室組織mirna表達(dá)變化。2.離體培養(yǎng)大鼠心臟成纖維細(xì)胞中,給予終濃度為1×10-7mol/l的angⅡ造模,并檢測(cè)hlxk對(duì)angⅡ誘導(dǎo)的心臟成纖維細(xì)胞中mirna的表達(dá)變化的影響,分別觀察hlxk和mir-199對(duì)成纖維細(xì)胞膠原蛋白Ⅰ、Ⅲ基因和蛋白表達(dá)水平的影響,轉(zhuǎn)染mir-199inhibitor或者mimic,觀察mir-199對(duì)心臟成纖維細(xì)胞中膠原蛋白Ⅰ、Ⅲ基因和蛋白表達(dá)變化的影響。3.離體培養(yǎng)大鼠心肌細(xì)胞,給予終濃度為1×10-6mol/l的ne造模,檢測(cè)hlxk對(duì)ne誘導(dǎo)的離體培養(yǎng)的心肌細(xì)胞mirna表達(dá)變化的影響,分別觀察hlxk和mir-199對(duì)心肌細(xì)胞[3h]-亮氨酸摻入量的影響,轉(zhuǎn)染mir-199inhibitor或者mimic,觀察mir-199對(duì)心肌細(xì)胞[3h]-亮氨酸摻入量的影響。結(jié)果:1.造模第21天,模型組lvmi顯著高于對(duì)照組;與模型組相比,90μg/kghlxk可顯著降低模型組lvmi。苦味酸-天狼猩紅染色發(fā)現(xiàn),模型組心肌組織膠原纖維沉積顯著增加(p0.01),hlxk組的膠原纖維沉積較模型組明顯減少(p0.01);模型組小鼠左心室組織羥脯氨酸含量顯著增加了24.66%,90μg/kghlxk可顯著減少羥脯氨酸含量(p0.01)。體外試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),與angⅡ模型組相比,30及90μg/kghlxk均可顯著降低膠原蛋白Ⅰ基因和蛋白表達(dá)量(p0.01),但對(duì)膠原蛋白Ⅲ基因和蛋白表達(dá)無(wú)明顯影響。he染色表明,hlxk組心肌細(xì)胞排列基本整齊,心肌細(xì)胞纖維化明顯減輕,未見(jiàn)明顯的炎細(xì)胞浸潤(rùn)。在該動(dòng)物模型中,模型組左心室中mir-199、mir-499和mirna-1-2-5p的表達(dá)顯著增高,分別升高了731%、148%、242%;在給予hlxk防治心臟肥大的同時(shí),也可明顯抑制mirna表達(dá)增加(p0.01)。2.在培養(yǎng)的離體心臟成纖維細(xì)胞中,給予終濃度1×10-7mol/langⅡ造模可顯著上調(diào)心臟成纖維細(xì)胞mir-199的含量(p0.01);同時(shí)給予hlxk11.3mg/l可顯著抑制mir-199的基因和蛋白表達(dá)(p0.01)。mir-199inhibitor可顯著減少膠原蛋白Ⅰ基因和蛋白表達(dá)(p0.01),僅轉(zhuǎn)染mir-199mimic即可顯著增加114.80%膠原蛋白Ⅰ的表達(dá)(p0.01),而mir-199inhibitor對(duì)膠原蛋白Ⅲ基因和蛋白表達(dá)量影響不明顯。3.在培養(yǎng)的離體乳鼠心肌細(xì)胞中,終濃度1×10-6mol/lne可顯著增加心肌細(xì)胞[3h]-亮氨酸摻入,hlxk可顯著降低ne導(dǎo)致的[3h]-亮氨酸摻入量30.5%,還可顯著抑制ne升高的mir-499、mir-1-2-5p和mir-199的表達(dá)。30nmol/lmir-199inhibitor可顯著減少ne導(dǎo)致的心肌細(xì)胞[3h]-亮氨酸摻入量的增加,而30nmol/lmir-199mimic可明顯增加心肌細(xì)胞[3h]-亮氨酸的摻入量。結(jié)論:1.HLXK可減少模型動(dòng)物心臟中I型膠原蛋白的生成,顯著抑制心肌纖維化的發(fā)生。2.HLXK防治心肌纖維化及心臟重構(gòu)的機(jī)制可能與其降低miR-199的表達(dá)改變有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：心肌纖維化 HLXK miR-199
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R54
【目錄】：

• 英文縮寫(xiě)詞表4-5
• 英文摘要5-8
• 中文摘要8-11
• 前言11-13
• 材料和方法13-27
• 結(jié)果27-38
• 討論38-42
• 全文結(jié)論42-43
• 參考文獻(xiàn)43-47
• 文獻(xiàn)綜述 心肌成纖維細(xì)胞與miRNA47-61
• 參考文獻(xiàn)55-61
• 碩士在讀期間發(fā)表的論文61-62
• 致謝62

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 王妍;盧小嵐;楊華;李曉輝;張海港;;多肽藥物匯利心康對(duì)小鼠心肌肥大與肌球蛋白重鏈表達(dá)的影響[J];中國(guó)藥學(xué)雜志;2011年20期

2 盧小嵐;楊華;徐亞莉;劉雅;王妍;李曉輝;張海港;;G蛋白抑制肽GCIP-27對(duì)大鼠慢性心力衰竭的影響[J];中國(guó)新藥與臨床雜志;2011年02期

3 王秀琴;李曉輝;張海港;程軼群;;GCIP-27對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠左心室結(jié)構(gòu)影響的實(shí)驗(yàn)研究[J];中國(guó)藥理學(xué)通報(bào);2007年08期

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本文編號(hào)：1039641