本文關(guān)鍵詞：促胰液素對腸衰竭相關(guān)性肝損傷的保護作用

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【摘要】：自1968年Dudrick和Wilmore在犬類動物上成功實施腸外營養(yǎng)(Parenteral nutrition,PN)支持之后,在臨床上獲得了廣泛應(yīng)用,大量腸功能障礙、腸衰竭的病人得以長期生存,尤其是在新生兒領(lǐng)域,成為拯救生命的治療措施。然而,僅僅3年之后就出現(xiàn)了腸衰竭相關(guān)性肝損傷(intestinal failure associated liver disease, IFALD)的報道。即使到了21世紀(jì),根據(jù)目前各個腸衰竭中心的報道,在接受長期PN支持的患者中IFALD的發(fā)生率一直維持在70-80%,而出現(xiàn)IFALD之后的3年死亡率為20%左右。所以在長期接受PN支持的患者中,較高的IFALD發(fā)生率和死亡率,一直是營養(yǎng)支持領(lǐng)域的一個難題,也阻礙了營養(yǎng)支持與營養(yǎng)治療的發(fā)展。近些年,一些學(xué)者臨床觀察研究發(fā)現(xiàn),短腸綜合征(Short bowel syndrome, SBS)患者長期生存率顯著低于慢性假性腸梗阻患者(Chronic intestinal pseudo-obstruction,CIPO),而兩者均是長期接受PN支持的人群。結(jié)合本中心的臨床觀察,我們分析腸道來源的激素可能扮演者重要作用,其中腸源性的促胰液素(Secretin)可能是直接產(chǎn)生效應(yīng)的激素。本研究中,我們建立穩(wěn)定的SBS大鼠IFALD模型,觀察SBS大鼠與非SBS大鼠IFALD的差別,對SBS大鼠進行Secretin生理劑量補充,比較Secretin非補充SBS大鼠與Secretin補充SBS大鼠IFALD的差別。對各組PN支持之后的生化指標(biāo)進行比較分析,肝臟凋亡相關(guān)指標(biāo)進行檢測分析,旨在證實Secretin對IFALD的保護作用及其可能的機制。此外,我們還進行相關(guān)臨床試驗研究,用與Secretin具有相似作用的熊去氧膽酸(Ursodeoxycholic Acid, UDCA)對長期TPN患者進行試驗,觀察其臨床療效,為預(yù)防和治療IFALD提供新策略。第一部分 自由活動大鼠長期靜脈置管：一種高效廉價新模型目的建立一種新型簡易的自由活動大鼠長期靜脈置管模型,并與傳統(tǒng)靜脈置管方式比較其有效性及并發(fā)癥發(fā)生率。方法采用2×2析因?qū)嶒炘O(shè)計,雄性SD大鼠40只,體重200—250g,隨機分為4組并且均行頸靜脈置管術(shù)。Ⅰ組采用聚氨酯插管+“8”字線固定,Ⅱ組采用聚氨酯插管+背心固定,Ⅲ組采用硅膠插管+“8”字線固定,Ⅳ組采用硅膠插管+背心固定。每組均給予持續(xù)腸外營養(yǎng)支持,每日檢查有無并發(fā)癥發(fā)生,監(jiān)測大鼠體重及導(dǎo)管尖端細菌定植情況。結(jié)果Ⅰ至Ⅳ組在置管14天時的有效率分別為90%,30%,40%,10%,Ⅰ組顯著高于其他各組。導(dǎo)管尖端培養(yǎng)陽性率Ⅰ組(10%)顯著低于Ⅲ組(60%)。腸外營養(yǎng)支持14天后,Ⅰ組(2.79±0.44 g/d)大鼠體重增加顯著高于Ⅲ(1.89±0.20 g/d)、 Ⅳ(1.89±0.17g/d)兩組。結(jié)論這種新型靜脈置管模型與傳統(tǒng)置管方式相比能顯著增加導(dǎo)管通暢時間,減少導(dǎo)管感染發(fā)生率,更易維持機體生長,是一種高效廉價的新模型。第二部分 促胰液素對腸衰竭相關(guān)性肝損傷的保護作用實驗一SBS大鼠模型血清secretin水平的變化目的觀察短腸綜合征模型靜脈血清Secretin是水平的變化,驗證SBS患者腸道源性Secretin衰竭假設(shè)。方法采用雄性SD大鼠22只,隨機分為4組：SBS+Diet組(6只)、SBS+TPN組(6只)、Sham+Diet組(6只)、Sham+TPN組(4只)。SBS組均行切除80%的小腸切除術(shù),TPN組行頸靜脈插管術(shù)TPN支持。分別于術(shù)前和術(shù)后1天、3天、1周、2周、4周測定Secretin水平,觀察其動態(tài)變化。結(jié)果術(shù)后1天SBS+Diet組(442.21±64.91 pg/ml)和SBS+TPN組(370.54 ±38.79 pg/ml)顯著低于Sham+Diet組(964.23±247.50 pg/ml)和Sham+TPN組(1032.27±177.37 pg/ml)。經(jīng)4周代償后,Sham+TPN組降低至(718.77±89.14 pg/ml)而SBS+Diet組能維持在(779.47±72.83 pg/ml)。結(jié)論短腸模型大鼠術(shù)后血清Secretin水平顯著降低,但能逐步代償,于術(shù)后2周左右達代償平衡；長期腸外營養(yǎng)禁食模型亦能逐漸降低Secretin水平,禁食1周左右降至最低水平。實驗二TPN對SBS大鼠的肝損傷目的SBS大鼠與假手術(shù)大鼠經(jīng)長期TPN支持之后,生化指標(biāo)及肝組織損傷程度的比較。方法采用雄性SD大鼠12只,隨機分為SBS+TPN組與Sham+TPN組各6只,均行頸靜脈插管術(shù)并TPN支持14天,SBS組行切除80%的小腸切除術(shù),Sham組行假手術(shù)。分別于術(shù)前和7天、14天取血,檢測血生化指標(biāo)。最后處死前檢測膽汁流量,取肝臟組織。結(jié)果兩組大鼠的生化指標(biāo)均隨著TPN的支持時間延長而升高。兩組大鼠與正常進食大鼠相比膽汁流量均顯著降低,但SBS+TPN組大鼠的膽汁流量(7.13 ±2.12,μml/min)仍顯著低于Sham+TPN組大鼠(11.80±4.18,±m(xù)l/min)。SBS+TPN組大鼠的病理評分與TUNEL凋亡半定量結(jié)果均顯著高于Sham+TPN組。結(jié)論SBS大鼠IFALD相關(guān)指標(biāo)顯著大于Sham大鼠,SBS大鼠IFALD肝臟凋亡率顯著高于Sham大鼠,具體機制有待于進一步研究。實驗三Secretin補充對IFALD的作用目的通過對SBS大鼠Secretin生理劑量的補充,探索其在IFALD的作用。方法采用雄性SD大鼠24只,隨機分為SBS+secretin組、SBS+placebo組、Sham+secretin組和Sham+ placebo組各6只,均行頸靜脈插管術(shù)并TPN支持14天,SBS組行切除80%的小腸切除術(shù),Sham組行假手術(shù)。分別于術(shù)前和7天、14天取血,檢測血生化指標(biāo)。最后處死前檢測膽汁流量,取肝臟組織。結(jié)果14天后,SBS+placebo組谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT,95.28±18.25 U/L)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST,211.96±19.27 U/L)、總膽紅素(TB,211.96±0.30μmol/L)和總膽汁酸(TBA,23.78±3.59μmol/L)顯著高于SBS+secretin組ALT (76.35± 8.12U/L)、AST(175.35±7.53 U/L)、TB (175.35±7.53μmol/L)和TBA (19.59 ±1.54μmol/L).而SBS+placebo組膽汁流量(6.14±3.04μml/min)顯著低于SBS+secretin組(14.11±4.97μml/min).短腸+secretin組大鼠的肝損傷程度與肝細胞凋亡半定量顯著輕于于短腸+placebo組。結(jié)論短腸模型大鼠給予補充生理水平Secretin之后能顯著降低IFALD損害程度；Secretin在IFALD中的保護作用與抑制肝細胞凋亡相關(guān),具體機制有待于進一步研究。第三部分 熊去氧膽酸對成人SBS患者IFALD的預(yù)與治療作用：一項前瞻性隨機雙盲交叉試驗研究目的通過熊去氧膽酸(Ursodeoxycholic Acid,UDCA)對SBS患者進行前瞻性的隨機對照試驗,探索UDCA在IFALD中的預(yù)防與治療作用。方法自2013年1月至2015年2月,在來本中心的診治的SBS患者中,招募符合入選標(biāo)準(zhǔn)的30位患者,隨機分成UDCA+Placebo(UP)組和Placebo+UDCA(PU)組,為期4個月的交叉試驗后,對患者的生化指標(biāo)變化及不良反應(yīng)等進行統(tǒng)計分析,NCT01974336。結(jié)果兩組患者交叉之前UP組的肝膽功能指標(biāo)與PU組相比獲得顯著改善,交叉后兩組肝功能指標(biāo)仍具有顯著差異,而膽道功能指標(biāo)無顯著差異。最后,UP組IFALD相關(guān)指標(biāo)顯著優(yōu)于PU組。結(jié)論UDCA能有效預(yù)防和治療IFALD,長期PN支持的SBS患者,宜在早期開始應(yīng)用。
【關(guān)鍵詞】：大鼠模型 頸靜脈置管 腸外營養(yǎng) 導(dǎo)管感染 血清Secretin 短腸綜合征 腸外營養(yǎng) 短腸綜合征 腸外營養(yǎng) 肝損傷 促胰液素 短腸綜合征 腸外營養(yǎng) 肝損傷 熊去氧膽酸 短腸綜合征 腸外營養(yǎng) 肝損傷
【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R574;R575
【目錄】：

• 縮略詞表7-9
• 中文摘要9-14
• 英文摘要14-20
• 前言20-28
• 參考文獻25-28
• 第一部分 自由活動大鼠長期靜脈置管：一種高效廉價新模型28-37
• 前言28
• 材料和方法28-31
• 結(jié)果31-33
• 討論33-34
• 結(jié)論34-35
• 參考文獻35-37
• 第二部分 促胰液素對腸衰竭相關(guān)性肝損傷的保護作用37-68
• 實驗一 SBS大鼠模型血清secretin水平的變化37-45
• 前言37
• 材料與方法37-40
• 結(jié)果40-42
• 討論42-43
• 小結(jié)43
• 參考文獻43-45
• 實驗二 TPN對SBS大鼠的肝損傷45-57
• 前言45
• 材料與方法45-48
• 結(jié)果48-53
• 討論53-54
• 小結(jié)54
• 參考文獻54-57
• 實驗三 Secretin補充對IFALD的作用57-68
• 前言57
• 材料與方法57-59
• 結(jié)果59-65
• 討論65-66
• 結(jié)論66
• 參考文獻66-68
• 第三部分 熊去氧膽酸對成人SBS患者IFALD的預(yù)防與治療作用：一項前瞻性隨機雙盲交叉試驗研究68-81
• 前言68
• 病人和方法68-71
• 結(jié)果71-77
• 討論77-78
• 結(jié)論78
• 參考文獻78-81
• 全文總結(jié)81-82
• 文獻綜述82-98
• 參考文獻91-98
• 致謝98-99
• 攻讀博士期間發(fā)表文章99

【參考文獻】

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本文編號：996769