本文關鍵詞：Notch信號通路誘導人胚胎干細胞定向分化為肝膽管細胞的研究

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【摘要】：[目的]Notch信號作為一種在進化中高度保守的反映細胞間傳導機制的通路,它維持著細胞的增殖、分化和凋亡,在胚胎發(fā)育和細胞分化命運的決定中發(fā)揮重要的作用。我們的目的就是探尋Notch信號通路在肝膽管細胞分化中所起的作用。[方法]將hESC株H1‘細胞接種到Matrigel包被的培養(yǎng)板上,加入含有細胞因子活化素A (Activin A)的分化液誘導5d。由activin A處理得到的DE細胞分別在含20ng/mlBMP4,100ng/mlFGF1的培養(yǎng)體系和20ng/mlBMP4, 100ng/mlFGF1, Notch抑制劑NAPT的培養(yǎng)體系中處理5天。采用免疫細胞化學染色、RT-PCR反應鑒定分化細胞的性質(zhì),膽管細胞的分化以及notch信號通路中的相關受體和基因的表達情況。[結果]實驗發(fā)現(xiàn)50-100個細胞左右的hES團塊是理想的分化細胞量,這樣大小的hES團塊同時具有較強的增殖能力和分化能力。noggin能有效的抑制hES細胞分化為DE細胞。hES來源的DE細胞表達notch信號通路中的相關受體notch1, notch2及下游活化基因hesl, hes5。而這些notch信號分子在BMP-4和FGF-1作用3天后表達下降或消失。在向肝膽管細胞的分化體系中加入Notch信號通路的抑制劑后,發(fā)現(xiàn)有部分DE細胞發(fā)生凋亡或死亡,殘存的細胞Notch信號胞內(nèi)下游蛋白(NICD)表達明顯下降,而且大部分蛋白分布在胞漿內(nèi),并未轉(zhuǎn)移至核內(nèi),說明NICD未處于激活狀態(tài)；相反,對照組(FGF-1、BMP-4)NICD熒光強度要明顯高于實驗組,且NICD主要分布在核內(nèi),表明NICD處于激活狀態(tài)；與此同時,notch抑制劑作用5天后,與對照組相比,實驗組肝細胞的生成率明顯降低,甚至檢測不到。[結論]1.hES細胞在高濃度activin A和低濃度血清的誘導下可定向分化得到高比率的DE細胞；而用noggin可抑制hES向DE細胞分化。2.hES細胞的分化密度與DE的形成效率密切相關。3.FGF-1和BMP-4可有效地促使DE細胞向膽管上皮細胞的分化。4.Notch信號通路決定DE細胞的膽管細胞發(fā)生。
【關鍵詞】：Notch信號通路 人胚胎干細胞 分化 肝膽管細胞
【學位授予單位】：昆明醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R575
【目錄】：

• 縮略詞表5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-14
• 材料與方法14-25
• 結果25-34
• 討論34-40
• 結論40-41
• 參考文獻41-46
• 綜述46-54
• 參考文獻51-54
• 攻讀學位期間獲得的學術成果54-55
• 致謝55

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本文編號：996700