本文關(guān)鍵詞：Cajal間質(zhì)細(xì)胞的自噬與慢傳輸型便秘之間的關(guān)系

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【摘要】：目的研究慢傳輸型便秘(STC)發(fā)生與Cajal間質(zhì)細(xì)胞自噬之間的關(guān)系方法清潔級健康雄性SD大鼠60只,體重200~250g之間,隨機(jī)分2組,對照組與實驗組每組各30只大鼠。實驗組大鼠按照50 mg/kg鹽酸小檗堿劑量以10 ml/kg的標(biāo)準(zhǔn)對各組大鼠進(jìn)行連續(xù)灌胃14天,對照組大鼠以同實驗組等量的生理鹽水灌胃14天。14天后各組大鼠禁食16h然后使用墨汁活性炭懸液灌胃處理大鼠,通過檢測墨汁灌胃后6h大鼠排便粒數(shù),首次排黑便時間以及糞便含水量確認(rèn)STC造模是否成功。鑒定造模成功后,分別通過Western Blot和免疫組化法檢測兩組大鼠腸內(nèi)酪氨酸蛋白激酶受體(c-Kit蛋白)的表達(dá)水平以反映結(jié)腸腸道內(nèi)Cajal間質(zhì)細(xì)胞的變化情況。然后使用透射電鏡TEM法檢測實驗組大鼠Cajal間質(zhì)細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞自噬泡的水平并使用Western Blot法檢測結(jié)腸組織自噬相關(guān)標(biāo)志蛋白Beclin-1,LC3的表達(dá)變化。最后使用流式細(xì)胞法和免疫熒光法相結(jié)合來檢測大鼠腸道肌群中ICCs細(xì)胞內(nèi)Ca2+離子的濃度變化。試驗中采用統(tǒng)計軟件SPSS16.0對實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,組間數(shù)據(jù)兩兩比較采用LSD-t檢驗。以P0.05為結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)差異。結(jié)果1灌胃后實驗組大鼠體重與對照組比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義。通過墨汁灌胃后6h大鼠排便粒數(shù),首次排便時間以及糞便含水量的檢測結(jié)果顯示,50 mg/kg鹽酸小檗堿灌胃14天后,實驗組大鼠的糞便粒數(shù)和糞便含水量均降低,兩組數(shù)據(jù)間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),同時,實驗組大鼠的首次排黑便時間延后(P0.05),表明大鼠腸道傳輸功能受阻,體現(xiàn)了慢傳輸型便秘的癥狀。結(jié)果顯示使用鹽酸小檗堿造大鼠慢傳輸型便秘模型成功。2免疫組化法檢測大鼠腸道組織結(jié)果表明,實驗組大鼠腸道內(nèi)Cajal間質(zhì)細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯變化且細(xì)胞數(shù)量有所降低,與對照組相比數(shù)據(jù)間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。Western Blot法檢測大鼠腸道內(nèi)蛋白表達(dá)的結(jié)果表明,實驗組與對照組相比,大鼠腸道內(nèi)c-Kit蛋白表達(dá)明顯減少。結(jié)果表明鹽酸小檗堿引發(fā)Cajal間質(zhì)細(xì)胞的變化可能是導(dǎo)致大鼠慢傳輸型便秘的原因。3透射電鏡TEM檢測大鼠Cajal間質(zhì)細(xì)胞內(nèi)自噬泡水平的結(jié)果表明,實驗組大鼠腸道內(nèi)Cajal間質(zhì)細(xì)胞自噬泡形成,與對照組相比其差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。Western Blot法檢測Cajal間質(zhì)細(xì)胞內(nèi)自噬標(biāo)志蛋白的結(jié)果表明,Cajal間質(zhì)細(xì)胞自噬蛋白Beclin-1,LC3表達(dá)均顯著上調(diào),表明大鼠慢傳輸型便秘的發(fā)生可能與Cajal間質(zhì)細(xì)胞的過度自噬導(dǎo)致的自噬性死亡有關(guān)。4通過流式細(xì)胞法和免疫熒光法,以Ca2+熒光指示劑檢測法檢測ICCs中游離Ca2+離子的濃度變化的結(jié)果顯示,慢傳輸型便秘大鼠模型中Cajal間質(zhì)細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)游離Ca2+離子升高,Ca2+離子升高可能是導(dǎo)致Cajal間質(zhì)細(xì)胞自噬性死亡的原因。結(jié)論1慢傳輸型便秘大鼠模型中大鼠腸道內(nèi)Cajal間質(zhì)細(xì)胞的形態(tài)萎縮并且數(shù)量減少。2慢傳輸型便秘大鼠模型腸道內(nèi)Cajal間質(zhì)細(xì)胞發(fā)生了明顯的細(xì)胞自噬現(xiàn)象,這可能是引發(fā)Cajal間質(zhì)細(xì)胞數(shù)量減少從而導(dǎo)致慢傳輸型便秘的成因之一。3慢傳輸型便秘大鼠模型中Cajal間質(zhì)細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)游離Ca2+離子升高,Ca2+離子升高可能是導(dǎo)致Cajal間質(zhì)細(xì)胞自噬性死亡的原因。
【關(guān)鍵詞】：慢傳輸型便秘 Cajal間質(zhì)細(xì)胞 細(xì)胞自噬
【學(xué)位授予單位】：華北理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R574.62
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 英文縮略表10-11
• 引言11-13
• 第1章 實驗研究13-40
• 1.1 材料與方法13-20
• 1.1.1 實驗動物13
• 1.1.2 主要試劑13-14
• 1.1.3 主要儀器14
• 1.1.4 主要液體配制14-15
• 1.1.5 慢傳輸型大鼠（STC）便秘模型的建立與鑒定15-16
• 1.1.6 免疫熒光檢測大鼠結(jié)腸ICC變化16-17
• 1.1.7 透射電鏡檢測結(jié)腸ICC變化17-18
• 1.1.8 STC大鼠ICCs中的鈣離子濃度檢測18-20
• 1.1.9 統(tǒng)計分析方法20
• 1.2 結(jié)果20-29
• 1.2.1 慢傳輸型便秘大鼠模型的建立和鑒定20-22
• 1.2.2 慢傳輸型便秘大鼠腸道ICCs形態(tài)觀察與c-Kit蛋白的表達(dá)鑒定22-24
• 1.2.3 慢傳輸型便秘大鼠ICC細(xì)胞自噬情況鑒定24-27
• 1.2.4 STC大鼠ICCs中的鈣離子濃度檢測27-29
• 1.3 討論29-36
• 1.3.1 STC與ICCs29-32
• 1.3.2 細(xì)胞自噬調(diào)控32-34
• 1.3.3 STC與ICCs自噬作用間的關(guān)系34-36
• 1.4 結(jié)論36
• 參考文獻(xiàn)36-40
• 第2章 綜述40-48
• 2.1 ICCss概述40-43
• 2.1.1 ICCs40
• 2.1.2 ICCs的形態(tài)學(xué)及組織學(xué)特征40-41
• 2.1.3 ICCs的分布41
• 2.1.4 ICCs控制胃腸道動力的機(jī)制41-43
• 2.3 ICCs與自噬43-44
• 2.4 結(jié)語與展望44
• 參考文獻(xiàn)44-48
• 結(jié)論48-49
• 致謝49-50
• 導(dǎo)師簡介50-51
• 作者簡介51-52
• 學(xué)位論文數(shù)據(jù)集52

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本文編號：990391