本文關(guān)鍵詞：乙肝耐藥患者血清microRNA差異表達的研究

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【摘要】：目的:探討micro RNA(mi RNA)在HBV感染者與健康者,耐藥突變者與無突變敏感者血清中的差異表達,判斷mi RNA用于乙肝耐藥突變的診斷價值。方法:首先,我們根據(jù)權(quán)威文獻報道篩選出與乙肝感染相關(guān)性最高的兩種mi RNA——mi R-122-5p和mi R-125b-5p,收集乙肝感染且HBV-DNA定量5.00×102IU/ml(本研究所采用的試劑盒HBV-DNA最低檢出限為5.00×102IU/ml)的入院患者49名的血清樣本作為實驗組,實驗組樣本均來自于四川省瀘州醫(yī)學院附屬醫(yī)院。于四川省瀘州醫(yī)學院附屬醫(yī)院體檢中心篩選健康體檢者21名的血清樣本作為對照組,對照組納入標準為HBV-DNA定量5.00×102IU/ml且乙肝兩對半定量檢測全在正常參考范圍內(nèi)。所有實驗對象無其它類型肝炎病毒的感染,排除酒精性肝病、自身免疫性肝病、代謝性肝病、藥物性肝病、隱源性肝病、血吸蟲性肝病、遺傳性肝病等;無腎臟、血液腫瘤等可能會影響血清水平的疾病,并且無血液制品輸注史;入院后經(jīng)CT或B超檢查排除肝癌的可能;然后,我們提取實驗組血清HBV-DNA和所有樣本血清總RNA,利用瓊脂糖凝膠電泳檢測RNA的完整性,檢測RNA的OD值以判斷其純度,檢測結(jié)果表明所提取的RNA質(zhì)量良好,無污染,無降解,符合后續(xù)實驗要求。接著我們利用反向點雜交法檢測實驗組的乙肝耐藥突變,檢測得到實驗組耐藥突變結(jié)果分為rt204I、rt204V、rt L180M、rt204V+rt L180M以及未突變的“野生型”五類。最后,我們以cel-mi R-39-3p為外參,檢測宿主mi R-122-5p和mi R-125b-5p的相對表達水平(我們委托廣州銳博生物技術(shù)有限公司對所有引物進行合成、純化和鑒定),檢測結(jié)果通過SPSS17.0軟件進行統(tǒng)計分析,探討:1.患者感染HBV是否影響mi R-122-5p和mi R-125b-5p的表達水平;2.耐藥突變的出現(xiàn)是否影響mi R-122-5p和mi R-125b-5p的表達水平3.年齡是否影響mi R-122-5p和mi R-125b-5p的表達水平。結(jié)果:1.表3中耐藥突變組和無突變野生組mi R-122-5p和mi R-125b-5p的均數(shù)M均大于健康對照組的M值,表4中,HBV感染組VS健康對照組,mi R-122-5p和mi R-125b-5p的P值均0.01,差異具有統(tǒng)計學意義,由此說明患者感染HBV后mi R-122-5p和mi R-125b-5p的值將顯著升高;2.表3中,耐藥突變組mi R-122-5p和mi R-125b-5p的均數(shù)M均大于無突變野生組的M值,表4中,耐藥突變組VS無突變野生組,mi R-122-5p和mi R-125b-5p的P值均0.01,差異具有統(tǒng)計學意義,由此說明,耐藥突變的出現(xiàn)將導致mi R-122-5p和mi R-125b-5p的值顯著升高;3.從散點圖圖6~圖11中可以看出,無論是HBV耐藥突變組還是無突變野生組,亦或是健康對照組,年齡的變化與mi R-122-5p和mi R-125b-5p的相對定量值成正相關(guān),0γ1,由此說明,隨著年齡的增長,mi R-122-5p和mi R-125b-5p的值有升高的趨勢。結(jié)論:綜上所述,mi RNA不僅可用于診斷HBV感染,還可用于診斷乙肝耐藥突變,此外,我們還發(fā)現(xiàn)隨著年齡的增長,mi R-122-5p和mi R-125b-5p的值有升高的趨勢。這為臨床診斷HBV感染提供了又一新的依據(jù),將有助于臨床診斷乙肝耐藥,協(xié)助改善臨床的治療策略。
【關(guān)鍵詞】：microRNA 乙型肝炎 耐藥 血清
【學位授予單位】：四川醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R512.62;R446.6
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 前言9-15
• 材料與方法15-24
• 實驗結(jié)果24-35
• 討論35-43
• 結(jié)論43-44
• 參考文獻44-48
• 英漢縮略詞對照表48-49
• 致謝49-51
• 丙型肝炎相關(guān)微小RNA的研究進展（綜述）51-64
• 參考文獻58-64

【共引文獻】

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 王星果;雞肝臟和骨骼肌miRNA表達和功能研究[D];揚州大學;2013年

2 彭米林;HIV Vpr通過上調(diào)miR-122表達促進丙型肝炎病毒RNA復(fù)制及其蛋白合成[D];中南大學;2014年

3 楊宗興;HIV感染者/艾滋病患者microRNAs表達譜分析及其影響HIV感染的機制研究[D];浙江大學;2015年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 屠蘊秋;基于納米材料熒光淬滅作用的microRNA檢測新方法研究[D];南京師范大學;2013年

2 李倩倩;miR-370對肝細胞癌的作用及其臨床意義[D];第二軍醫(yī)大學;2013年

3 馬力;MiR-1236抑制VprBP翻譯調(diào)節(jié)HIV-1復(fù)制研究及HIV-1感染后長期不發(fā)病中國人群基因多態(tài)性分析[D];蘇州大學;2014年

4 施文彩;肝細胞核因子4α調(diào)控hepcidin的細胞實驗研究[D];第二軍醫(yī)大學;2014年

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本文編號：983320