本文關(guān)鍵詞：NADPH氧化酶抑制劑apocynin對(duì)重癥急性胰腺炎大鼠腸粘膜屏障損傷的作用及其機(jī)制探討

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【摘要】：第一部分：NADPH氧化酶抑制劑apocynin對(duì)重癥急性胰腺炎大鼠保護(hù)作用的劑量探討目的：探討NADPH氧化酶抑制劑apocynin治療重癥急性胰腺炎(SAP)大鼠最佳的用藥劑量并為SAP合并腸道損傷提供安全有效的藥物劑量。方法：50只雄性wista大鼠,隨機(jī)分為5組(N=10)：假手術(shù)(SO)組,重癥急性胰腺炎(SAP)組,apocynin低劑量預(yù)處理組(APO 25mg/kg), apocynin中劑量預(yù)處理組(APO 50mg/kg),apocynin高劑量預(yù)處理組(APO 100mg/kg)。將5%�；悄懰徕c溶液(0.1ml/100g)逆行注射于膽胰管,制備重癥急性胰腺炎大鼠模型。預(yù)處理組大鼠造模前30min通過股靜脈穿刺方式,給予不同濃度(25、50、100mg/kg)的apocynin溶液。模型制備后12h剖殺大鼠,分別取腹水、血液及胰頭組織,檢測(cè)各組大鼠血清淀粉酶(AMY)、脂肪酶(LIP)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、肌酐(Cr)和腹水量,同時(shí)觀察胰腺組織病理學(xué)改變。結(jié)果：SAP組血清AMY、LIP、ALT、Cr以及腹水量和胰腺組織病理評(píng)分均較假手術(shù)(SO)組明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。APO 25mg/kg組上述指標(biāo)與SAP組無顯著差別(P0.05)。APO 50mg/kg、APO 100mg/kg兩組血清AMY、LIP、腹水量、胰腺病理評(píng)分均較SAP組顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)、APO 100mg/kg組與APO 50mg/kg組比較上述指標(biāo)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。另外,APO 50mg/kg組血清ALT、Cr值較APO 100mg/kg組明顯降低且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論：低劑量(25mg/kg) apocynin對(duì)重癥急性胰腺炎的作用不明顯,改善病情效果有限。中、高劑量(50、100mg/kg) apocynin均能降低血清AMY、LIP、腹水量、胰腺病理損傷及病理評(píng)分并能有效地減輕胰腺炎嚴(yán)重程度。然而高劑量(100mg/kg) apocynin雖能緩解急性胰腺炎嚴(yán)重程度,降低胰腺病理損傷,但肝腎毒性較大。由此可見,50mg/kg劑量是apocynin對(duì)大鼠重癥急性胰腺炎作用的有效安全劑量。第二部分：NADPH氧化酶抑制劑apocynin對(duì)重癥急性胰腺炎大鼠腸粘膜損傷的保護(hù)作用目的：探討NADPH氧化酶抑制劑apocynin對(duì)重癥急性胰腺炎大鼠腸粘膜損傷的保護(hù)作用。方法：雄性wistar大鼠60只,隨機(jī)分為4組：假手術(shù)(SO)組(N=10),重癥急性胰腺炎(SAP)組(N=30),apocynin預(yù)處理(APO)組(N=10)及apocynin藥物對(duì)照(APO-CON)組(N=10)。其中SAP組又分為3h、6h、12h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)(N=10)。將5%牛磺膽酸鈉溶液(0.1ml/100g)逆行注射于膽胰管,制備重癥急性胰腺炎大鼠模型。APO組造模前30分鐘通過股靜脈給予50mg/kg劑量的apocynin溶液。各組大鼠造模后相應(yīng)的時(shí)間點(diǎn)處死后取材,分別檢測(cè)各組大鼠死亡率、血清淀粉酶(AMY)、脂肪酶(LIP)、二胺氧化酶(DAO)、D-乳酸以及血清促炎細(xì)胞因子和水平,測(cè)定大鼠回腸組織丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平,光鏡和透射電鏡下觀察胰腺和回腸組織病理學(xué)改變及回腸黏膜上皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)。結(jié)果：SAP組大鼠血清AMY、LIP、DAO、D-乳酸、促炎細(xì)胞因子(TNF-α、 IL-1β、IL-6)、回腸組織MDA、胰腺及回腸組織病理學(xué)評(píng)分隨著時(shí)間的推移逐漸升高,12小時(shí)達(dá)到高峰并均高于SO組和APO-CON組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。APO組大鼠上述指標(biāo)與SAP12h組相比明顯降低,但仍然高于SO組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。SAP組大鼠回腸黏膜上皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)破壞明顯,apocynin干預(yù)后明顯得到改善。APO-CON組大上述指標(biāo)同SO組,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。。結(jié)論：Apocynin通過降低胰腺及腸道功能學(xué)指標(biāo),減輕胰腺和腸粘膜的病理學(xué)損傷及超微結(jié)構(gòu)改變程度,改善病情及降低大鼠死亡率,對(duì)SAP大鼠腸道損傷有明顯地保護(hù)作用。第三部分：NADPH氧化酶抑制劑apocynin對(duì)重癥急性胰腺炎大鼠腸粘膜損傷保護(hù)作用的機(jī)制探討目的：探討apocynin對(duì)重癥急性胰腺炎大鼠腸粘膜損傷保護(hù)作用的潛在機(jī)制,為重癥急性胰腺炎胰外臟器損傷研究提供新的理論依據(jù)。方法：雄性wistar大鼠60只,隨機(jī)分為4組：假手術(shù)(SO)組(N=10),重癥急性胰腺炎(SAP)組(N=30), apocynin預(yù)處理(APO)組(N=10)及apocynin藥物對(duì)照(APO-CON)組(N=10)。其中SAP組又分為3h、6h、12h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)(N=10)。將5%牛磺膽酸鈉溶液(0.1ml/100g)逆行注射于膽胰管,制備重癥急性胰腺炎大鼠模型。APO組造模前30分鐘通過股靜脈給予50mg/kg劑量的apocynin溶液。各組大鼠造模后相應(yīng)的時(shí)間點(diǎn)處死和取材,通過免疫組化法和Westen Blot法檢測(cè)腸組織NADPH氧化酶2(NOX2)、核因子-κB(nuclear factor-kappa B, NF-κB) p65、p38絲裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、caspase3及caspase9的表達(dá)水平,通過TUNEL法檢測(cè)小腸粘膜上皮細(xì)胞凋亡程度。結(jié)果：SAP組大鼠腸粘膜組織NOX2、NF-κB、p38MAPK、caspase3和caspase9蛋白的表達(dá)以及腸粘膜上皮細(xì)胞凋亡率隨著時(shí)間逐漸增高且均高于SO組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。APO組上述指標(biāo)明顯降低,與SAP12h組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。APO-CON組大上述指標(biāo)同SO組,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論：apocynin可以通過抑制重癥急性胰腺炎大鼠腸組織NADPH氧化酶,減少NF-κB、p38MAPK蛋白表達(dá),抑制腸粘膜氧化應(yīng)激反應(yīng),下調(diào)caspase3及caspase9等凋亡信號(hào)通路,阻止NF-κB介導(dǎo)的炎癥瀑布效應(yīng)分子TNF-α、IL-6和IL-1p的釋放,從而對(duì)胰腺炎腸道損傷發(fā)揮保護(hù)作用。
【關(guān)鍵詞】：重癥急性胰腺炎 NADPH氧化酶 Apocynin 量效關(guān)系 NADPH氧化酶 apocynin 腸道損傷 保護(hù)作用 NOX2 重癥急性胰腺炎腸道損傷 NF-κB P38MAPK 凋亡
【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R576;R574
【目錄】：

• 中文摘要7-10
• Abstract10-13
• 引言13-20
• 參考文獻(xiàn)17-20
• 第一部分 NADPH氧化酶抑制劑apocynin對(duì)大鼠重癥急性胰腺炎保護(hù)作用的劑量探討20-38
• 材料20-21
• 方法21-25
• 結(jié)果25-27
• 討論27-30
• 附圖一30-35
• 參考文獻(xiàn)35-38
• 第二部分 NADPH氧化酶抑制劑apocynin對(duì)重癥急性胰腺炎大鼠腸粘膜損傷的保護(hù)作用38-60
• 材料38-40
• 方法40-44
• 結(jié)果44-48
• 討論48-51
• 附圖二51-57
• 參考文獻(xiàn)57-60
• 第三部分 NADPH氧化酶抑制劑apocynin對(duì)重癥急性胰腺炎大鼠腸粘膜損傷保護(hù)作用的機(jī)制探討60-85
• 材料60-63
• 方法63-68
• 結(jié)果68-71
• 討論71-75
• 附圖三75-83
• 參考文獻(xiàn)83-85
• 全文總結(jié)85-86
• 綜述86-115
• 參考文獻(xiàn)101-115
• 攻博期間發(fā)表的論文115-116
• 致謝116

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2 祝~=驤;iJ梊霞;洃克琴;崔素英;文允摪;，

本文編號(hào)：977372