本文關鍵詞：NADPH氧化酶抑制劑apocynin對重癥急性胰腺炎大鼠腸粘膜屏障損傷的作用及其機制探討

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【摘要】：第一部分：NADPH氧化酶抑制劑apocynin對重癥急性胰腺炎大鼠保護作用的劑量探討目的：探討NADPH氧化酶抑制劑apocynin治療重癥急性胰腺炎(SAP)大鼠最佳的用藥劑量并為SAP合并腸道損傷提供安全有效的藥物劑量。方法：50只雄性wista大鼠,隨機分為5組(N=10)：假手術(SO)組,重癥急性胰腺炎(SAP)組,apocynin低劑量預處理組(APO 25mg/kg), apocynin中劑量預處理組(APO 50mg/kg),apocynin高劑量預處理組(APO 100mg/kg)。將5%牛磺膽酸鈉溶液(0.1ml/100g)逆行注射于膽胰管,制備重癥急性胰腺炎大鼠模型。預處理組大鼠造模前30min通過股靜脈穿刺方式,給予不同濃度(25、50、100mg/kg)的apocynin溶液。模型制備后12h剖殺大鼠,分別取腹水、血液及胰頭組織,檢測各組大鼠血清淀粉酶(AMY)、脂肪酶(LIP)、丙氨酸轉氨酶(ALT)、肌酐(Cr)和腹水量,同時觀察胰腺組織病理學改變。結果：SAP組血清AMY、LIP、ALT、Cr以及腹水量和胰腺組織病理評分均較假手術(SO)組明顯升高,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。APO 25mg/kg組上述指標與SAP組無顯著差別(P0.05)。APO 50mg/kg、APO 100mg/kg兩組血清AMY、LIP、腹水量、胰腺病理評分均較SAP組顯著降低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)、APO 100mg/kg組與APO 50mg/kg組比較上述指標無統(tǒng)計學差異(P0.05)。另外,APO 50mg/kg組血清ALT、Cr值較APO 100mg/kg組明顯降低且差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論：低劑量(25mg/kg) apocynin對重癥急性胰腺炎的作用不明顯,改善病情效果有限。中、高劑量(50、100mg/kg) apocynin均能降低血清AMY、LIP、腹水量、胰腺病理損傷及病理評分并能有效地減輕胰腺炎嚴重程度。然而高劑量(100mg/kg) apocynin雖能緩解急性胰腺炎嚴重程度,降低胰腺病理損傷,但肝腎毒性較大。由此可見,50mg/kg劑量是apocynin對大鼠重癥急性胰腺炎作用的有效安全劑量。第二部分：NADPH氧化酶抑制劑apocynin對重癥急性胰腺炎大鼠腸粘膜損傷的保護作用目的：探討NADPH氧化酶抑制劑apocynin對重癥急性胰腺炎大鼠腸粘膜損傷的保護作用。方法：雄性wistar大鼠60只,隨機分為4組：假手術(SO)組(N=10),重癥急性胰腺炎(SAP)組(N=30),apocynin預處理(APO)組(N=10)及apocynin藥物對照(APO-CON)組(N=10)。其中SAP組又分為3h、6h、12h三個時間點(N=10)。將5%牛磺膽酸鈉溶液(0.1ml/100g)逆行注射于膽胰管,制備重癥急性胰腺炎大鼠模型。APO組造模前30分鐘通過股靜脈給予50mg/kg劑量的apocynin溶液。各組大鼠造模后相應的時間點處死后取材,分別檢測各組大鼠死亡率、血清淀粉酶(AMY)、脂肪酶(LIP)、二胺氧化酶(DAO)、D-乳酸以及血清促炎細胞因子和水平,測定大鼠回腸組織丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平,光鏡和透射電鏡下觀察胰腺和回腸組織病理學改變及回腸黏膜上皮細胞超微結構。結果：SAP組大鼠血清AMY、LIP、DAO、D-乳酸、促炎細胞因子(TNF-α、 IL-1β、IL-6)、回腸組織MDA、胰腺及回腸組織病理學評分隨著時間的推移逐漸升高,12小時達到高峰并均高于SO組和APO-CON組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。APO組大鼠上述指標與SAP12h組相比明顯降低,但仍然高于SO組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。SAP組大鼠回腸黏膜上皮細胞超微結構破壞明顯,apocynin干預后明顯得到改善。APO-CON組大上述指標同SO組,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。。結論：Apocynin通過降低胰腺及腸道功能學指標,減輕胰腺和腸粘膜的病理學損傷及超微結構改變程度,改善病情及降低大鼠死亡率,對SAP大鼠腸道損傷有明顯地保護作用。第三部分：NADPH氧化酶抑制劑apocynin對重癥急性胰腺炎大鼠腸粘膜損傷保護作用的機制探討目的：探討apocynin對重癥急性胰腺炎大鼠腸粘膜損傷保護作用的潛在機制,為重癥急性胰腺炎胰外臟器損傷研究提供新的理論依據(jù)。方法：雄性wistar大鼠60只,隨機分為4組：假手術(SO)組(N=10),重癥急性胰腺炎(SAP)組(N=30), apocynin預處理(APO)組(N=10)及apocynin藥物對照(APO-CON)組(N=10)。其中SAP組又分為3h、6h、12h三個時間點(N=10)。將5%�；悄懰徕c溶液(0.1ml/100g)逆行注射于膽胰管,制備重癥急性胰腺炎大鼠模型。APO組造模前30分鐘通過股靜脈給予50mg/kg劑量的apocynin溶液。各組大鼠造模后相應的時間點處死和取材,通過免疫組化法和Westen Blot法檢測腸組織NADPH氧化酶2(NOX2)、核因子-κB(nuclear factor-kappa B, NF-κB) p65、p38絲裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、caspase3及caspase9的表達水平,通過TUNEL法檢測小腸粘膜上皮細胞凋亡程度。結果：SAP組大鼠腸粘膜組織NOX2、NF-κB、p38MAPK、caspase3和caspase9蛋白的表達以及腸粘膜上皮細胞凋亡率隨著時間逐漸增高且均高于SO組,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。APO組上述指標明顯降低,與SAP12h組比較,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。APO-CON組大上述指標同SO組,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論：apocynin可以通過抑制重癥急性胰腺炎大鼠腸組織NADPH氧化酶,減少NF-κB、p38MAPK蛋白表達,抑制腸粘膜氧化應激反應,下調caspase3及caspase9等凋亡信號通路,阻止NF-κB介導的炎癥瀑布效應分子TNF-α、IL-6和IL-1p的釋放,從而對胰腺炎腸道損傷發(fā)揮保護作用。
【關鍵詞】：重癥急性胰腺炎 NADPH氧化酶 Apocynin 量效關系 NADPH氧化酶 apocynin 腸道損傷 保護作用 NOX2 重癥急性胰腺炎腸道損傷 NF-κB P38MAPK 凋亡
【學位授予單位】：武漢大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R576;R574
【目錄】：

• 中文摘要7-10
• Abstract10-13
• 引言13-20
• 參考文獻17-20
• 第一部分 NADPH氧化酶抑制劑apocynin對大鼠重癥急性胰腺炎保護作用的劑量探討20-38
• 材料20-21
• 方法21-25
• 結果25-27
• 討論27-30
• 附圖一30-35
• 參考文獻35-38
• 第二部分 NADPH氧化酶抑制劑apocynin對重癥急性胰腺炎大鼠腸粘膜損傷的保護作用38-60
• 材料38-40
• 方法40-44
• 結果44-48
• 討論48-51
• 附圖二51-57
• 參考文獻57-60
• 第三部分 NADPH氧化酶抑制劑apocynin對重癥急性胰腺炎大鼠腸粘膜損傷保護作用的機制探討60-85
• 材料60-63
• 方法63-68
• 結果68-71
• 討論71-75
• 附圖三75-83
• 參考文獻83-85
• 全文總結85-86
• 綜述86-115
• 參考文獻101-115
• 攻博期間發(fā)表的論文115-116
• 致謝116

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本文編號：977372