發(fā)布時(shí)間：2017-10-03 10:23

  本文關(guān)鍵詞：miRNA對非酒精性脂肪肝病變的分子調(diào)控作用

  更多相關(guān)文章： 脂肪肝 肝纖維化 miRNA 脂質(zhì)體載體 轉(zhuǎn)染

【摘要】：miRNA是體內(nèi)的一類非編碼小分子RNA,通常含有19-25個(gè)堿基。研究表明,miRNA高度保守,在多種疾病中均出現(xiàn)特異性的升高或降低。目前已有多種miRNA用于臨床檢驗(yàn)的疾病標(biāo)志物。脂肪肝和肝纖維化的發(fā)展過程中有多種miRNA參與調(diào)控,對于miRNA的深入研究有助于各種肝臟疾病的臨床診斷和治療水平的提高。本研究通過miRNA的體外細(xì)胞模型轉(zhuǎn)染和小鼠動(dòng)物模型的體內(nèi)轉(zhuǎn)染,分析與脂肪肝和肝纖維化有關(guān)的miRNA含量及其所調(diào)控的相關(guān)蛋白的變化,確定miRNA在肝纖維化和脂肪肝中的分子調(diào)控機(jī)制。小鼠的脂肪肝模型驗(yàn)證了脂質(zhì)體作為載體在動(dòng)物體內(nèi)肝臟靶向運(yùn)輸miRNA的可行性。肝纖維化發(fā)生的主要原因是肝星形細(xì)胞(HSC s)的活化。通過檢測體外培養(yǎng)的活化HSCs及miR-15b轉(zhuǎn)染的HSCs中miR-15b和抗凋亡因子(Bcl-2)含量的變化發(fā)現(xiàn),經(jīng)轉(zhuǎn)染的HSCs中miR-15b含量較活化HSCs有大幅度提高,其P0.05具有顯著性差異。Bcl-2的mRNA在兩組細(xì)胞中含量幾乎不變,但其蛋白有明顯減少。證明miR-15b抑制Bcl-2的nRNA的翻譯表達(dá),從而減少Bcl-2,促使HSCs凋亡,對肝纖維化起到控制作用。體外脂肪肝細(xì)胞模型和小鼠脂肪肝動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)表明,與正常組比較脂肪肝中miR-130a會(huì)出現(xiàn)明顯下調(diào)(P0.05),脂肪酸合成酶(FAS)及其激活因子PPAR-γ含量增多。當(dāng)轉(zhuǎn)入miR-130a后,FAS的mRNA水平顯著下降(P0.05),而PPAR-γ的mRNA含量基本不變,但其蛋白有所減少。推測miR-130a通過抑制PPAR-γ的mRNA的翻譯,減少其蛋白質(zhì)含量,進(jìn)而使FAS的mRNA和蛋白含量下調(diào),對脂肪肝過程進(jìn)行調(diào)控。并且動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,miR-130a對于小鼠的脂肪肝具有緩解治療作用,為miRNA作為小分子核酸藥物的可行性提供支持。開創(chuàng)了脂質(zhì)體載體肝靶向運(yùn)輸miRNA的新方法。同時(shí),脂質(zhì)體載體肝臟靶向運(yùn)輸miRNA的成功也為進(jìn)一步優(yōu)化肝靶向脂質(zhì)體,使其可以用于更多肝臟疾病的治療和藥物開發(fā)提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：脂肪肝 肝纖維化 miRNA 脂質(zhì)體載體 轉(zhuǎn)染
【學(xué)位授予單位】：北京化工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R575.5
【目錄】：

• 學(xué)位論文數(shù)據(jù)集3-4
• 摘要4-6
• ABSTRACT6-16
• 符號說明16-17
• 第一章 緒論17-29
• 1.1 肝纖維化的研究概況17-19
• 1.1.1 肝纖維化的簡介17-18
• 1.1.2 肝纖維化的研究機(jī)制的進(jìn)展18-19
• 1.2 脂肪肝的研究概況19-21
• 1.2.1 脂肪肝的簡介19-20
• 1.2.2 脂肪肝的最新研究進(jìn)展20-21
• 1.3 miRNA的研究概況21-24
• 1.3.1 miRNA調(diào)控機(jī)理21-23
• 1.3.2 miRNA與癌癥及其他疾病的研究23-24
• 1.3.3 miRNA的靶向運(yùn)輸載體24
• 1.4 miRNA在脂肪肝和肝纖維化中的應(yīng)用24-28
• 1.4.1 miRNA在脂肪肝中的應(yīng)用24-25
• 1.4.2 miRNA在肝纖維化中的應(yīng)用25-28
• 1.5 論文主要研究內(nèi)容28-29
• 第二章 miRNA調(diào)控HSC細(xì)胞凋亡對肝纖維化的作用研究29-49
• 2.1 實(shí)驗(yàn)研究目的及意義29
• 2.2 實(shí)驗(yàn)材料及儀器29-30
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)主要儀器29-30
• 2.2.2 實(shí)驗(yàn)主要試劑30
• 2.3 細(xì)胞的準(zhǔn)備與培養(yǎng)30-31
• 2.3.1 細(xì)胞復(fù)蘇30-31
• 2.3.2 細(xì)胞傳代31
• 2.3.3 細(xì)胞凍存31
• 2.4 細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)31-34
• 2.4.1 miRNA及其同序列熒光標(biāo)記DNA合成31
• 2.4.2 細(xì)胞計(jì)數(shù)31-32
• 2.4.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染32-34
• 2.5 qRT-PCR實(shí)驗(yàn)34-37
• 2.5.1 引物設(shè)計(jì)34-35
• 2.5.2 細(xì)胞中RNA提取35-36
• 2.5.3 反轉(zhuǎn)錄PCR實(shí)驗(yàn)36
• 2.5.4 qPCR實(shí)驗(yàn)36-37
• 2.6 Western blot實(shí)驗(yàn)37-40
• 2.6.1 細(xì)胞總蛋白質(zhì)提取37
• 2.6.2 Western blot37-40
• 2.7 TUNEL染色實(shí)驗(yàn)40
• 2.8 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論40-47
• 2.8.1 細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)結(jié)論40-41
• 2.8.2 qRT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)論41-44
• 2.8.2.1 miR-15b的qRT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)論41-44
• 2.8.2.2 Bcl-2的mRNA的qRT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)論44
• 2.8.3 Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)論44-45
• 2.8.4 TUNEL染色實(shí)驗(yàn)結(jié)論45-47
• 2.9 本章小結(jié)47-49
• 第三章 miRNA對體外非酒精性脂肪肝細(xì)胞的作用研究49-63
• 3.1 研究目的及意義49
• 3.2 實(shí)驗(yàn)材料及方法49-51
• 3.2.1 實(shí)驗(yàn)主要儀器49-50
• 3.2.2 實(shí)驗(yàn)主要試劑50
• 3.2.3 脂肪肝細(xì)胞模型的建立與培養(yǎng)50-51
• 3.2.3.1 HepG_2細(xì)胞培養(yǎng)51
• 3.2.3.2 建立脂肪肝細(xì)胞模型51
• 3.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)51-52
• 3.3.1 檢驗(yàn)脂肪肝細(xì)胞模型建立是否成功51-52
• 3.3.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染52
• 3.4 qRT-PCR實(shí)驗(yàn)52-55
• 3.4.1 引物設(shè)計(jì)52-54
• 3.4.2 細(xì)胞中總RNA提取54
• 3.4.3 qRT-PCR實(shí)驗(yàn)程序54-55
• 3.5 Western blot實(shí)驗(yàn)55-58
• 3.5.1 提取細(xì)胞中總蛋白55-56
• 3.5.2 Western blot56-58
• 3.6 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論58-61
• 3.6.1 脂肪肝細(xì)胞模型檢測結(jié)論58-59
• 3.6.2 qRT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)論59-60
• 3.6.2.1 miR-130a的qRT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)論59
• 3.6.2.2 FAS和PPAR-γ的mRNA的qRT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)論59-60
• 3.6.3 Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)論60-61
• 3.7 本章小結(jié)61-63
• 第四章 miR-130a對非酒精性脂肪肝模型小鼠的作用研究63-75
• 4.1 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器63-64
• 4.2 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)64-65
• 4.2.1 脂肪肝小鼠模型建立64
• 4.2.2 脂質(zhì)體包裹miR-130a64-65
• 4.2.3 尾靜脈注射65
• 4.2.4 動(dòng)物取材65
• 4.3 qRT-PCR實(shí)驗(yàn)65-67
• 4.3.1 RNA引物設(shè)計(jì)合成65
• 4.3.2 小鼠肝臟組織總RNA提取65-66
• 4.3.3 qRT-PCR實(shí)驗(yàn)程序66-67
• 4.4 Western blot實(shí)驗(yàn)67-68
• 4.5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論68-74
• 4.5.1 小鼠體重稱量結(jié)論68
• 4.5.2 肝臟病理學(xué)切片檢測結(jié)論68-71
• 4.5.3 qRT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)論71-72
• 4.5.3.1 miR-130a的qRT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)論71
• 4.5.3.2 FAS和PPAR-γ的mRNA的qRT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)論71-72
• 4.5.4 Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)論72-73
• 4.5.5 血清生化檢測結(jié)論73-74
• 4.6 本章小結(jié)74-75
• 第五章 結(jié)論與展望75-77
• 5.1 結(jié)論75
• 5.2 展望75-77
• 參考文獻(xiàn)77-81
• 附錄81-83
• 致謝83-85
• 研究成果及發(fā)表的學(xué)術(shù)論文85-87
• 作者和導(dǎo)師簡介87-88
• 附件88-89

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 Nadia Panera;Daniela Gnani;Annalisa Crudele;Sara Ceccarelli;Valerio Nobili;Anna Alisi;;MicroRNAs as controlled systems and controllers in non-alcoholic fatty liver disease[J];World Journal of Gastroenterology;2014年41期

2 魏梅娟;魏開鵬;張小曼;張純瑜;肖子鴻;潘興南;;血清肝纖維化指標(biāo)與肝纖維化病理改變的相關(guān)性研究[J];中華實(shí)驗(yàn)和臨床感染病雜志(電子版);2013年06期

3 葉放,趙文霞;中醫(yī)對非酒精性脂肪肝的研究現(xiàn)狀[J];中國中西醫(yī)結(jié)合消化雜志;2003年01期

，

本文編號：964656