本文關(guān)鍵詞：DHA調(diào)控Kupffer細(xì)胞極化途徑緩解NAFLD炎性損傷

  更多相關(guān)文章： 非酒精性脂肪性肝 DHA PA 巨噬細(xì)胞極化 M1 M2細(xì)胞表型 核轉(zhuǎn)錄因子kappa B

【摘要】：目的:探討DHA緩解NAFLD肝細(xì)胞炎性損傷的可能機(jī)制。方法:SD雄性大鼠144只,隨機(jī)均分為3組:正常對(duì)照組(常規(guī)飼料,CON組)、NASH模型組(高脂飼料,HF D組)、魚油干預(yù)組(高脂+魚油飼料,FOH組)。分別在第4周、8周、12周、16周處死大鼠,肉眼觀察肝臟形態(tài)變化,試劑盒檢測(cè)血脂指標(biāo)(TC、TG、HDL、LDL)和肝功能指標(biāo)(ALT、AST),石蠟切片做HE染色、Masson染色觀察肝細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)聚集及炎性浸潤情況。Real Time-PCR檢測(cè)肝組織炎性細(xì)胞因子IL-1β、IL-6、TNF-a以及KCs M1型標(biāo)志分子CD197、CD11c和M 2型標(biāo)志分子CD163、CD206的m R NA表達(dá)水平;免疫組化檢測(cè)巨噬細(xì)胞KCs表型分子F4/80、CD11b、CD206表面蛋白的表達(dá)。以小鼠單核/巨噬細(xì)胞R AW 264.7作為研究對(duì)象,MTT實(shí)驗(yàn)確定軟脂酸鈉(PA)誘導(dǎo)細(xì)胞極化的最適濃度和時(shí)間;細(xì)胞處理分5組:正常對(duì)照組(C ON)、PA組、DHA干預(yù)組(DHA+PA)、IFN-γ+LP S組(M1組),以及IL-4組(M2組),每組六個(gè)平行;顯微鏡觀察各組細(xì)胞形態(tài)變化;Realtim e P CR檢測(cè)PPARγ、NF-κB,炎性細(xì)胞因子IL-1β、TNF-α,M 1型標(biāo)志細(xì)胞因子:IL-6、CD11c、i NOs以及M2標(biāo)志細(xì)胞因子:IL-10、CD206、Arg1等基因表達(dá);ELISA法檢測(cè)細(xì)胞上清中TNF-α、IL-6和IL-10的分泌量;FCM檢測(cè)表面蛋白F 4/80以及CD16/32、CD206的蛋白表達(dá)情況。結(jié)果:HFD組大鼠飼喂4周出現(xiàn)肝臟出現(xiàn)大量脂質(zhì)聚集,血TC、TG顯著高于CON組和FOH組大鼠;8周,HE染色和Masson染色顯示HFD組肝細(xì)胞炎性浸潤明顯,血脂及肝功能指標(biāo)都顯著升高,高脂飼喂SD大鼠發(fā)生NAS H明顯。至16周,HFD組大鼠肝組織炎性細(xì)胞聚集明顯,肝纖維化嚴(yán)重,FOH組和CON組少見炎性浸潤和肝纖維化。Real Time-PCR檢測(cè)肝組織中IL-1β、IL-6、TNF-α結(jié)果顯示FOH組顯著低于HFD組,HFD鼠肝組織CD197、CD11c表達(dá)顯著升高,而FOH組的CD163、CD206升高明顯。PA最佳干預(yù)濃度為100μm ol/L,時(shí)間48h;鏡下可觀察到IFN-γ+LPS組和PA組細(xì)胞形態(tài)呈現(xiàn)較多的梭型或多角型,并有多個(gè)突起呈不規(guī)則形狀,而IL-4組和DHA干預(yù)組細(xì)胞形態(tài)多為圓潤透亮,且細(xì)胞數(shù)相對(duì)于PA組較多;與正常對(duì)照組細(xì)胞相比,熒光定量檢測(cè)結(jié)果顯示,IFN-γ+LPS組和PA組的IL-1β、TNF-α、NF-κB P 65以及M1型標(biāo)志因子IL-6、i Nos、CD11c的表達(dá)都顯著增加,而IL-4組和DHA干預(yù)組的IL-10、CD206、Arg1等具有抑炎作用的M2型細(xì)胞因子表達(dá)顯著上升;FCM檢測(cè)的IFN-γ+LPS和PA組中CD16/32蛋白表達(dá)顯著性增加,IL-4組和DHA干預(yù)組中CD2 06有所增加,但無顯著性差異。結(jié)論:高脂飼喂8周的HFD組大鼠發(fā)生NASH病變。不同于HFD組,16周FOH組大鼠血脂水平及肝功能均改善明顯,炎性細(xì)胞浸潤不明顯,炎性細(xì)胞因子及M1型標(biāo)志分子的表達(dá)較低,而M2型極化標(biāo)志分子表達(dá)顯著升高,提示富含DHA的魚油能夠阻止高脂所致的大鼠NAFLD炎性損傷,DHA改善NAFLD炎性損傷可能與DHA調(diào)節(jié)KCs極化類型有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：非酒精性脂肪性肝 DHA PA 巨噬細(xì)胞極化 M1 M2細(xì)胞表型 核轉(zhuǎn)錄因子kappa B
【學(xué)位授予單位】：武漢輕工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R575.5
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-11
• 主要縮寫詞11-12
• 1 緒論12-19
• 1.1 NAFLD研究進(jìn)展12-13
• 1.2 KCs在炎癥疾病發(fā)生過程中的作用13-15
• 1.2.1 KCs簡介13
• 1.2.2 炎癥發(fā)生過程中KCs的極化13-15
• 1.3 KCs與NAFLD15-16
• 1.3.1 KCs與脂質(zhì)代謝15
• 1.3.2 KCs信號(hào)蛋白PPARy的變化與NAFLD15-16
• 1.4 DHA緩解非酒精性脂肪性肝炎16-17
• 1.4.1 調(diào)節(jié)細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)途徑16
• 1.4.2 調(diào)節(jié)炎性介質(zhì)的生成16-17
• 1.4.3 降低細(xì)胞表面分子和黏附分子表達(dá)17
• 1.4.4 對(duì)細(xì)胞因子及其功能的影響17
• 1.4.5 對(duì)細(xì)胞增殖和抗原遞呈的影響17
• 1.5 本課題的研究目的與意義17-19
• 2 魚油對(duì)NAFLD大鼠肝組織炎性損傷的影響19-43
• 2.1 前言19
• 2.2 材料與方法19-32
• 2.2.1 主要試劑19-21
• 2.2.2 主要設(shè)備儀器21
• 2.2.3 主要試劑配制21-24
• 2.2.4 實(shí)驗(yàn)方法24-32
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果32-42
• 2.3.1 高脂飲食對(duì)大鼠體重和肝重的影響32
• 2.3.2 各組大鼠肝功能指標(biāo)的變化32-34
• 2.3.3 各組大鼠血脂的變化34-35
• 2.3.4 肝組織H&E、MASSON染色及NAFLD評(píng)分35-39
• 2.3.5 IL-6、IL-1β、TNF-α的mRNA表達(dá)情況39-40
• 2.3.6 CD197、CD11c、CD163、CD206的mRNA表達(dá)情況40-41
• 2.3.7 CD68、CD206、CD11C蛋白表達(dá)情況41-42
• 2.4 結(jié)論42-43
• 3 DHA調(diào)控KCs極化途徑的研究43-58
• 3.1 前言43
• 3.2 材料與方法43-51
• 3.2.1 主要試劑43-44
• 3.2.2 主要儀器44
• 3.2.3 主要試劑配制44-46
• 3.2.4 實(shí)驗(yàn)方法46-51
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果51-58
• 3.3.1 干預(yù)后RAW264.7細(xì)胞形態(tài)的改變51-53
• 3.3.2 炎性細(xì)胞因子以及M1/M2型標(biāo)志基因mRNA表達(dá)情況53-54
• 3.3.3 ELISA檢測(cè)培養(yǎng)基上清TNF-α、IL-10、IL-6濃度54-56
• 3.3.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD16/32、CD206蛋白表達(dá)情況56-58
• 4 討論58-61
• 參考文獻(xiàn)61-70
• 致謝70-71
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果71

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王麗娜;江紅;王興友;陳曉琳;宋何煜;金幫明;;體外細(xì)胞炎性損傷模型的建立[J];醫(yī)學(xué)研究雜志;2013年08期

2 孫耕耘,錢桂生,肖貞良,黃碧瓊,夏前明;炎性損傷對(duì)肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞β受體的影響[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2000年02期

3 吳禹,周向東;活性氧與肺炎性損傷[J];現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生;2005年01期

4 王興友;陳杭薇;錢桂生;;糖皮質(zhì)激素對(duì)血管內(nèi)皮炎性損傷的保護(hù)機(jī)制[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2007年05期

5 杜先智,周向東;支氣管肺組織炎性損傷和抗炎性損傷因素的平衡機(jī)制[J];中國藥業(yè);2005年06期

6 聶曉紅,周向東;蛋白酶抑制劑對(duì)肺炎性損傷的保護(hù)作用[J];臨床肺科雜志;2004年06期

7 ;吞噬細(xì)胞源性兒茶酚胺增加急性炎性損傷[J];中華臨床免疫和變態(tài)反應(yīng)雜志;2008年01期

8 張榮偉;李穎;田阿勇;張慧敏;禹紅梅;;β-欖香烯對(duì)自身免疫性腦脊髓炎小鼠早期炎性損傷的治療作用及其免疫學(xué)機(jī)制[J];解剖科學(xué)進(jìn)展;2012年03期

9 吳賢波;戴敏;陳穎;馬萍;;“芪香”氣霧劑對(duì)流感病毒肺炎小鼠肺部炎性損傷的影響及機(jī)制研究[J];遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2013年01期

10 劉文虎,陳香美;明膠酶A致腎小球炎性損傷的研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué)(生理、病理科學(xué)與臨床分冊(cè));1999年06期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 李娜;翟瑩;李琦;王華林;劉志國;;ω-3PUFA調(diào)控巨噬細(xì)胞極化途徑緩解NAFLD肝細(xì)胞炎性損傷[A];第十二屆全國脂質(zhì)與脂蛋白學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2014年

2 郭艷;羅南富;張崇唯;陳嬌;周靜;;TNFR1受體在體外循環(huán)誘導(dǎo)的肺炎性損傷中的作用[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國中青年檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2012年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 張杰;獨(dú)活抑制阿爾茨海默病Aβ大鼠模型免疫炎性損傷的實(shí)驗(yàn)研究[D];遼寧中醫(yī)藥大學(xué);2008年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 孫振威;冰凍血小板輸注對(duì)小鼠失血性休克組織炎性損傷的影響[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2016年

2 陳立祥;中藥腎絡(luò)通下調(diào)SGK-1表達(dá)抑制梗阻性腎病炎性損傷的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2016年

3 王越;阿司匹林對(duì)Aβ25-35誘導(dǎo)神經(jīng)元炎性損傷的保護(hù)作用研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2016年

4 翟瑩;DHA調(diào)控Kupffer細(xì)胞極化途徑緩解NAFLD炎性損傷[D];武漢輕工大學(xué);2016年

5 柏云;ω-3多不飽和脂肪酸緩解非酒精性脂肪性肝病炎性損傷的研究[D];武漢輕工大學(xué);2014年

6 郭峻菲;內(nèi)源性LPS對(duì)奶牛肝臟的炎性損傷與機(jī)理研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

，

本文編號(hào)：954156