發(fā)布時(shí)間：2017-10-01 15:00

  本文關(guān)鍵詞：煙酰胺核糖對非酒精性脂肪性肝病的治療作用及機(jī)制

  更多相關(guān)文章： 煙酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶 煙酰胺核糖 非酒精性脂肪性肝病 老年化

【摘要】：非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)是一類疾病譜的總稱,包括非酒精性單純性脂肪變(simple steatosis,SS)、非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH),即在SS的基礎(chǔ)上出現(xiàn)肝臟炎癥浸潤和或纖維化,NAFLD進(jìn)一步可發(fā)展為肝硬化甚至肝癌。隨著肥胖及其相關(guān)代謝綜合征全球化的流行,NAFLD現(xiàn)已成為西方發(fā)達(dá)國家慢性肝病最常見的原因,成人NAFLD的患病率為10%~30%,并且老年人群的NAFLD發(fā)病率更高。NAFLD已成為我國除病毒性肝炎外,引起肝功能酶學(xué)異常和慢性肝病最常見的原因。然而,目前針對NAFLD尚無有效的藥物治療方法。煙酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(nicotinamide phosphoribosyltransferase,NAMPT)是由脂肪細(xì)胞分泌的一種脂肪因子,具有細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外活性。細(xì)胞內(nèi)NAMPT是哺乳動(dòng)物體內(nèi)煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide,NAD)補(bǔ)救合成途徑的限速酶,NAD作為生物體內(nèi)氧化還原反應(yīng)的輔酶在細(xì)胞基礎(chǔ)生命活動(dòng)中發(fā)揮著重要的生理功能。既往研究表明,NAMPT-NAD信號通路參與調(diào)控肥胖、胰島素抵抗、脂質(zhì)代謝、炎癥反應(yīng)以及抗衰老等病理生理活動(dòng),而這些生物學(xué)功能又與NAFLD密切相關(guān)。因此,我們提出猜想,NAMPT-NAD信號通路是否參與NAFLD的發(fā)生發(fā)展?于是,我們構(gòu)建了NAMPT酶失活突變體的轉(zhuǎn)基因(Dominant-Negative NAMPT transgenic)小鼠(DN-NAMPT小鼠的內(nèi)源性NAMPT表達(dá)和活性受到抑制)。探討NAMPT-NAD信號通路與NAFLD之間的關(guān)系并證實(shí)肝臟NAMPT水平下降能促進(jìn)NAFLD的進(jìn)展,在此實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,本課題進(jìn)一步研究補(bǔ)充NAD的前體煙酰胺核糖(Nicotinamide Riboside,NR)治療能否改善或逆轉(zhuǎn)NAFLD的進(jìn)展以及老年化相關(guān)的NAD下降與NAFLD的關(guān)系。研究方法:1,將10周左右小鼠分為WT組、DN-NAMPT組和DN-NAMPT+NR治療一個(gè)月組,觀察小鼠在正常飲食下肝臟損傷情況(血清AST、ALT)、和血脂水平,測定肝臟的TG、TC和脂質(zhì)氧化產(chǎn)物(MDA)水平,并且檢測與脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)基因的mRNA表達(dá)變化,使用F4/80及TNF-α免疫組織化學(xué)染色觀察肝臟巨噬細(xì)胞浸潤和炎癥因子表達(dá)情況,同時(shí)測定小鼠的體重和肝重。2,將10周左右的普通C57BL/6小鼠分為正常飲食組(Chow組)、高脂飲食組(HFD組)和HFD+NR組,HFD組小鼠高脂飼料(脂肪供能比為45%的NAFLD模型高脂飼料)喂養(yǎng)12周,而HFD+NR組高脂飼料喂養(yǎng)3個(gè)月,第3個(gè)月同時(shí)補(bǔ)充煙酰胺核糖治療。對比三組小鼠的體重、肝重以及肝臟TG和TC含量,并檢測肝臟炎癥因子(TNF-α和IL-1b)的基因轉(zhuǎn)錄,肝臟油紅O染色觀察脂質(zhì)沉積,同時(shí)使用α-SMA免疫組化和Masson染色判斷小鼠的肝臟纖維化程度。3,使用Western blotting的方法檢測Adult組(4個(gè)月)、Middle-aged組(12個(gè)月)和Old組(20個(gè)月)C57BL/6小鼠,以及行肝臟切除術(shù)的中年(Age45歲)和老年(Age60歲)患者的非病變肝臟組織NAD的含量以及NAD合成途徑中關(guān)鍵酶NAMPT、IDO、NADS和NMNAT的表達(dá),另外,使用免疫組化的方法對比中年和老年患者的肝臟NAD合成途徑中關(guān)鍵酶的含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果:1,正常飲食下,DN-NAMPT小鼠的體重、肝重以及血清TG和TC水平與WT組無明顯差別,但肝臟TG、TC和氧化應(yīng)激產(chǎn)物(MDA)水平,巨噬細(xì)胞浸潤以及炎癥因子表達(dá)明顯高于WT組,而甘油三酯和膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)的基因mRNA水平明顯較WT組低。補(bǔ)充NAD前體NR治療后肝臟TG、TC和MDA水平以及炎癥因子表達(dá)明顯降低,巨噬細(xì)胞浸潤程度改善,脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)基因表達(dá)上調(diào)。補(bǔ)充NR能夠改善DN-NAMPT小鼠輕微脂肪變、肝臟炎癥浸潤和氧化應(yīng)激反應(yīng)。2,補(bǔ)充NAD前體NR治療能夠降低NAFLD小鼠的體重、肝重和肝指數(shù),以及肝臟TG、TC的含量,油紅O染色顯示補(bǔ)充NR治療NAFLD小鼠的肝臟脂質(zhì)沉積程度顯著下降,并且炎癥因子(TNF-α和IL-1b)在肝臟的表達(dá)也降低,免疫組化的結(jié)果顯示病程N(yùn)R治療還能改善NAFLD小鼠的肝纖維化程度。3,年齡與肝臟NAD含量呈負(fù)相關(guān)。Western blotting結(jié)果顯示老年組小鼠及老年組患者的肝臟NAMPT和NAD水平顯著下降,而NAD從頭合成途徑的關(guān)鍵酶(IDO、NADS和NMNAT)蛋白質(zhì)水平明顯增加,并且,免疫組化的結(jié)果也證實(shí)老年患者的肝臟NAMPT下調(diào),但I(xiàn)DO、NADS和NMNAT表達(dá)增加。實(shí)驗(yàn)結(jié)論:1,補(bǔ)充NAD前體NR能夠逆轉(zhuǎn)NAMPT下降導(dǎo)致的小鼠肝臟脂肪變。2,補(bǔ)充NAD前體NR能夠延緩或部分逆轉(zhuǎn)HFD導(dǎo)致的小鼠NAFLD病變,補(bǔ)充NR治療可能作為老年NAFLD患者的一個(gè)潛在治療策略。3,老年化與肝臟NAD水平有關(guān),NAMPT調(diào)控的NAD補(bǔ)救合成途徑功能不足可能是老年化NAD下降的主要原因,同時(shí)也是促進(jìn)老年NAFLD發(fā)生發(fā)展的危險(xiǎn)因素。
【關(guān)鍵詞】：煙酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶 煙酰胺核糖 非酒精性脂肪性肝病 老年化
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R575
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 英文縮略詞表10-11
• 前言11-15
• 實(shí)驗(yàn)材料與實(shí)驗(yàn)方法15-34
• 一、實(shí)驗(yàn)材料15-18
• 二、實(shí)驗(yàn)方法18-33
• 三、實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法33-34
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果34-48
• 一、補(bǔ)充NR能夠逆轉(zhuǎn)NAMPT下降導(dǎo)致的小鼠肝臟脂肪變34-40
• 二、補(bǔ)充NR能夠改善或逆轉(zhuǎn)高脂飲食導(dǎo)致的小鼠NAFLD病變40-45
• 三、NAD補(bǔ)救合成途徑功能不足是老年化NAD下降的主要原因45-48
• 討論48-50
• 參考文獻(xiàn)50-54
• 附錄54-55
• 綜述 脂肪細(xì)胞因子與非酒精性脂肪性肝病的研究進(jìn)展55-66
• 參考文獻(xiàn)61-66
• 在讀期間發(fā)表論文和參加科研工作情況說明66-67
• 致謝67-68

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本文編號：954063