本文關(guān)鍵詞：Sirt1失活通過增加NF-KB的乙�；瘉肀Ｗo(hù)TNF-α引起的肝細(xì)胞凋亡和肝臟損傷

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【摘要】：急性肝衰竭(Acute liver failure,ALF)是各種肝臟疾病發(fā)展而來,以肝細(xì)胞的大面積凋亡和壞死為主要特點(diǎn),而最終導(dǎo)致多臟器衰竭的一種臨床綜合征。雖然急性肝衰竭發(fā)病率低,但它的病程兇險(xiǎn),死亡率極高,嚴(yán)重威脅肝病患者的生命安全。因此,探明其中的細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制了解其病理生理過程為尋找新的治療方案是至關(guān)重要的。Sirt1(Sirtuin type 1)是依賴于煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)的組蛋白脫乙酰酶,為Sirtuins家族成員之一,與細(xì)胞增殖、分化、衰老、凋亡和代謝密切相關(guān)(1-5)。NF-κB是一種異二聚體蛋白,一般由兩個(gè)功能亞單位(即P65和P50)組成,在多數(shù)細(xì)胞類型,NF-kB在胞漿與抑制性蛋白質(zhì)結(jié)合形成無活性的復(fù)合物。當(dāng)腫瘤壞死因子等作用于相應(yīng)受體后,可通過第二信使Cer等激活此系統(tǒng),而病毒感染、脂多糖、活性氧中間體、佛波酯、雙鏈RNA以及前述信息傳遞途徑中活化的RKC、PkA等則可直接激活NF-kB。激活過程是通過磷酸化抑制性蛋白使其構(gòu)象改變而從NF-kB脫落,使得NF-kB得以活化。活化的NF-kB進(jìn)入細(xì)胞核,與DNA接觸,并啟動(dòng)或抑制有關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄。核因子kB(NF-kB)體系主要涉及機(jī)體防御反應(yīng)、組織損傷和應(yīng)激、細(xì)胞分化和調(diào)亡以及腫瘤生長抑制過程的信息傳遞。NF-κB(RelA/p65)在TNF-α引起的肝細(xì)胞損傷中起保護(hù)作用(6-8)。Sirt1可以使NF-κB(RelA/p65)的310位上的賴氨酸殘基脫乙酰化從而抑制NF-κB的轉(zhuǎn)錄活性,減少其下游基因的表達(dá)促進(jìn)細(xì)胞的凋亡。同時(shí),Sirt1也可以使p53脫乙酰化從而抑制p53的活性而抗凋亡(9)。Sirt1在肝細(xì)胞凋亡中的作用目前還沒有明確的結(jié)論。為此,我們進(jìn)行了下面一些實(shí)驗(yàn):(1)通過cre-loxp系統(tǒng)我們建立了肝臟特異性敲除SIRT1基因的小鼠。通過分別給Sirt1+/+和Sirt1-/-小鼠內(nèi)毒素(LPS)10μg/Kg聯(lián)合D-氨基半乳糖胺(D-Galn)700mg/Kg建立急性肝衰竭模型,觀察兩組的生存率和轉(zhuǎn)氨酶水平。我們觀察到Sirt1+/+小鼠組建模后72小時(shí)的死亡率為100%,6h時(shí)的轉(zhuǎn)氨酶水平明顯升高。而Sirt1-/-小鼠組死亡率為0,轉(zhuǎn)氨酶也較Sirt1+/+組明顯降低。(2)在細(xì)胞水平,我們分別提取Sirt1+/+和Sirt-/-小鼠的原代肝細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),以ACTD20ng/ml聯(lián)合TNF-α20ng/ml建立損傷模型,發(fā)現(xiàn)Sirt-/-組肝細(xì)胞的損傷明顯小于Sirt+/+組。在對兩組進(jìn)行NF-κB siRNA干擾后我們發(fā)現(xiàn),SIRT1敲出后的這種保護(hù)作用消失了。(3)我們使用Sirt1的抑制劑尼克酰胺預(yù)處理Sirt+/+小鼠后,建立急性肝衰竭模型。結(jié)果顯示,尼克酰胺有明顯的保護(hù)作用,預(yù)處理后小鼠的生存率明顯提高,病理組織改變明顯減輕。(4)通過不同時(shí)間點(diǎn)TNF-α預(yù)處理后NF-κB乙�；降臋z測,我們發(fā)現(xiàn)Sirt1敲出后NF-κB的乙酰化水平明顯增高且消退時(shí)間延長。進(jìn)一步采用EMSA實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證NF-κB與DNA的結(jié)合活性,通過提取不同時(shí)間點(diǎn)TNF-α預(yù)處理后的細(xì)胞核蛋白做EMSA發(fā)現(xiàn),在預(yù)處理后的1h到2h Sirt1-/-組NF-κB與DNA的結(jié)合遠(yuǎn)大于Sirt1+/+組。因此,我們得出結(jié)論,Sirt1的失活通過增加NF-κB在受到TNF-α刺激后乙�；乃絹戆l(fā)揮對肝細(xì)胞的保護(hù)作用。
【關(guān)鍵詞】：急性肝衰竭 肝臟 Sirt1 NF-KB
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R575.3
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 符號及縮略詞說明10-12
• 前言12-15
• 第一部分 Sirt1在TNF引起的肝損傷中的作用15-30
• 材料與方法15-19
• 實(shí)驗(yàn)方法19-22
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果22-29
• 小結(jié)29-30
• 第二部分 Sirt1的作用依賴調(diào)控NF-κB發(fā)揮作用30-56
• 材料與方法30-34
• 實(shí)驗(yàn)方法34-46
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果46-55
• 小結(jié)55-56
• 結(jié)論56-57
• 討論57-59
• 參考文獻(xiàn)59-64
• 致謝64-66
• 學(xué)術(shù)論文和科研成果目錄66

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 ;Induction of acute hepatic injury by endotoxin in mice[J];Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International;2002年04期

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本文編號：945556