本文關(guān)鍵詞：多不飽和脂肪酸調(diào)節(jié)lox-1表達(dá)通路緩解脂肪肝炎性損傷的作用

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【摘要】：近年來(lái),隨著非酒精性脂肪肝(NAFLD)患病率的逐年攀升,且低齡化趨勢(shì)愈加明顯,受到國(guó)內(nèi)外廣泛關(guān)注。流行病學(xué)研究顯示,魚(yú)油和紫蘇油因富含ω-3多不飽和脂肪酸(PUFAs)而具有調(diào)節(jié)脂代謝的作用,對(duì)NAFLD也有較為明顯的保護(hù)作用。NAFLD作為代謝綜合征在肝臟的表征,與糖尿病及心腦血管疾病的發(fā)生關(guān)系密切。已有大量研究表明,糖尿病、腎臟炎癥和纖維化等病理過(guò)程受到了氧化低密度脂蛋白受體-1(LOX-1)的影響。LOX-1的表達(dá)受控于轉(zhuǎn)錄因子激活蛋白1(AP-1)、c-jun氨基末端激酶(JNK)等,與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(ERS)系統(tǒng)密切相關(guān),這些因素均與NAFLD的病理過(guò)程相關(guān)聯(lián)。研究顯示,PUFAs的干預(yù)能影響巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等多種細(xì)胞內(nèi)LOX-1的表達(dá),對(duì)NAFLD有保護(hù)作用。因此,本文將針對(duì)NAFLD的發(fā)生發(fā)展與LOX-1的相互關(guān)系及PUFAs調(diào)節(jié)LOX-1表達(dá)通路緩解NAFLD的作用進(jìn)行研究。目的:研究ω-3 PUFA緩解NAFLD發(fā)生發(fā)展過(guò)程中LOX-1表達(dá)通路的調(diào)控作用。方法:通過(guò)高脂高膽固醇自由飲食建立NAFLD模型,選用SD雄性大鼠192只,每組48只,隨機(jī)分成4組:正常對(duì)照組(CON),高脂組(HFD),魚(yú)油組(F),紫蘇油組(P)。于飼喂的4w、8w、12w、16w時(shí),每組分別處死12只,收集血清,快速摘取肝臟并稱重。試劑盒檢測(cè)大鼠血清中總膽固醇(TCH)和總甘油三酯(TG)低密度脂蛋白(LDL-C)的含量,谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)的活力等生化指標(biāo);蘇木精-伊紅(HE)染色和Masson染色;采用熒光定量PCR(RT-PCR)和蛋白免疫印跡(WB)方法檢測(cè)各組LOX-1、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)壓力(ERS)相關(guān)蛋白(BIP、IRE1、ATF6、ATF4)、炎性分子(IL-1β、TNFα)及炎性通路信號(hào)分子(p-JNK、c-Jun、c-Fos等)的m RNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)情況。體外實(shí)驗(yàn)選用L02細(xì)胞,實(shí)驗(yàn)分為CON組、PA組和PA+DHA組。油紅O染色確定PA孵育L02細(xì)胞的負(fù)荷濃度。RT-PCR和WB檢測(cè)各組LOX-1、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)壓力(ERS)相關(guān)蛋白(BIP、IRE1、ATF6、ATF4)、炎性分子(IL-1β、TNFα)及炎性通路信號(hào)分子(p-JNK、c-Jun、c-Fos)的m RNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)情況。結(jié)果:動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中,HFD組與CON組相比,肝指數(shù)明顯升高,血清中TCH、LDL-C、ALT、AST、FFA、SOD、GST含量均顯著升高(P0.01),肝細(xì)胞出現(xiàn)氣球樣變,觀察到大小泡混合型肝細(xì)胞脂肪變性;小葉內(nèi)和匯管區(qū)周圍觀察到明顯炎性浸潤(rùn)和纖維化,呈現(xiàn)典型的炎性病變;隨飼喂時(shí)間的延長(zhǎng),HFD組較CON組LOX-1的表達(dá)顯著增加;HFD組較CON組ERS相關(guān)蛋白BIP、IRE1、ATF6、ATF4表達(dá)顯著升高(P0.01);HFD組較CON組炎性指標(biāo)IL-1β、TNFα表達(dá)顯著升高(P0.01);HFD組較CON組p-JNK、c-Jun、c-Fos表達(dá)顯著升高(P0.01);而魚(yú)油及紫蘇油干預(yù)組在所檢測(cè)的指標(biāo)上均表現(xiàn)為效果明顯改善。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中,濃度為0.2mmol/L的PA孵育24h相較于正常組LOX-1、BIP、IRE1、ATF6、ATF4、IL-1β、TNFα的基因和蛋白均表達(dá)上調(diào),出現(xiàn)ERS和炎性因子表達(dá)上調(diào);而0.2mmol/L的PA和0.01mmol/L的DHA同時(shí)孵育24h,LOX-1的表達(dá)顯著下調(diào),相應(yīng)的ERS(BIP、IRE1、ATF6、ATF4)和炎性反應(yīng)(IL-1β、TNFα)顯著降低。結(jié)論:ω-3 PUFA能明顯降低血脂、改善肝功能外,能緩解ERS,并可能通過(guò)調(diào)節(jié)IRE1-JNK-AP-1-LOX-1信號(hào)通路,抑制LOX-1及其他炎性因子的表達(dá),從而抑制炎性反應(yīng)和纖維化進(jìn)程,干預(yù)NAFLD的發(fā)展。
【關(guān)鍵詞】：多不飽和脂肪酸 非酒精性脂肪肝 氧化低密度脂蛋白受體1 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激
【學(xué)位授予單位】：武漢輕工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R575.5
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-10
• 主要縮寫(xiě)詞10-12
• 1 緒論12-17
• 1.1 非酒精性脂肪肝病簡(jiǎn)介12-13
• 1.1.1 NAFLD的發(fā)病機(jī)制12
• 1.1.2 NAFLD與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激12-13
• 1.1.3 肝纖維化13
• 1.2 凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體1簡(jiǎn)介13-15
• 1.2.1 LOX-1與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激14
• 1.2.2 LOX-1與炎癥14-15
• 1.3 炎癥小體15
• 1.4 Ω-3多不飽和脂肪酸簡(jiǎn)介15-16
• 1.4.1 ω-3 PUFA與炎癥15-16
• 1.4.2 ω-3 PUFA與NAFLD16
• 1.5 立題依據(jù)與研究?jī)?nèi)容16-17
• 2 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)觀察Ω-3 PUFA對(duì)LOX-1炎性途徑的調(diào)節(jié)作用17-43
• 2.1 前言17
• 2.2 實(shí)驗(yàn)材料和實(shí)驗(yàn)方法17-31
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料17-24
• 2.2.2 實(shí)驗(yàn)方法24-31
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果31-42
• 2.3.1 大鼠肝指數(shù)結(jié)果31
• 2.3.2 血脂指標(biāo)結(jié)果31-32
• 2.3.3 肝功能指標(biāo)結(jié)果32-33
• 2.3.4 血清FFA、SOD、GST變化結(jié)果33-34
• 2.3.5 形態(tài)學(xué)分析34-36
• 2.3.6 大鼠肝組織Olr-1基因表達(dá)變化和LOX-1蛋白表達(dá)變化36-37
• 2.3.7 大鼠肝組織ERS標(biāo)志分子表達(dá)變化37-39
• 2.3.8 肝組織纖維化相關(guān)基因表達(dá)變化39-40
• 2.3.9 肝組織炎癥因子表達(dá)變化40-41
• 2.3.10 大鼠肝組織p-JNK、AP-1蛋白表達(dá)變化41-42
• 2.4 結(jié)論42-43
• 3 離體細(xì)胞實(shí)驗(yàn)43-56
• 3.1 前言43
• 3.2 實(shí)驗(yàn)材料與方法43-48
• 3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料43-45
• 3.2.2 實(shí)驗(yàn)方法45-48
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果48-55
• 3.3.1 PA體外誘導(dǎo)L02肝細(xì)胞脂肪變性模型的建立48-50
• 3.3.2 L02細(xì)胞LOX-1 蛋白表達(dá)變化50
• 3.3.3 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志分子的表達(dá)變化50-52
• 3.3.4 炎癥發(fā)應(yīng)52-53
• 3.3.5 炎性小體在mRNA水平表達(dá)情況53-54
• 3.3.6 L02細(xì)胞p-JNK、c-Fos、c-Jun蛋白表達(dá)變化54-55
• 3.4 小結(jié)55-56
• 4 討論56-59
• 4.1 全文總結(jié)58
• 4.2 展望58-59
• 參考文獻(xiàn)59-65
• 致謝65-66
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果66

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：922458