本文關(guān)鍵詞：MSCs促進肝臟巨噬細(xì)胞向M2型極化治療急性肝衰竭的實驗研究

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【摘要】：背景：急性肝功能衰竭(acute liver failure, ALF)發(fā)生時,機體免疫系統(tǒng)過度激活,肝臟免疫微環(huán)境嚴(yán)重紊亂,致使肝細(xì)胞大量壞死,肝功能短期迅速喪失。肝臟巨噬細(xì)胞的可塑性和極化狀態(tài),參與并維持了肝臟免疫微環(huán)境的內(nèi)穩(wěn)態(tài)。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞旁分泌的可溶性細(xì)胞因子可發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用改善ALF時肝臟的免疫微環(huán)境。目的：通過在ALF實驗動物模型中外源性移植骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells, MSCs)以達(dá)到干預(yù)ALF時肝臟免疫微環(huán)境的目的。評價MSCs移植治療對ALF的作用效果,并檢測肝臟組織內(nèi)巨噬細(xì)胞的浸潤程度和極化狀態(tài)的改變。明確MSCs移植治療ALF的內(nèi)在分子機制以及巨噬細(xì)胞在維持肝臟免疫微環(huán)境內(nèi)穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮的作用,進一步探討MSCs移植治療與巨噬細(xì)胞浸潤、極化狀態(tài)的關(guān)系。方法：通過藥物誘導(dǎo)小鼠ALF動物模型,外源性移植小鼠MSCs細(xì)胞,生化分析儀檢測細(xì)胞移植治療后小鼠肝功能(ALT、AST、PT、NH3)、蛋白芯片檢測小鼠體內(nèi)炎癥介質(zhì)的變化以及HE染色檢測組織病理的改變。通過蛋白質(zhì)芯片技術(shù)篩選出細(xì)胞移植治療前后表達(dá)差異較大的炎癥介質(zhì)。另一方面運用免疫組織化學(xué)和流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞移植治療前后肝臟組織中巨噬細(xì)胞的浸潤程度和極化狀態(tài)的變化,并分析其與實驗動物肝功能的相關(guān)性。然后,通過對MSCs細(xì)胞移植治療后差異表達(dá)的炎癥介質(zhì)進行拮抗,觀察小鼠肝臟組織中巨噬細(xì)胞的變化。深入探討MSCs移植治療與巨噬細(xì)胞浸潤程度和極化狀態(tài)的關(guān)系以及其Western blot檢測相應(yīng)信號通路的變化。同時,聯(lián)合臨床標(biāo)本的部分觀察指標(biāo),驗證巨噬細(xì)胞浸潤程度和極化狀態(tài)的臨床相關(guān)性。結(jié)果：首先,我們發(fā)現(xiàn)MSCs移植治療能夠顯著改善ALF小鼠的的肝功能,增強凝血功能,減輕組織損傷和肝細(xì)胞凋亡以及IL-1、IL-6和TNF-α等多種炎癥介質(zhì)的浸潤。蛋白芯片結(jié)果提示MSCs移植治療前后ALF小鼠體內(nèi)多種抗炎因子表達(dá)顯著升高,其中IL-10尤為甚。流式細(xì)胞結(jié)果提示MSC s移植前,ALF小鼠肝臟組織內(nèi)以M1型巨噬細(xì)胞浸潤為主；而MSCs移植后以M2型巨噬細(xì)胞浸潤為主,M2/M1的比例在移植后顯著升高,而且肝組織中巨噬細(xì)胞的浸潤程度在MSCs細(xì)胞移植治療后也明顯減輕。AS101處理(IL-10抑制劑)MSCs后,MSCs移植治療的肝保護作用被拮抗,巨噬細(xì)胞恢復(fù)至肝衰竭狀態(tài)時以M1型為主導(dǎo)。MSCs移植治療肝衰竭小鼠原代巨噬細(xì)胞的Western blot檢測結(jié)果與移植治療前相比,STAT3、p-STAT3和Arg-1表達(dá)明顯增高,iNOS表達(dá)下降。AS101處理組與MSCs移植組相比,STAT3. p-STAT3和Arg-1表達(dá)顯著下降,iNOS表達(dá)上升。細(xì)胞上清液中加入S tattic (STAT3抑制劑)后,與MSCs組相比,Stattic組巨噬細(xì)胞內(nèi)分泌的IL-10水平顯著降低。結(jié)論：MSCs旁分泌的IL-10可活化STAT3信號通路,促進巨噬細(xì)胞向M2型極化,從而維持肝臟炎癥微環(huán)境內(nèi)穩(wěn)態(tài),發(fā)揮肝保護作用。巨噬細(xì)胞的浸潤程度和極化狀態(tài)與患者的肝功能密切相關(guān),有望成為急性肝功能衰竭治療的重要手段。
【關(guān)鍵詞】：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 巨噬細(xì)胞 急性肝功能衰竭 極化 STAT3
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R575.3
【目錄】：

• 英文縮略詞對照表5-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-17
• 第一部分 MSCs移植治療小鼠急性肝功能衰竭的實驗研究17-39
• 引言17-20
• 材料和方法20-27
• 結(jié)果27-36
• 討論36-39
• 第二部分：MSCs通過旁分泌IL-10促進肝臟巨噬細(xì)胞向M2型極化的實驗研究39-71
• 引言39-42
• 材料和方法42-52
• 結(jié)果52-65
• 討論65-71
• 第三部分：急性肝衰竭患者肝臟組織中巨噬細(xì)胞浸潤的實驗研究71-87
• 引言71-73
• 材料和方法73-78
• 結(jié)果78-85
• 討論85-87
• 全文總結(jié)87-88
• 參考文獻88-97
• 綜述97-123
• 參考文獻111-123
• 攻讀學(xué)位期間成果123-124
• 致謝124

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1 管必隆;李維信;;小白鼠肝臟巨噬細(xì)胞的發(fā)生和分化[J];解剖學(xué)報;1965年04期

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本文編號：914774