本文關(guān)鍵詞：丙型肝炎抗病毒治療療效預(yù)測血清標(biāo)志物的篩選研究

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【摘要】：第一部分研究背景和目的：本研究旨在篩選和驗(yàn)證丙型肝炎干擾素抗病毒療效預(yù)測microRNA血清標(biāo)志物。肝臟特異性表達(dá)的microRNA-122近年來被認(rèn)為是急性肝損傷的早期、靈敏血清標(biāo)志物。由于血清/血漿microRNA檢測尚無公認(rèn)穩(wěn)定內(nèi)參,內(nèi)參和檢測方法的選擇導(dǎo)致諸多循環(huán)microRNA研究結(jié)果存在偏差。本研究擬建立血清microRNA-122絕對(duì)定量檢測體系,評(píng)價(jià)急性肝炎和慢性丙型肝炎患者血清microRNA-122水平與血清ALT的相關(guān)性及在慢性丙型肝炎患者中與HCV病毒載量和肝組織炎癥活動(dòng)程度的相關(guān)性。同時(shí),基于血清microRNA芯片實(shí)驗(yàn),篩選能夠預(yù)測丙型肝炎患者治療病毒學(xué)應(yīng)答的血清mciroRNA候選分子。方法：采集未接受抗病毒治療慢性丙型肝炎患者血清105例、急性肝炎患者治療過程系列血清11例和健康體檢者血清33例,均已簽署知情同意書�；诨瘜W(xué)合成microRNA-122和外源參照cel-mir-39化學(xué)合成標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,校正樣品提取效率并對(duì)血清microRNA-122進(jìn)行絕對(duì)定量檢測。慢性丙型肝炎患者HCV病毒載量采用Abbott REALTIME(?)試劑檢測,肝組織炎癥壞死分級(jí)采用Ishak評(píng)分系統(tǒng)進(jìn)行評(píng)價(jià)。分別富集慢性丙型肝炎干擾素治療應(yīng)答組26例患者和無應(yīng)答組13例患者基線和治療第4周血清,行microRNA芯片實(shí)驗(yàn),篩選兩組患者基線和早期血清差異microRNA,在個(gè)體樣本和擴(kuò)大樣本中驗(yàn)證。結(jié)果：血清microRNA-122水平在急性肝炎患者高于慢性丙型肝炎患者,慢性丙型肝炎患者高于健康體檢人群,差異均具有顯著性(p0.001,p0.001)。急性肝炎患者治療前血清microRNA-122水平與血清ALT水平呈現(xiàn)顯著相關(guān)性(r=0.8462,p0.001),但在治療過程中血清microRNA-122水平保持較高水平,與ALT的降低不具有相關(guān)性(r=0.2748,p=0.1938)。慢性丙型肝炎患者血清microRNA-122水平與HCV病毒載量(r=-0.01734,p=0.8607)、血清ALT(r=0.07135,p= 0.4695)以及肝組織炎癥壞死分級(jí)(r=0.08263,p=0.4021)均無顯著相關(guān)性。microRNA芯片實(shí)驗(yàn)篩選得到microRNA-221和microRNA-603在SVR組和non-SVR組基線和第4周均存在顯著差異(p值均小于0.01)。其中,microRNA-221在SVR組基線至第4周顯著上調(diào),而在non-SVR組基線至第4周顯著下調(diào)；microRNA-603在SVR組基線至第4周顯著下調(diào)(p0.01),而在non-SVR組基線至第4周無顯著變化(p0.05)。結(jié)論：血清microRNA絕對(duì)定量體系的建立可避免由于提取效率及內(nèi)參不穩(wěn)定導(dǎo)致的偏差,提高結(jié)果準(zhǔn)確性。盡管血清microRNA-122這一急性肝損傷標(biāo)志物與急性肝炎患者治療前血清ALT呈現(xiàn)良好的相關(guān)性,但其動(dòng)態(tài)水平無法有效指示治療效果；在慢性丙型肝炎進(jìn)展過程中也并不能反映患者肝組織炎癥壞死程度和病毒復(fù)制水平。血清MicroRNA-221和microRNA-603作為丙型肝炎抗病毒療效預(yù)測候選標(biāo)志物,在SVR患者和non-SVR患者基線水平存在顯著差異。第二部分研究背景和目的：HCV基因1型慢性感染者對(duì)干擾素治療應(yīng)答較差,但其具體機(jī)制未知。IP-10血清水平被認(rèn)為可能與慢性丙型肝炎患者抗病毒治療療效相關(guān),目前尚無中國人群報(bào)道。本研究通過篩選基因1型和2型HCV復(fù)制子細(xì)胞干擾素處理前后的差異表達(dá)基因,尋找HCV基因1型拮抗干擾素的相關(guān)基因。檢測IP-10血清水平在基因1型和2型丙型肝炎患者中的差異,評(píng)價(jià)其單獨(dú)及聯(lián)合其他指標(biāo)對(duì)抗病毒治療持續(xù)病毒學(xué)應(yīng)答(SVR)的預(yù)測價(jià)值。方法：構(gòu)建基因1型和2型HCV復(fù)制子細(xì)胞模型,芯片實(shí)驗(yàn)篩選二者干擾素處理前后的差異表達(dá)基因并行實(shí)時(shí)定量PCR驗(yàn)證。血清IP-10采用ELISA法測定。對(duì)于丙型肝炎抗病毒治療SVR預(yù)測因素的篩選,首先經(jīng)過單因素分析,隨后p0.10的變量納入多因素Logistic回歸分析篩選獨(dú)立預(yù)測變量。結(jié)果：IP-10和GBP1在基因1型和基因2型HCV復(fù)制子細(xì)胞模型基線和干擾素處理后水平存在顯著差異,且基因1型復(fù)制子細(xì)胞細(xì)胞上清IP-10水平顯著高于2型；P-10血清水平在基因1型丙型肝炎患者中也顯著高于2型。IP-10基線血清水平與ALT顯著相關(guān),但與IL28B基因型和病毒載量無關(guān)。IP-10基線和治療第4周的血清水平能夠有效預(yù)測丙型肝炎抗病毒治療SVR；IP-10血清水平與IL28B基因型或快速病毒學(xué)應(yīng)答(RVR)聯(lián)合應(yīng)用,能夠顯著提高對(duì)SVR的預(yù)測性能,陽性預(yù)測值分別可以達(dá)到96.15%和95.24%,陰性預(yù)測值分別為50%和50%。結(jié)論：HCV基因1型患者IP-10基線血清水平顯著高于2型患者,其可能參與干擾素拮抗的分子機(jī)制;P-10作為SVR的獨(dú)立預(yù)測指標(biāo),其與IL28B基因型和RVR的聯(lián)用,均能顯著提高SVR預(yù)測的準(zhǔn)確性。
【關(guān)鍵詞】：microRNA-122 慢性丙型肝炎 肝臟炎癥 干擾素 病毒學(xué)應(yīng)答 IP-10 慢性丙型肝炎 基因型 病毒學(xué)應(yīng)答 白介素28B
【學(xué)位授予單位】：中國疾病預(yù)防控制中心
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R512.63
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 縮略語表12-14
• 引言14-16
• 第一部分 丙型肝炎干擾素抗病毒療效預(yù)測microRNA血清標(biāo)志物的篩選研究16-45
• 材料和方法16-28
• 結(jié)果28-35
• 結(jié)論和討論35-41
• 參考文獻(xiàn)41-45
• 第二部分 IP-10血清水平在丙型肝炎病毒基因1型和2型患者之間的差異及其對(duì)干擾素抗病毒療效的預(yù)測價(jià)值45-81
• 材料與方法45-63
• 結(jié)果63-73
• 結(jié)論和討論73-77
• 參考文獻(xiàn)77-81
• 綜述 蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)在丙型肝炎研究領(lǐng)域的進(jìn)展81-99
• 參考文獻(xiàn)95-99
• 個(gè)人簡歷99-100
• 致謝100

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本文編號(hào)：876587