本文關(guān)鍵詞：天津地區(qū)HEV動(dòng)物宿主及其基因型的研究

  更多相關(guān)文章： 戊型肝炎病毒 動(dòng)物宿主 基因型 基因亞型 戊型肝炎病毒抗體

【摘要】：目的1.選擇天津市不同區(qū)縣的豬、牛、羊、兔和狗作為研究對(duì)象,調(diào)查這些與人類生活密切相關(guān)的動(dòng)物血清中HEV抗體的流行情況;2.對(duì)采集的動(dòng)物糞便標(biāo)本進(jìn)行RNA檢測,并對(duì)檢出的動(dòng)物HEV RNA進(jìn)行基因型和亞型分析,從而對(duì)動(dòng)物HEV與人類的HEV流行和傳播的相關(guān)性進(jìn)行進(jìn)一步闡釋。方法1.在天津市武清區(qū)和寶坻區(qū)屠宰廠收集豬血液標(biāo)本202份,牛血液標(biāo)本97份,羊血液標(biāo)本163份,武清區(qū)、寶坻區(qū)和西青區(qū)三個(gè)農(nóng)貿(mào)市場收集兔血液標(biāo)本78份,北辰區(qū)和西青區(qū)寵物醫(yī)院收集狗血液標(biāo)本188份,每份標(biāo)本1-2ml。所有標(biāo)本均低溫保存迅速運(yùn)送到實(shí)驗(yàn)室,分離血清,-20℃冷凍保存?zhèn)錂z。使用北京萬泰生物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的雙抗原夾心酶聯(lián)免疫檢測試劑盒檢測動(dòng)物血清標(biāo)本中抗-HEV Ig G抗體。2.將天津市武清區(qū)和寶坻區(qū)屠宰廠收集的202份豬血液標(biāo)本,78份兔血液標(biāo)本,使用戊型肝炎病毒Ig G抗體診斷試劑盒(上海B公司)進(jìn)行二次檢測,將檢測結(jié)果與北京A公司生產(chǎn)的雙抗原夾心酶聯(lián)免疫檢測試劑的檢測結(jié)果進(jìn)行比較。3.對(duì)天津市武清區(qū)、西青區(qū)和寶坻區(qū)收集到的60份豬糞便標(biāo)本、50份兔糞便標(biāo)本、50例狗糞便標(biāo)本進(jìn)行HEV RNA檢測。用逆轉(zhuǎn)錄巢式PCR(RT-n PCR)檢測戊型肝炎病毒核糖核酸(HEV RNA),并對(duì)PCR陽性擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行克隆測序(北京諾賽基因組研究中心有限公司),用Bioeditv7.0.9和MEGA 6.0軟件按目前新的分型方法所選用的參考序列進(jìn)行核苷酸序列相似性比較和生物進(jìn)化樹分析。結(jié)果1.天津地區(qū)屠宰場豬血清中抗-HEV陽性率為77.2%(156/202);牛血清中抗-HEV陽性率為7.2%(7/97);羊血清中抗-HEV陽性率為6.1%(10/163);兔血清中抗-HEV陽性率為16.6%(13/78);狗血清中抗-HEV陽性率為18.6%(35/188),其中流浪狗血清中抗-HEV陽性率為33.7%(29/86),寵物狗血清中抗-HEV陽性率僅為5.9%(6/102);總體陽性率為30.3%(見表1);流浪狗血清抗體水平為2.67±1.23,寵物狗血清中抗體水平為0.58±0.39,兩組數(shù)據(jù)存在顯著差異(P0.05)。2.上海B公司生產(chǎn)的戊型肝炎病毒Ig G抗體診斷試劑盒陽性率低于北京A公司生產(chǎn)的抗-HEV抗體檢測試劑盒,兩種試劑符合率為95.7%(268/280)(表4),檢測結(jié)果具有一致性。3.天津地區(qū)豬糞便標(biāo)本的HEV RNA陽性率為6.7%(4/60),陽性標(biāo)本分別命名為sw-tj11、sw-tj17、sw-tj46、sw-tj48。其中sw-tj11與4g亞型相似性最高,sw-tj17與4a亞型相似度最高,sw-tj46、sw-tj48與4d亞型相似度最高,這兩株之間相似度為99%,應(yīng)該為同一病毒株感染;兔糞便標(biāo)本的HEV RNA陽性率為4%(2/50),陽性標(biāo)本分別命名為R-tj3、R-tj9,與基因3型的參考序列相似度為74%-90%,屬于基因3型;50例狗糞便懸液HEV RNA檢測結(jié)果全部為陰性。結(jié)論1.本次調(diào)查研究結(jié)果顯示天津地區(qū)與人密切接觸的五種動(dòng)物總體抗HEV Ig G抗體陽性率為30.3%(221/728),五種動(dòng)物均存在HEV的感染,且豬、狗、兔的自然感染比例較高,但人與這些動(dòng)物密切接觸是否會(huì)感染HEV需要進(jìn)一步研究。2.調(diào)查結(jié)果顯示流浪狗血清中抗HEV-Ig G抗體水平與寵物狗抗HEV-Ig G抗體水平存在顯著差異,流浪狗HEV傳播情況明顯要比寵物狗嚴(yán)重。3.北京A公司的試劑盒陽性率略高于上海B公司的試劑盒,兩種試劑具有良好的符合率。4.天津地區(qū)存在基因4型豬HEV流行和基因3型兔HEV流行。
【關(guān)鍵詞】：戊型肝炎病毒 動(dòng)物宿主 基因型 基因亞型 戊型肝炎病毒抗體
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S852.65;R512.6
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語10-11
• 前言11-14
• 研究現(xiàn)狀、成果11-13
• 研究目的、方法13-14
• 一、天津5種潛在HEV動(dòng)物宿主抗體檢測14-19
• 1.1 對(duì)象和方法14-16
• 1.1.1 標(biāo)本本源14
• 1.1.2 試劑14
• 1.1.3 儀器設(shè)備14
• 1.1.4 檢測方法14-16
• 1.2 結(jié)果16
• 1.3 討論16-19
• 二、兩種抗-HEV抗體檢測試劑性能比較19-24
• 2.1 對(duì)象與方法19-21
• 2.1.1 試劑19
• 2.1.2 儀器設(shè)備19
• 2.1.3 檢測方法19-21
• 2.2 結(jié)果21-22
• 2.3 討論22-24
• 三、天津地區(qū)豬、兔、狗的HEV RNA檢測24-39
• 3.1 對(duì)象和方法24-30
• 3.1.1 標(biāo)本來源24
• 3.1.2 試劑來源及溶液配置24-25
• 3.1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器及生產(chǎn)廠家25
• 3.1.4 PCR引物設(shè)計(jì)25-26
• 3.1.5 糞便懸液制26
• 3.1.6 HEV RNA提取26-27
• 3.1.7 HEV RNA檢測27-28
• 3.1.8 PCR產(chǎn)物的克隆、轉(zhuǎn)化及測序28-29
• 3.1.9 基因序列分析及進(jìn)化分析29-30
• 3.2 結(jié)果30-34
• 3.2.1 天津狗糞便懸液HEV RNA檢測30
• 3.2.2 天津兔糞便懸液HEV RNA檢測30-31
• 3.2.3 天津豬糞便懸液HEV RNA檢測31-34
• 3.3 討論34-39
• 結(jié)論39-40
• 問題和展望40-41
• 參考文獻(xiàn)41-48
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明48-49
• 綜述 戊型肝炎病毒的研究進(jìn)展49-70
• 綜述參考文獻(xiàn)63-70
• 致謝70-71
• 個(gè)人簡歷71

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本文編號(hào)：870264