發(fā)布時間：2017-09-17 15:42

  本文關鍵詞：天津地區(qū)HEV動物宿主及其基因型的研究

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【摘要】：目的1.選擇天津市不同區(qū)縣的豬、牛、羊、兔和狗作為研究對象,調(diào)查這些與人類生活密切相關的動物血清中HEV抗體的流行情況;2.對采集的動物糞便標本進行RNA檢測,并對檢出的動物HEV RNA進行基因型和亞型分析,從而對動物HEV與人類的HEV流行和傳播的相關性進行進一步闡釋。方法1.在天津市武清區(qū)和寶坻區(qū)屠宰廠收集豬血液標本202份,牛血液標本97份,羊血液標本163份,武清區(qū)、寶坻區(qū)和西青區(qū)三個農(nóng)貿(mào)市場收集兔血液標本78份,北辰區(qū)和西青區(qū)寵物醫(yī)院收集狗血液標本188份,每份標本1-2ml。所有標本均低溫保存迅速運送到實驗室,分離血清,-20℃冷凍保存?zhèn)錂z。使用北京萬泰生物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的雙抗原夾心酶聯(lián)免疫檢測試劑盒檢測動物血清標本中抗-HEV Ig G抗體。2.將天津市武清區(qū)和寶坻區(qū)屠宰廠收集的202份豬血液標本,78份兔血液標本,使用戊型肝炎病毒Ig G抗體診斷試劑盒(上海B公司)進行二次檢測,將檢測結果與北京A公司生產(chǎn)的雙抗原夾心酶聯(lián)免疫檢測試劑的檢測結果進行比較。3.對天津市武清區(qū)、西青區(qū)和寶坻區(qū)收集到的60份豬糞便標本、50份兔糞便標本、50例狗糞便標本進行HEV RNA檢測。用逆轉(zhuǎn)錄巢式PCR(RT-n PCR)檢測戊型肝炎病毒核糖核酸(HEV RNA),并對PCR陽性擴增產(chǎn)物進行克隆測序(北京諾賽基因組研究中心有限公司),用Bioeditv7.0.9和MEGA 6.0軟件按目前新的分型方法所選用的參考序列進行核苷酸序列相似性比較和生物進化樹分析。結果1.天津地區(qū)屠宰場豬血清中抗-HEV陽性率為77.2%(156/202);牛血清中抗-HEV陽性率為7.2%(7/97);羊血清中抗-HEV陽性率為6.1%(10/163);兔血清中抗-HEV陽性率為16.6%(13/78);狗血清中抗-HEV陽性率為18.6%(35/188),其中流浪狗血清中抗-HEV陽性率為33.7%(29/86),寵物狗血清中抗-HEV陽性率僅為5.9%(6/102);總體陽性率為30.3%(見表1);流浪狗血清抗體水平為2.67±1.23,寵物狗血清中抗體水平為0.58±0.39,兩組數(shù)據(jù)存在顯著差異(P0.05)。2.上海B公司生產(chǎn)的戊型肝炎病毒Ig G抗體診斷試劑盒陽性率低于北京A公司生產(chǎn)的抗-HEV抗體檢測試劑盒,兩種試劑符合率為95.7%(268/280)(表4),檢測結果具有一致性。3.天津地區(qū)豬糞便標本的HEV RNA陽性率為6.7%(4/60),陽性標本分別命名為sw-tj11、sw-tj17、sw-tj46、sw-tj48。其中sw-tj11與4g亞型相似性最高,sw-tj17與4a亞型相似度最高,sw-tj46、sw-tj48與4d亞型相似度最高,這兩株之間相似度為99%,應該為同一病毒株感染;兔糞便標本的HEV RNA陽性率為4%(2/50),陽性標本分別命名為R-tj3、R-tj9,與基因3型的參考序列相似度為74%-90%,屬于基因3型;50例狗糞便懸液HEV RNA檢測結果全部為陰性。結論1.本次調(diào)查研究結果顯示天津地區(qū)與人密切接觸的五種動物總體抗HEV Ig G抗體陽性率為30.3%(221/728),五種動物均存在HEV的感染,且豬、狗、兔的自然感染比例較高,但人與這些動物密切接觸是否會感染HEV需要進一步研究。2.調(diào)查結果顯示流浪狗血清中抗HEV-Ig G抗體水平與寵物狗抗HEV-Ig G抗體水平存在顯著差異,流浪狗HEV傳播情況明顯要比寵物狗嚴重。3.北京A公司的試劑盒陽性率略高于上海B公司的試劑盒,兩種試劑具有良好的符合率。4.天津地區(qū)存在基因4型豬HEV流行和基因3型兔HEV流行。
【關鍵詞】：戊型肝炎病毒 動物宿主 基因型 基因亞型 戊型肝炎病毒抗體
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S852.65;R512.6
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語10-11
• 前言11-14
• 研究現(xiàn)狀、成果11-13
• 研究目的、方法13-14
• 一、天津5種潛在HEV動物宿主抗體檢測14-19
• 1.1 對象和方法14-16
• 1.1.1 標本本源14
• 1.1.2 試劑14
• 1.1.3 儀器設備14
• 1.1.4 檢測方法14-16
• 1.2 結果16
• 1.3 討論16-19
• 二、兩種抗-HEV抗體檢測試劑性能比較19-24
• 2.1 對象與方法19-21
• 2.1.1 試劑19
• 2.1.2 儀器設備19
• 2.1.3 檢測方法19-21
• 2.2 結果21-22
• 2.3 討論22-24
• 三、天津地區(qū)豬、兔、狗的HEV RNA檢測24-39
• 3.1 對象和方法24-30
• 3.1.1 標本來源24
• 3.1.2 試劑來源及溶液配置24-25
• 3.1.3 主要實驗儀器及生產(chǎn)廠家25
• 3.1.4 PCR引物設計25-26
• 3.1.5 糞便懸液制26
• 3.1.6 HEV RNA提取26-27
• 3.1.7 HEV RNA檢測27-28
• 3.1.8 PCR產(chǎn)物的克隆、轉(zhuǎn)化及測序28-29
• 3.1.9 基因序列分析及進化分析29-30
• 3.2 結果30-34
• 3.2.1 天津狗糞便懸液HEV RNA檢測30
• 3.2.2 天津兔糞便懸液HEV RNA檢測30-31
• 3.2.3 天津豬糞便懸液HEV RNA檢測31-34
• 3.3 討論34-39
• 結論39-40
• 問題和展望40-41
• 參考文獻41-48
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明48-49
• 綜述 戊型肝炎病毒的研究進展49-70
• 綜述參考文獻63-70
• 致謝70-71
• 個人簡歷71

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