本文關鍵詞：骨髓間充質干細胞移植治療潰瘍性結腸炎及復方苦參湯的協(xié)同作用研究

  更多相關文章： 全骨髓貼壁法 骨髓間充質干細胞 傳代 LV-GFP TNBS DAI 組織病理學 BMSCs 復方苦參湯 Treg NF-κB TNF-α

【摘要】：第一部分骨髓間充質干細胞的體外分離、培養(yǎng)及鑒定 目的：全骨髓貼壁法體外分離培養(yǎng)及鑒定大鼠骨髓間充質干細胞,為后續(xù)實驗打下基礎。 方法：取4周齡SD大鼠,體外分離培養(yǎng)骨髓間充質干細胞,經(jīng)連續(xù)傳代純化,流式細胞術進行鑒定。 結果：骨髓間充質干細胞呈成纖維細胞樣形態(tài),梭形或紡錘形,漩渦狀或輻射狀排列,P3代及以后的細胞形態(tài)均一,生長旺盛,無明顯衰老現(xiàn)象。BMSCs高表達CD29. CD90,而不表達造血干細胞的表面標記CD45, CD11b。 結論：全骨髓貼壁法體外分離培養(yǎng)的骨髓間充質干細胞形態(tài)均勻、狀態(tài)穩(wěn)定,純度高,形態(tài)學及流式細胞學鑒定符合間充質干細胞特點。 第二部分BMSCs移植治療潰瘍性結腸炎大鼠的實驗研究及復方苦參湯的干預 目的：BMSCs移植及復方苦參湯干預后,觀察實驗大鼠疾病活動指數(shù)(disease activity index, DAI),結腸病理組織學改變并評分。 方法：8周齡清潔級SD大鼠,采用2,4,6-三硝基苯磺酸(2,4,6-trinitrobenzene sulfonic acid, TNBS)構建潰瘍性結腸炎模型；慢病毒(Lentiviral Vector, LV)介導綠色熒光蛋白(Green Fluorescent Protein, GFP)轉染BMSCs;標記后的BMSCs于造模后進行移植,同時以復方苦參湯灌胃干預；免疫熒光組化及weston blot檢測結腸組織GFP表達,對各組大鼠進行疾病活動指數(shù)(DAI)評估,并觀察結腸組織病理學改變進行評分。 結果：1、BMSCs移植及復方苦參湯干預2w后,免疫熒光組化及weston blot顯示,BMSCs組和二聯(lián)組結腸炎性受損區(qū)可見GFP表達；2、與空白組相比,PBS組的DAI評分顯著上升,與PBS組相比,BMSCs組和二聯(lián)組能夠下降DAI分數(shù)(P0.05);3、與空白組相比,PBS組的組織病理學評分顯著增加,與PBS組相比,BMSCs組及二聯(lián)組的評分下降(P0.05)。 結論：BMSCs和復方苦參湯干預后結腸炎大鼠癥狀得到了明顯的緩解,結腸組織受損得到修復。 第三部分BMSCs治療潰瘍性結腸炎的免疫機制研究 目的：研究BMSCs治療潰瘍性結腸炎的相關免疫作用機制 方法：體外分離培養(yǎng)BMSCs,流式細胞術進行鑒定,LV-GFP轉染BMSCs進行標記,TNBS誘導潰瘍性結腸炎動物模型,實驗分為四組：空白組,PBS組,BMSCs組,BMSCs組+中藥組。PBS/BMSCs經(jīng)尾靜脈移植,BMSCs組+中藥組予復方苦參湯灌胃干預,流式細胞術檢測大鼠外周血Treg表達,ELISA檢測大鼠血清TNF-a表達,Western blot檢測細胞質及細胞核NF-κBp65表達,RT-PCR檢測大鼠腸黏膜Foxp3mRNA TNF-αmRNA的表達。 結果：1、和空白組相比,PBS組外周血Treg比率明顯下降;干預后,和PBS組相比,BMSCs和二聯(lián)組Treg比率上升(P0.05)。2、和空白組相比,PBS組Foxp3mRNA表達明顯上升;干預后,和PBS組相比,BMSCs和二聯(lián)組Foxp3mRNA表達下降(P0.05)。3、和空白組相比,PBS組胞質及胞核NF-k Bp65表達升高；干預后,和PBS組相比,BMSCs和二聯(lián)組胞質及胞核NF-k Bp65表達下降(P0.05)。4、和空白組相比,PBS組TNF-a表達升高；干預后,和PBS組相比,BMSCs和二聯(lián)組TNF-a表達明顯下降(P0.05)。 結論：BMSCs可以有效緩解潰瘍性結腸炎,機制可能與BMSCs重新調(diào)配外周血和腸黏膜之間的Γreg比例,以及調(diào)控NF-kB介導的促炎反應相關,同時復方苦參湯起到協(xié)同作用。
【關鍵詞】：全骨髓貼壁法 骨髓間充質干細胞 傳代 LV-GFP TNBS DAI 組織病理學 BMSCs 復方苦參湯 Treg NF-κB TNF-α
【學位授予單位】：華中科技大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R574.62
【目錄】：

• 英文縮略詞表8-11
• 研究背景11-13
• Background13-15
• 中文摘要15-18
• Abstract18-22
• 第一部分 BMSCs的體外分離、培養(yǎng)及鑒定22-35
• 前言22
• 材料和方法22-27
• 一、實驗材料22-24
• 二、實驗方法24-27
• 實驗結果27-29
• 一、骨髓間充質干細胞的形態(tài)學觀察27-28
• 二、骨髓間充質干細胞的流式鑒定28-29
• 討論29-32
• 參考文獻32-35
• 第二部分 BMSCs移植治療潰瘍性結腸炎大鼠的實驗研究及復方苦參湯的干預35-55
• 前言35-36
• 材料和方法36-44
• 一、實驗材料36-37
• 二、實驗方法37-44
• 實驗結果44-48
• 一、動物模型評估及DAI評分44-45
• 二、追蹤體內(nèi)干細胞45-46
• 三、組織病理學觀察46-47
• 四、組織病理學評分47-48
• 討論48-51
• 參考文獻51-55
• 第三部分 BMSCs治療潰瘍性結腸炎的免疫機制研究55-82
• 前言55
• 材料和方法55-65
• 一、實驗材料55-57
• 二、實驗方法57-65
• 實驗結果65-70
• 一、實驗大鼠外周血CD4~+D25~+Foxp3~+Treg細胞表達65-67
• 二、大鼠血清TNF-Q表達67-68
• 三、細胞質及細胞核NF-κ Bp65表達68-69
• 四、實驗大鼠結腸黏膜Foxp3、TNF-α mRNA表達69-70
• 討論70-76
• 參考文獻76-82
• 綜述82-90
• 參考文獻86-90
• 附件一 攻讀學位期間發(fā)表論文90-91
• 附件二 攻讀學位期間參與科研課題91-92
• 致謝92

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本文編號：857537