本文關(guān)鍵詞：�；切苋パ跄懰崧�(lián)合柳氮磺胺吡啶對小鼠結(jié)腸炎模型的藥效作用及機(jī)制

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【摘要】：研究背景及目的潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis,UC)作為炎癥性腸病的一種,病變深度主要限于結(jié)腸黏膜與黏膜下層,表現(xiàn)出許多免疫學(xué)疾病特征。主要臨床表現(xiàn)為反復(fù)發(fā)作的腹痛、腹瀉、粘液膿血便,有進(jìn)展為結(jié)直腸癌的風(fēng)險。其發(fā)病機(jī)制尚未明確,多數(shù)學(xué)者認(rèn)為與遺傳、炎癥、免疫、和環(huán)境等因素相關(guān)。治療藥物主要有氨基水楊酸制劑、糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑及生物制劑。然而這些藥物不良反應(yīng)多,使臨床應(yīng)用受到限制。�；切苋パ跄懰�(tauroursodeoxycholic acid,TUDCA)是一種天然結(jié)合型膽汁酸,主要成分為熊去氧膽酸,可用于原發(fā)性膽汁性肝硬化和原發(fā)性硬化性膽管炎的治療。近年來體內(nèi)及體外研究均顯示,其與熊去氧膽酸相比具有更強(qiáng)的細(xì)胞保護(hù)及抗炎作用,許多學(xué)者推薦做為UC新的治療選擇。尾型同源盒轉(zhuǎn)錄因子2(caudal-related homeodomain transcription 2,Cdx2)是一種調(diào)控腸上皮細(xì)胞分化和增殖的基本核轉(zhuǎn)錄因子。Cdx2主要表達(dá)于小腸和結(jié)腸的腺窩絨毛上皮,尤其在分化的腸上皮細(xì)胞中。Notch信號通路是一種通過相鄰細(xì)胞間相互作用而影響細(xì)胞命運(yùn)的高度保守的傳導(dǎo)系統(tǒng),主要由Notch受體、相應(yīng)配體(DSL蛋白)、CSL DNA結(jié)合蛋白三部分組成,幾乎存在于各種動物中,在調(diào)節(jié)細(xì)胞分化,增殖和凋亡,及一系列病理、生理過程中都起重要作用,發(fā)狀分裂相關(guān)增強(qiáng)子-1(hairy enhancer of split 1,Hes1)是Notch信號通路下游的關(guān)鍵靶基因。Notch信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中關(guān)鍵基因的異常表達(dá)與肝病、腫瘤、神經(jīng)系統(tǒng)疾病、先天性發(fā)育異常、炎癥性腸病等疾病有密切關(guān)系。葡聚糖硫酸鈉(dextran sulfate sodiam,DSS)是一種由蔗糖合成的硫酸多糖體,已成熟運(yùn)用于小鼠結(jié)腸炎模型的制備中。研究發(fā)現(xiàn)DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎無論從臨床表現(xiàn)還是病理組織學(xué)均與人類UC尤為相似,目前用于UC的研究模型已經(jīng)得到廣泛認(rèn)可。國內(nèi)尚無TUDCA治療UC動物實驗的研究,國外近年來有個別報道,但無TUDCA和SASP治療小鼠實驗結(jié)腸炎的對比研究,本課題主要目的是研究TUDCA與SASP干預(yù)結(jié)腸炎模型的效果比較,了解聯(lián)合用藥是否具有協(xié)同作用,初步探討tudca干預(yù)結(jié)腸炎模型的可能機(jī)制。研究方法1、構(gòu)建小鼠結(jié)腸炎模型:50只雄性balb/c小鼠隨機(jī)分為5組,每組10只。分為正常組、模型組、sasp(500mg/kg)組、tudca(100mg/kg)組、tudca/sasp聯(lián)合組。除正常組外,其余組小鼠自由飲用5%dss溶液,7d建立小鼠結(jié)腸炎模型。2、小鼠一般情況觀察及dai評分:觀察小鼠一般狀態(tài),根據(jù)每日體重變化、糞便性狀及潛血情況計算dai評分。3、炎癥因子的檢測:眼眶后靜脈采集血標(biāo)本后,采用elisa試劑盒測定tnf-α、il-6的濃度,吸光值在酶標(biāo)儀中測定,濃度值由吸光值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計算得到。4、病理組織學(xué)積分:處死小鼠后測量每只小鼠的結(jié)腸長度,剪去部分結(jié)腸進(jìn)行固定、切片、he染色后鏡下檢查,根據(jù)炎癥、病變深度、隱窩破壞及病變范圍來表示組織學(xué)損傷程度。5、結(jié)腸組織相關(guān)蛋白檢測:采用免疫組化sp法檢測結(jié)腸組織hes1、atoh1、cdx2的表達(dá)情況,計算機(jī)軟件圖像分析系統(tǒng)分析相關(guān)蛋白表達(dá)量。研究結(jié)果1、tudca、sasp、tudca/sasp組均可有效緩解小鼠實驗性結(jié)腸炎的臨床癥狀,減少dai評分,減輕結(jié)腸長度縮短,其中tudca/sasp組效果最好,tudca組與sasp組療效相當(dāng);病理組織學(xué)顯示各藥物干預(yù)組可明顯改善結(jié)腸炎模型的炎性細(xì)胞浸潤、腺體和隱窩破壞、杯狀細(xì)胞減少,其中tudca/sasp組炎癥損傷最輕,tudca與sasp組病理損傷評分比較無統(tǒng)計學(xué)差異。2、elisa檢測顯示tudca組、sasp組、tudca/sasp組均可抑制結(jié)腸炎小鼠血清中升高的tnf-α、il-6蛋白表達(dá)。免疫組化檢測結(jié)腸組織hes1、atoh1及cdx2表達(dá)顯示,tudca能增加atoh1、cdx2表達(dá)量,抑制hes1的表達(dá)。這些可能是tudca抗炎作用的機(jī)制。結(jié)論TUDCA、SASP、TUDCA/SASP均可顯著減輕DSS誘導(dǎo)小鼠結(jié)腸炎模型的嚴(yán)重程度,TUDCA/SASP的預(yù)防作用可能優(yōu)于TUDCA和SASP,TUDCA和SASP在干預(yù)小鼠結(jié)腸炎病程中無論從臨床表現(xiàn),還是病理組織學(xué)積分,均表現(xiàn)出相似效果,兩者藥效無明顯區(qū)別。TUDCA干預(yù)小鼠結(jié)腸炎發(fā)生的機(jī)制可能與抑制炎癥因子表達(dá),減少結(jié)腸組織Hes1蛋白激活、增加Cdx2蛋白表達(dá)有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：�；切苋パ跄懰� 實驗性結(jié)腸炎 發(fā)狀分裂相關(guān)增強(qiáng)子-1 尾型同源盒轉(zhuǎn)錄因子-2 炎癥因子
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R574.62
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 中英文縮略詞表13-15
• 前言15-17
• 第一部分 牛磺熊去氧膽酸聯(lián)合柳氮磺胺吡啶對小鼠實驗性結(jié)腸炎的藥效作用17-35
• 材料和方法18-26
• 結(jié)果26-31
• 討論31-33
• 參考文獻(xiàn)33-35
• 第二部分 �；切苋パ跄懰釋Y(jié)腸炎小鼠血清炎癥因子和結(jié)腸相關(guān)蛋白表達(dá)的影響和可能機(jī)制35-52
• 材料和方法36-42
• 結(jié)果42-47
• 討論47-50
• 參考文獻(xiàn)50-52
• 本文總結(jié)52-54
• 文獻(xiàn)綜述54-65
• 參考文獻(xiàn)60-65
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文65-66
• 致謝66

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：846606