本文關(guān)鍵詞：IBD疾病特異與療效監(jiān)測(cè)血清標(biāo)志物的蛋白質(zhì)組學(xué)篩選初探

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【摘要】：研究背景和目的炎性腸病(Inflammatory Bowel Disease, IBD)是一種慢性腸道炎癥性疾病,包括克羅恩病(Crohn's Disease, CD)和潰瘍性結(jié)腸炎(Ulcerative Colitis, UC),臨床表現(xiàn)為反復(fù)發(fā)作的腹痛、腹瀉、粘液血便等,嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量。目前臨床上尚無(wú)廣泛使用且高效的疾病診斷的血清標(biāo)記物。糖皮質(zhì)激素(簡(jiǎn)稱激素)通常能夠顯著抑制炎癥,迅速緩解癥狀,但因其不良反應(yīng)及其無(wú)法維持疾病緩解,故難以長(zhǎng)期使用。同時(shí)部分患者存在激素依賴或激素抵抗,因而尋找激素療效預(yù)測(cè)指標(biāo)有著重大的臨床意義。近年來(lái),應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)方法尋找臨床標(biāo)志物已經(jīng)成為蛋白質(zhì)組學(xué)的核心應(yīng)用之一。2014年李智立教授課題組使用Native-PAGE、SDS-PAGE和MALDI-FTICR MS方法發(fā)現(xiàn)并證實(shí)了新型循環(huán)免疫炎癥相關(guān)蛋白復(fù)合物(Immunoinflammation-Related Protein Complexes, IIRPCs)能夠作為診斷癌癥的個(gè)體化生物標(biāo)志物。本研究擬在以上研究的基礎(chǔ)上,使用Native-PAGE、SDS-PAGE和MALDI-FTICR MS方法尋找IBD特異的血清蛋白標(biāo)志物,幫助疾病診斷,并通過對(duì)比激素治療前后IBD患者血清蛋白差異,尋找IBD激素治療敏感性和療效預(yù)測(cè)指標(biāo)。第一部分IBD疾病特異血清蛋白標(biāo)志物的蛋白質(zhì)組學(xué)篩選方法：對(duì)65例健康對(duì)照、57例結(jié)直腸癌、69例UC和67例CD患者血清行Native-PAGE,基于IIRPCs對(duì)患者血清進(jìn)行分類,使用Quantity One軟件對(duì)IIRPCs進(jìn)行定量。使用SDS-PAGE對(duì)IIRPCs進(jìn)一步分離,并用質(zhì)譜鑒定IIRPCs包含的主要蛋白種類。結(jié)果：根據(jù)血清IIRPCs的條帶數(shù)目和位置,所有樣本可分為a、b、c和其他類型,以a、b型較為常見。其中a型包括a1、a2、a3、a4,4個(gè)IIRPCs,b型包括b1、b2、b3、b4、b5,5個(gè)IIRPCs,c型為空白型,不含IIRPCs。UC、CD和結(jié)直腸癌患者IIRPCs水平較健康人明顯升高(p0.05),且IBD患者IIRPCs水平高于結(jié)直腸癌患者(a2、a3、a4、b3、b4,p0.05),而UC與CD患者間IIRPCs水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。活動(dòng)期UC患者血清URPCs水平高于緩解期患者(中度活動(dòng)期b2、b4、b5,p0.05；重度活動(dòng)期a3、b2、b5,p0.05)�；顒�(dòng)期CD患者血清IIRPCs水平較緩解期升高,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。a3與ESR Pearson相關(guān)系數(shù)0.576,p值0.001;a3與hsCRP Pearson相關(guān)系數(shù)0.392,p=0.020；b4與ESR Pearson相關(guān)系數(shù)0.426,p=0.027；b4與hsCRP Pearson相關(guān)系數(shù)0.375,p=0.054。初步質(zhì)譜鑒定結(jié)果表明,血清ⅡRPCs的主要組分為IgG1、IgA1、觸珠蛋白、補(bǔ)體C3、補(bǔ)體C4A、補(bǔ)體因子H等。結(jié)論：1. 可利用簡(jiǎn)單的Native-PAGE方法,分離疾病相關(guān)的血清ⅡRPCs。并基于血清IRPCs的類型,IBD樣本可分為四類：類型a、b、c和其他類型,以a、b型較為常見。2. 血清ⅡRPCs的主要組分為IgG1、IgA1、觸珠蛋白、補(bǔ)體C3、補(bǔ)體C4A、補(bǔ)體因子H等。這些蛋白質(zhì)是一些與免疫系統(tǒng)、炎癥系統(tǒng)和補(bǔ)體系統(tǒng)相關(guān)的蛋白質(zhì)。3. UC、CD患者ⅡRPCs水平較健康人明顯升高,ⅡRPCs對(duì)于IBD的診斷具有極高的靈敏度。活動(dòng)期UC、CD患者ⅡRPCs水平較緩解期升高,提示ⅡRPCs水平可作為疾病活動(dòng)度評(píng)估指標(biāo)且與臨床常用炎癥指標(biāo)如血沉、超敏C反應(yīng)蛋白具有一定的正相關(guān)性。4. IBD患者ⅡRPCs水平高于結(jié)直腸癌患者。ⅡRPCs對(duì)于IBD和結(jié)直腸癌有一定的鑒別診斷能力,但無(wú)法鑒別UC和CD患者。第二部分IBD激素療效預(yù)測(cè)血清蛋白標(biāo)志物的蛋白質(zhì)組學(xué)篩選方法：對(duì)45組IBD患者激素治療前后的血清標(biāo)本行Native-PAGE,對(duì)比激素治療前后血清蛋白差異,結(jié)合臨床資料分析激素療效預(yù)測(cè)指標(biāo)。結(jié)果：與治療前相比,激素治療第1天、第7天、第14天血清IIRPCs濃度變化趨勢(shì)基本一致,且每種血清類型各條帶濃度變化趨勢(shì)基本一致。根據(jù)IIRPCs濃度變化趨勢(shì)分為上升趨勢(shì)組和下降趨勢(shì)組,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明,上升趨勢(shì)組和下降趨勢(shì)組IIRPCs水平均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。結(jié)合臨床資料分析表明,上升趨勢(shì)組和下降趨勢(shì)組治療前HGB水平和治療前IIRPCs水平(a4、b5)存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。對(duì)21例激素有效和7例激素?zé)o效UC患者進(jìn)行分析,結(jié)果表明兩組間白蛋白水平和CMV感染率存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。由于激素?zé)o效組僅2例收集到治療后時(shí)間點(diǎn)血標(biāo)本,暫無(wú)法分析激素療效與IIRPCs水平變化趨勢(shì)間是否存在相關(guān)性。結(jié)論：IBD患者在激素治療后IIRPCs呈兩種變化趨勢(shì)：上升趨勢(shì)和下降趨勢(shì)。上升趨勢(shì)組和下降趨勢(shì)組治療前HGB水平和治療前IIRPCs水平(a4、b5)存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
【關(guān)鍵詞】：蛋白質(zhì)組學(xué) 聚丙烯酰氨凝膠電泳 免疫炎癥相關(guān)蛋白復(fù)合物 診斷標(biāo)志物 活動(dòng)度 炎性腸病 激素抵抗 預(yù)測(cè)因素 白蛋白水平 CMV感染
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R574
【目錄】：

• 縮略詞表5-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-13
• 第一部分 IBD疾病特異血清標(biāo)志物的蛋白質(zhì)組學(xué)篩選13-52
• 前言13-15
• 實(shí)驗(yàn)材料15-18
• 實(shí)驗(yàn)方法18-23
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果23-48
• 討論48-51
• 第一部分結(jié)論51-52
• 第二部分 IBD激素療效預(yù)測(cè)血清標(biāo)志物的蛋白質(zhì)組學(xué)篩選初探52-62
• 前言52-53
• 實(shí)驗(yàn)材料與方法53-54
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果54-59
• 討論59-61
• 第二部分結(jié)論61-62
• 參考文獻(xiàn)62-65
• 綜述65-72
• 參考文獻(xiàn)69-72
• 致謝72-73

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1 李學(xué)軍;藥物蛋白質(zhì)組學(xué)與藥物發(fā)現(xiàn)[J];生理科學(xué)進(jìn)展;2002年03期

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6 張國(guó)林;陳子s，

本文編號(hào)：842712