本文關鍵詞：Th17細胞及其相關細胞因子與慢性HBV感染疾病進展的相關研究

  更多相關文章： HBV 肝硬化 Th17 IL-17 IL-21 IL-22 IL-23 干細胞

【摘要】：【背景】慢性乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus,HBV)感染嚴重威脅人類健康。目前認為,宿主免疫調(diào)控紊亂是導致HBV感染慢性化的重要原因,并與疾病進展密切相關。T細胞亞群及其細胞因子在維持機體免疫平衡中起著重要作用。T細胞亞群通常包括Th1、Th2、Th17、Treg等,其中Th17主要參與機體的促炎反應。IL-23是促進幼稚輔助性T細胞向Th17分化的關鍵因子,成熟后的Th17細胞通過產(chǎn)生IL-17、IL-21、IL-22等細胞因子發(fā)揮免疫調(diào)控作用。大量研究表明,Th17及其相關細胞因子參與了多種肝臟疾病的發(fā)生發(fā)展。本課題組長期致力于慢性肝病的綜合防治。我們前期研究發(fā)現(xiàn):IL-17在乙肝肝硬化失代償期患者外周血中顯著升高;患者接受自體外周血干細胞移植治療后,隨著肝功能的逐漸恢復,外周血IL-17水平也顯著降低。進一步的動物實驗表明:外源性IL-17能夠加重CCl4誘導的肝損傷,利用單克隆抗體中和IL-17可有效減輕肝損傷;干細胞治療可有效減輕動物肝損傷,外源性IL-17能夠在一定程度上抵消干細胞的治療效應。由此提示,IL-17在肝臟損傷及修復中起著重要的調(diào)控作用。由于IL-17主要由Th17產(chǎn)生,那么,Th17及其其他相關細胞因子(包括IL-23、IL-21、IL-22等)在慢性乙型病毒性肝病進展過程起什么作用?自體外周血干細胞治療能否影響Th17以及IL-23、IL-21、IL-22等細胞因子?查閱文獻尚未見相關研究報道�！灸康摹�1.明確Th17及其相關細胞因子在慢性乙型病毒性肝病進展中的變化;2.探討自體外周血干細胞治療對乙肝肝硬化失代償期患者外周血Th17及其相關細胞因子的影響。【方法】1.研究對象本研究方案經(jīng)過我院倫理委員審核并批準。課題分兩部分進行,所有對象均簽署知情同意書。第一部分研究對象,包括健康志愿者、慢性乙型病毒性肝炎患者、乙肝肝硬化代償期患者和失代償期患者各50例。慢性乙型病毒性肝炎和乙肝肝硬化的診斷符合我國《病毒性肝炎防治方案》和《慢性乙型肝炎防治指南》診斷標準。第二部分研究對象,符合乙肝失代償期肝硬化診斷標準、自愿在我科接受自體外周血干細胞移植治療的20例患者。所有患者均隨訪至少1年,均有完整的基線資料和隨訪資料。2.實驗樣本對第一部分研究對象,采集其空腹狀態(tài)時的外周血20ml。對第二部分研究對象,分別采集其接受干細胞治療前及治療后3月、6月和12月的外周血,每次20ml。所采集的血液樣品置于肝素抗凝管中,即刻低速離心分離血細胞和血漿。所獲血漿樣品于液氮中快速冷凍后保存于-80℃?zhèn)溆�。血細胞�?jīng)淋巴細胞分離液分離,收獲其中的單個核細胞,經(jīng)程序化冷凍后保存于液氮備用。3.檢測方法細胞因子檢測:采用商品化ELISA試劑盒,按照說明書提供的方法檢測血漿樣本中的IL-17、IL-21、IL-22、IL-23。T細胞亞群檢測:將凍存的單個核細胞解凍后置于培養(yǎng)板中,以PMA、Ionomycin和Monensin對細胞進行處理;以CD4、IL-17、IL-22、IFN-γ對細胞進行多重標記,并借助流式細胞儀分析Th17和Th22百分數(shù)。4.統(tǒng)計學分析借助SPSS 17.0軟件進行。計數(shù)資料以均數(shù)±標準差表示,兩組間比較采用t檢驗;計量資料采用Kruskal-Wallis H檢驗。p0.05為有統(tǒng)計學意義。【結(jié)果】1.與健康志愿者相比,慢性乙型病毒性肝炎患者和乙肝肝硬化患者外周血IL-17、IL-21、IL-22、IL-23水平均顯著升高。并且,乙肝肝硬化患者外周血四種細胞因子的水平顯著高于慢性乙型病毒性肝炎患者,乙肝肝硬化失代償期患者四種細胞因子顯著高于代償期患者,差異均有統(tǒng)計學意義。2.與健康志愿者相比,慢性乙型病毒性肝炎患者和乙肝肝硬化患者外周血Th17和Th22百分數(shù)均顯著升高。并且,乙肝肝硬化患者外周血Th17和Th22百分數(shù)顯著高于慢性乙型病毒性肝炎患者,乙肝肝硬化失代償期患者Th17和Th22百分數(shù)顯著高于代償期患者,差異均有統(tǒng)計學意義。3.隨訪分析表明,在接受自體外周血干細胞治療3個月后,乙肝失代償期肝硬化患者的肝功能指標(包括血漿白蛋白、轉(zhuǎn)氨酶、總膽紅素和MELD評分等)逐漸恢復正常。4.在接受自體外周血干細胞治療3個月后,患者外周血IL-17、IL-21、IL-22、IL-23的水平逐漸降低,在治療后6月時達到最低,與治療前相比差異顯著。并且,患者的IL-23水平與IL-17、IL-21、IL-22水平之間具有顯著的正相關性。【結(jié)論】慢性乙型病毒感染后,隨著疾病的進展,外周血Th17及其相關四種細胞因子均呈逐漸增高趨勢;自體外周血干細胞治療能夠顯著改善乙肝肝硬化失代償期患者的肝功能,患者的外周血Th17及其相關細胞因子水平也隨之顯著降低。上述結(jié)果提示,Th17及其相關細胞因子可能在慢性乙型病毒性肝病發(fā)展過程中起著重要的促進作用,自體外周血干細胞移植有可能通過下調(diào)Th17及其相關細胞因子水平而促進乙肝肝硬化患者肝功能的恢復。
【關鍵詞】：HBV 肝硬化 Th17 IL-17 IL-21 IL-22 IL-23 干細胞
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R575.2
【目錄】：

• 縮略語表5-8
• 中文摘要8-11
• ABSTRACT11-15
• 前言15-17
• 文獻回顧17-30
• 第一部分 Th17細胞及相關細胞因子在慢性HBV感染病程中變化的研究30-45
• 1 材料30-33
• 1.1 研究對象30-31
• 1.2 生化試劑與材料31-32
• 1.3 主要儀器32-33
• 1.4 主要試劑配制33
• 2 方法33-36
• 2.1 血漿采集與保存33-34
• 2.2 ELISA檢測IL-17、IL-21、IL-22、IL-23濃度34-35
• 2.3 外周血單個核細胞采集及保存35
• 2.4 細胞復蘇及培養(yǎng)、刺激35-36
• 2.5 流式細胞術檢測Th17、Th22百分比36
• 2.6 統(tǒng)計學處理36
• 3 結(jié)果36-43
• 3.1 研究對象一般臨床資料36-37
• 3.2 外周血IL-17、IL-21、IL-22、IL-23濃度檢測結(jié)果37-40
• 3.3 外周血Th17、Th22流式細胞術檢測結(jié)果40-43
• 4 討論43-45
• 第二部分 乙肝肝硬化失代償患者干細胞治療后Th17細胞相關細胞因子變化的研究45-54
• 1 材料45-47
• 1.1 研究對象45-46
• 1.2 生化試劑與材料46
• 1.3 主要儀器46-47
• 2 方法47-48
• 2.1 自體外周血干細胞移植47
• 2.2 隨訪47
• 2.3 血漿的采集和保存47-48
• 2.4 ELISA檢測IL-17、IL-21、IL-22、IL-23濃度48
• 2.5 統(tǒng)計學處理48
• 3 結(jié)果48-52
• 3.1 患者干細胞移植前后各時間點多種臨床指標的變化趨勢48-49
• 3.2 患者干細胞移植前后各時間點外周血IL-17、IL-21、IL-22、IL-23濃度的檢測結(jié)果49-51
• 3.3 IL-23分別與IL-17、IL-21、IL-22之間的相關性分析51-52
• 4 討論52-54
• 小結(jié)54-55
• 參考文獻55-66
• 附錄66-67
• 個人簡歷和研究成果67-68
• 致謝68-69

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 Ying-Hua Niu;Dong-Lin Yin;Hong-Li Liu;Rui-Tian Yi;Yu-Cong Yang;Hong-An Xue;Tian-Yan Chen;Shu-Lin Zhang;Shu-Mei Lin;Ying-Ren Zhao;;Restoring the Treg cell to Th17 cell ratio may alleviate HBV-related acute-on-chronic liver failure[J];World Journal of Gastroenterology;2013年26期

2 于曉輝;李曉云;段惠春;趙夏平;王維;;恩替卡韋治療慢性乙型肝炎患者血清MIF、IL-17和IL-10的變化及臨床意義[J];肝臟;2014年03期

，

本文編號：841577