本文關(guān)鍵詞：Th17細(xì)胞及其相關(guān)細(xì)胞因子與慢性HBV感染疾病進(jìn)展的相關(guān)研究

  更多相關(guān)文章： HBV 肝硬化 Th17 IL-17 IL-21 IL-22 IL-23 干細(xì)胞

【摘要】：【背景】慢性乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus,HBV)感染嚴(yán)重威脅人類健康。目前認(rèn)為,宿主免疫調(diào)控紊亂是導(dǎo)致HBV感染慢性化的重要原因,并與疾病進(jìn)展密切相關(guān)。T細(xì)胞亞群及其細(xì)胞因子在維持機(jī)體免疫平衡中起著重要作用。T細(xì)胞亞群通常包括Th1、Th2、Th17、Treg等,其中Th17主要參與機(jī)體的促炎反應(yīng)。IL-23是促進(jìn)幼稚輔助性T細(xì)胞向Th17分化的關(guān)鍵因子,成熟后的Th17細(xì)胞通過(guò)產(chǎn)生IL-17、IL-21、IL-22等細(xì)胞因子發(fā)揮免疫調(diào)控作用。大量研究表明,Th17及其相關(guān)細(xì)胞因子參與了多種肝臟疾病的發(fā)生發(fā)展。本課題組長(zhǎng)期致力于慢性肝病的綜合防治。我們前期研究發(fā)現(xiàn):IL-17在乙肝肝硬化失代償期患者外周血中顯著升高;患者接受自體外周血干細(xì)胞移植治療后,隨著肝功能的逐漸恢復(fù),外周血IL-17水平也顯著降低。進(jìn)一步的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明:外源性IL-17能夠加重CCl4誘導(dǎo)的肝損傷,利用單克隆抗體中和IL-17可有效減輕肝損傷;干細(xì)胞治療可有效減輕動(dòng)物肝損傷,外源性IL-17能夠在一定程度上抵消干細(xì)胞的治療效應(yīng)。由此提示,IL-17在肝臟損傷及修復(fù)中起著重要的調(diào)控作用。由于IL-17主要由Th17產(chǎn)生,那么,Th17及其其他相關(guān)細(xì)胞因子(包括IL-23、IL-21、IL-22等)在慢性乙型病毒性肝病進(jìn)展過(guò)程起什么作用?自體外周血干細(xì)胞治療能否影響Th17以及IL-23、IL-21、IL-22等細(xì)胞因子?查閱文獻(xiàn)尚未見(jiàn)相關(guān)研究報(bào)道�！灸康摹�1.明確Th17及其相關(guān)細(xì)胞因子在慢性乙型病毒性肝病進(jìn)展中的變化;2.探討自體外周血干細(xì)胞治療對(duì)乙肝肝硬化失代償期患者外周血Th17及其相關(guān)細(xì)胞因子的影響�！痉椒ā�1.研究對(duì)象本研究方案經(jīng)過(guò)我院倫理委員審核并批準(zhǔn)。課題分兩部分進(jìn)行,所有對(duì)象均簽署知情同意書。第一部分研究對(duì)象,包括健康志愿者、慢性乙型病毒性肝炎患者、乙肝肝硬化代償期患者和失代償期患者各50例。慢性乙型病毒性肝炎和乙肝肝硬化的診斷符合我國(guó)《病毒性肝炎防治方案》和《慢性乙型肝炎防治指南》診斷標(biāo)準(zhǔn)。第二部分研究對(duì)象,符合乙肝失代償期肝硬化診斷標(biāo)準(zhǔn)、自愿在我科接受自體外周血干細(xì)胞移植治療的20例患者。所有患者均隨訪至少1年,均有完整的基線資料和隨訪資料。2.實(shí)驗(yàn)樣本對(duì)第一部分研究對(duì)象,采集其空腹?fàn)顟B(tài)時(shí)的外周血20ml。對(duì)第二部分研究對(duì)象,分別采集其接受干細(xì)胞治療前及治療后3月、6月和12月的外周血,每次20ml。所采集的血液樣品置于肝素抗凝管中,即刻低速離心分離血細(xì)胞和血漿。所獲血漿樣品于液氮中快速冷凍后保存于-80℃?zhèn)溆谩Ｑ?xì)胞經(jīng)淋巴細(xì)胞分離液分離,收獲其中的單個(gè)核細(xì)胞,經(jīng)程序化冷凍后保存于液氮備用。3.檢測(cè)方法細(xì)胞因子檢測(cè):采用商品化ELISA試劑盒,按照說(shuō)明書提供的方法檢測(cè)血漿樣本中的IL-17、IL-21、IL-22、IL-23。T細(xì)胞亞群檢測(cè):將凍存的單個(gè)核細(xì)胞解凍后置于培養(yǎng)板中,以PMA、Ionomycin和Monensin對(duì)細(xì)胞進(jìn)行處理;以CD4、IL-17、IL-22、IFN-γ對(duì)細(xì)胞進(jìn)行多重標(biāo)記,并借助流式細(xì)胞儀分析Th17和Th22百分?jǐn)?shù)。4.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析借助SPSS 17.0軟件進(jìn)行。計(jì)數(shù)資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,兩組間比較采用t檢驗(yàn);計(jì)量資料采用Kruskal-Wallis H檢驗(yàn)。p0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義�！窘Y(jié)果】1.與健康志愿者相比,慢性乙型病毒性肝炎患者和乙肝肝硬化患者外周血IL-17、IL-21、IL-22、IL-23水平均顯著升高。并且,乙肝肝硬化患者外周血四種細(xì)胞因子的水平顯著高于慢性乙型病毒性肝炎患者,乙肝肝硬化失代償期患者四種細(xì)胞因子顯著高于代償期患者,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2.與健康志愿者相比,慢性乙型病毒性肝炎患者和乙肝肝硬化患者外周血Th17和Th22百分?jǐn)?shù)均顯著升高。并且,乙肝肝硬化患者外周血Th17和Th22百分?jǐn)?shù)顯著高于慢性乙型病毒性肝炎患者,乙肝肝硬化失代償期患者Th17和Th22百分?jǐn)?shù)顯著高于代償期患者,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.隨訪分析表明,在接受自體外周血干細(xì)胞治療3個(gè)月后,乙肝失代償期肝硬化患者的肝功能指標(biāo)(包括血漿白蛋白、轉(zhuǎn)氨酶、總膽紅素和MELD評(píng)分等)逐漸恢復(fù)正常。4.在接受自體外周血干細(xì)胞治療3個(gè)月后,患者外周血IL-17、IL-21、IL-22、IL-23的水平逐漸降低,在治療后6月時(shí)達(dá)到最低,與治療前相比差異顯著。并且,患者的IL-23水平與IL-17、IL-21、IL-22水平之間具有顯著的正相關(guān)性�！窘Y(jié)論】慢性乙型病毒感染后,隨著疾病的進(jìn)展,外周血Th17及其相關(guān)四種細(xì)胞因子均呈逐漸增高趨勢(shì);自體外周血干細(xì)胞治療能夠顯著改善乙肝肝硬化失代償期患者的肝功能,患者的外周血Th17及其相關(guān)細(xì)胞因子水平也隨之顯著降低。上述結(jié)果提示,Th17及其相關(guān)細(xì)胞因子可能在慢性乙型病毒性肝病發(fā)展過(guò)程中起著重要的促進(jìn)作用,自體外周血干細(xì)胞移植有可能通過(guò)下調(diào)Th17及其相關(guān)細(xì)胞因子水平而促進(jìn)乙肝肝硬化患者肝功能的恢復(fù)。
【關(guān)鍵詞】：HBV 肝硬化 Th17 IL-17 IL-21 IL-22 IL-23 干細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R575.2
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)表5-8
• 中文摘要8-11
• ABSTRACT11-15
• 前言15-17
• 文獻(xiàn)回顧17-30
• 第一部分 Th17細(xì)胞及相關(guān)細(xì)胞因子在慢性HBV感染病程中變化的研究30-45
• 1 材料30-33
• 1.1 研究對(duì)象30-31
• 1.2 生化試劑與材料31-32
• 1.3 主要儀器32-33
• 1.4 主要試劑配制33
• 2 方法33-36
• 2.1 血漿采集與保存33-34
• 2.2 ELISA檢測(cè)IL-17、IL-21、IL-22、IL-23濃度34-35
• 2.3 外周血單個(gè)核細(xì)胞采集及保存35
• 2.4 細(xì)胞復(fù)蘇及培養(yǎng)、刺激35-36
• 2.5 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)Th17、Th22百分比36
• 2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理36
• 3 結(jié)果36-43
• 3.1 研究對(duì)象一般臨床資料36-37
• 3.2 外周血IL-17、IL-21、IL-22、IL-23濃度檢測(cè)結(jié)果37-40
• 3.3 外周血Th17、Th22流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果40-43
• 4 討論43-45
• 第二部分 乙肝肝硬化失代償患者干細(xì)胞治療后Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子變化的研究45-54
• 1 材料45-47
• 1.1 研究對(duì)象45-46
• 1.2 生化試劑與材料46
• 1.3 主要儀器46-47
• 2 方法47-48
• 2.1 自體外周血干細(xì)胞移植47
• 2.2 隨訪47
• 2.3 血漿的采集和保存47-48
• 2.4 ELISA檢測(cè)IL-17、IL-21、IL-22、IL-23濃度48
• 2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理48
• 3 結(jié)果48-52
• 3.1 患者干細(xì)胞移植前后各時(shí)間點(diǎn)多種臨床指標(biāo)的變化趨勢(shì)48-49
• 3.2 患者干細(xì)胞移植前后各時(shí)間點(diǎn)外周血IL-17、IL-21、IL-22、IL-23濃度的檢測(cè)結(jié)果49-51
• 3.3 IL-23分別與IL-17、IL-21、IL-22之間的相關(guān)性分析51-52
• 4 討論52-54
• 小結(jié)54-55
• 參考文獻(xiàn)55-66
• 附錄66-67
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷和研究成果67-68
• 致謝68-69

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

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2 于曉輝;李曉云;段惠春;趙夏平;王維;;恩替卡韋治療慢性乙型肝炎患者血清MIF、IL-17和IL-10的變化及臨床意義[J];肝臟;2014年03期

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本文編號(hào)：841577