發(fā)布時間：2017-09-12 03:26

  本文關(guān)鍵詞：SIRT6在潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病機制中的作用研究

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【摘要】：背景與目的 潰瘍性結(jié)腸炎(Ulcerative colitis, UC)是炎癥性腸病(Inflammatory bowel disease, IBD)的一種,以易感人群反復(fù)發(fā)作性腸道炎癥造成慢性腸黏膜損傷為主要特征。UC的發(fā)病原因和發(fā)病機理還不甚清楚。目前被廣泛接受的觀點認為UC的發(fā)生發(fā)展伴隨了腸上皮內(nèi)免疫應(yīng)答、黏膜屏障、代謝平衡等功能的改變或紊亂。SIRT6是NAD+依賴性第1II類組蛋白去乙酰化酶家族中的一個成員,可以通過對組蛋白及非組蛋白的去乙�；饔�,調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄和蛋白功能,參與調(diào)節(jié)體內(nèi)多種重要病理生理學(xué)過程,如糖代謝平衡、衰老、腫瘤和炎癥等。本研究的目的是(1)探究SIRT6在腸道內(nèi)的表達豐度及表達定位；(2)探究UC患者腸黏膜活檢組織及實驗性結(jié)腸炎模型小鼠結(jié)腸內(nèi)SIRT6表達是否發(fā)生改變；如果是,(3)探究SIRT6的表達改變是否在腸道炎癥及黏膜損傷中發(fā)揮了重要作用；(4)探究SIRT6在腸道炎癥及黏膜損傷中的作用機制。材料與方法 以DSS誘導(dǎo)實驗性結(jié)腸炎小鼠作為體內(nèi)實驗?zāi)Ｐ?正常成年小鼠結(jié)腸上皮(Young adult mouse colon, YAMC)細胞系作為體外實驗?zāi)Ｐ�。運用Cre-loxP系統(tǒng)通過小鼠雜交方法構(gòu)建腸上皮內(nèi)特異性SIRT6敲除動物模型。17例正常人腸道黏膜和15例UC患者腸道黏膜活檢標(biāo)本收集于北京協(xié)和醫(yī)院內(nèi)鏡中心。利用分子克隆技術(shù)構(gòu)建SIRT6過表達載體,建立YAMC細胞的SIRT6過表達模型。利用小干擾RNA技術(shù)實現(xiàn)YAMC細胞內(nèi)SIRT6敲低模型的建立。此外,免疫熒光染色被用以確定SIRT6的表達定位,qRT-PCR、Western blot、RNA-seq和MSD ELISA等方法被用以檢測人結(jié)腸黏膜活檢標(biāo)本、小鼠結(jié)腸組織、YAMC細胞或小鼠血漿內(nèi)目的基因的表達水平。結(jié)果SIRT6在小鼠結(jié)腸中有較高水平的表達,且通過免疫熒光染色發(fā)現(xiàn)SIRT6主要定位于近隱窩基底側(cè)的腸道上皮細胞胞核內(nèi)。連續(xù)7日DSS誘導(dǎo)實驗性結(jié)腸炎的發(fā)生發(fā)展過程伴隨著結(jié)腸內(nèi)SIRT6蛋白表達的顯著下調(diào)。SIRT6 mRNA含量在UC患者腸黏膜活檢組織中顯著減少。腸上皮細胞特異性SIRT6的敲除不影響小鼠的生存生長和腸道發(fā)育,但是顯著增加了小鼠對DSS誘導(dǎo)實驗性結(jié)腸炎的易感性。體外實驗中,我們發(fā)現(xiàn)IFN-y和H202刺激能直接抑制YAMC細胞內(nèi)SIRT6蛋白的表達,且這種抑制能力是劑量及時間依賴性的。SIRT6的敲低能夠明顯降低YAMC對多種損傷及致死性刺激的抵抗能力,而SIRT6的過表達能夠顯著扭轉(zhuǎn)這種現(xiàn)象。通過RNA-seq我們發(fā)現(xiàn)R-spondin-1 (Rspo1)基因在TNFa的刺激下會因SIRT6的敲低而出現(xiàn)更加明顯的下調(diào)。Rspol是腸道上皮細胞內(nèi)重要的生長因子之一,因此Rspol的下調(diào)可能是SIRT6敲低細胞對損傷刺激易感性增加的原因之一。結(jié)論SIRT6在腸道上皮細胞抵抗炎癥反應(yīng)多種損傷刺激中起到重要的保護作用,是潰瘍性結(jié)腸炎治療研究的潛在靶點之一。
【關(guān)鍵詞】：SIRT6 潰瘍性結(jié)腸炎 腸上皮 Rspol DSS誘導(dǎo)實驗性結(jié)腸炎 腸上皮特異性敲除小鼠模型 過表達 小干擾RNA RNA深度測序
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R574.62
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 縮略詞表9-10
• 前言10-16
• 第一部分 SIRT6在腸道炎癥中的變化與作用研究16-64
• 第一節(jié) SIRT6在小鼠腸道內(nèi)表達定位及在DSS誘導(dǎo)結(jié)腸炎小鼠模型和潰瘍性結(jié)腸炎患者腸道組織中表達變化的研究16-40
• 引言16-17
• 實驗材料17-20
• 實驗方法20-27
• 實驗結(jié)果27-34
• 討論34-38
• 結(jié)論38-40
• 第二節(jié) 小鼠腸道上皮細胞內(nèi)SIRT6在DSS誘導(dǎo)結(jié)腸炎中作用的研究40-64
• 引言40-41
• 實驗材料41-42
• 實驗方法42-50
• 實驗結(jié)果50-61
• 討論61-63
• 結(jié)論63-64
• 第二部分 結(jié)腸上皮細胞內(nèi)SIRT6作用及機制的研究64-128
• 第一節(jié) SIRT6在結(jié)腸上皮細胞內(nèi)功能的研究64-102
• 引言64-65
• 實驗材料65-70
• 實驗方法70-85
• 實驗結(jié)果85-95
• 討論95-100
• 結(jié)論100-102
• 第二節(jié) SIRT6對腸道上皮細胞保護作用的機制初探102-128
• 引言102-103
• 實驗材料103-104
• 實驗方法104-106
• 實驗結(jié)果106-111
• 討論111-114
• 結(jié)論114-128
• 全文總結(jié)128-130
• 缺陷與不足130-132
• 參考文獻132-142
• 綜述142-152
• 參考文獻147-152
• 致謝152-15

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 Ping Li;Mei-Lan Liang;Ying Zhu;Yao-Yao Gong;Yun Wang;Ding Heng;Lin Lin;;Resveratrol inhibits collagen Ⅰ synthesis by suppressing IGF-1R activation in intestinal fibroblasts[J];World Journal of Gastroenterology;2014年16期

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本文編號：834815