本文關鍵詞：天然產物EGCG對TP致免疫性肝損傷的保護作用及其機制研究

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【摘要】：目的表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)是一種從綠茶中分離得到的兒茶素類單體,具有抗炎和抗氧化等作用,可有效治療或緩解肝損傷,本課題擬用雷公藤甲素(TP)建立小鼠免疫性肝損傷模型,并以此探討EGCG對TP誘導的小鼠免疫性肝損傷的保護性作用和機制。方法1.TP致小鼠免疫性肝損傷模型的構建及鑒定。將20只雌性C57BL/6小鼠(體重18-20g)隨機分為兩組,分別設為正常組和TP模型組。TP模型組的小鼠灌胃給予500μg/kg的TP,正常組同時給予等量的生理鹽水,22h后分別取血,處死,取肝儲存?zhèn)溆�。兩組小鼠分別采用賴氏法檢測血清谷丙轉氨酶(ALT)水平;并以HE染色法對各組小鼠肝臟組織形態(tài)學進行對比觀測,再通過ELISA方法檢測肝臟白細胞介素(IL)-17和IL-10的表達水平;RT-PCR方法檢測肝臟中維甲酸孤兒核受體(ROR-γt)、叉頭狀轉錄因子(Foxp3)m RNA表達水平;以證實小鼠免疫性肝損傷模型構建成功。2.EGCG對TP誘導的小鼠免疫性肝損傷的保護性作用和機制探討。將40只雌性C57BL/6小鼠(體重18-20g)隨機分為四組,即正常組、EGCG處理組、TP模型組、EGCG治療模型組。EGCG處理組和EGCG治療模型組每天經灌胃給予EGCG,劑量為5 mg/kg,每日兩次,共計給藥10天,正常組和TP模型組同時給予等量的生理鹽水。給藥10天后,TP模型組和EGCG治療模型組的小鼠灌胃給予500μg/kg的TP,正常組和EGCG組同時給予等量的生理鹽水,22h后取血,處死,取肝儲存?zhèn)溆�。采用賴氏法檢測小鼠血清ALT水平;采用分光光度法檢測肝勻漿丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和還原型谷胱甘肽(GSH)的變化水平;并以HE染色法對小鼠肝臟組織形態(tài)學進行對比觀測,再通過ELISA方法檢測肝臟IL-17和IL-10的表達水平;RT-PCR方法檢測肝臟中ROR-γt、Foxp3、核轉錄因子-κB(NF-κB)和髓樣分化因子88(My D88)m RNA表達水平;Western blotting方法檢測肝臟中T細胞免疫球蛋白黏蛋白3(Tim3)和Toll樣受體4(TLR4)的表達情況。結果1.與正常組比較,TP模型組中小鼠血清ALT水平明顯升高(P0.005),肝臟病理切片顯示具有較多肝細胞壞死和中性粒細胞浸潤,提示TP造成了急性肝損傷;同時,肝臟中與Th17變化密切相關的IL-17及ROR-γt m RNA的水平也顯著升高(P0.005);與Treg變化密切相關的IL-10及Foxp3 m RNA的水平明顯下降(P0.005),表明TP誘導Th17/Treg失衡,成功構建了TP致免疫性肝損傷模型。2.EGCG治療模型組小鼠ALT水平與TP模型組相比明顯下降(P0.005);肝臟病理切片顯示其肝細胞炎癥壞死程度與TP模型組相比也明顯減輕,提示了EGCG對TP誘導的急性肝損傷具有保護作用。TP模型組小鼠肝臟中MDA和IL-17的水平明顯高于正常組(P0.005),SOD、GSH和IL-10的水平與正常組相比顯著下降(SOD P0.05;GSH、IL-10 P0.005);而EGCG治療模型組小鼠肝臟MDA、IL-17水平均明顯下調(P0.005),SOD、GSH和IL-10表達水平增高,與TP模型組比較有顯著性差異(SOD,P0.05;GSH、IL-10 P0.005)。TP模型組小鼠肝臟中ROR-γt、NF-κB及My D88 m RNA的水平明顯高于正常組(P0.005),而Foxp3 m RNA的水平明顯低于正常組(P0.005);EGCG治療模型組小鼠肝臟ROR-γt、NF-κB及My D88 m RNA的水平均顯著降低(P0.005),而Foxp3 m RNA水平表達上調,與TP模型組比較有顯著性差異(P0.005)。TP模型組小鼠肝臟Tim3蛋白表達水平低于正常組(P0.005),而TLR4蛋白水平高于正常組(P0.005),EGCG治療模型組小鼠Tim3蛋白表達水平顯著升高(P0.05),而TLR4水平明顯降低(P0.05)。其中,氧化指標MDA、SOD、GSH的改變表明EGCG具有抗氧化作用;IL-17、IL-10、ROR-γt、Foxp3的改變提示EGCG糾正了TP誘導的Th17/Treg失衡;Tim3、TLR4、NF-κB、My D88的變化顯示EGCG糾正Th17/Treg失衡的機制。結論1.TP致小鼠免疫性肝損傷模型構建成功。2.EGCG通過其抗氧化作用及對Th17/Treg失衡的調節(jié)作用來保護TP所致的小鼠免疫性肝損傷。3.EGCG的免疫保護機制可能是通過促進Tim3表達上調、抑制TLR4-NF-k B-My D88信號通路而糾正Th17/Treg失衡。
【關鍵詞】：EGCG 雷公藤甲素 肝損傷 抗氧化作用 Th17/Treg失衡
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R575
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照4-6
• 摘要6-10
• ABSTRACT10-15
• 前言15-17
• 第一部分 TP致免疫性肝損傷模型的構建及鑒定17-26
• 1 材料與方法17-22
• 2 實驗結果22-24
• 3 討論24-26
• 第二部分 EGCG對免疫性肝損傷的保護作用及其機制研究26-39
• 1 材料與方法26-33
• 2 實驗結果33-37
• 3 討論37-39
• 參考文獻39-43
• 全文總結43-44
• 文獻綜述 EGCG和TP在肝損傷中的研究進展44-50
• 參考文獻47-50
• 致謝50-51
• 攻讀碩士研究生期間發(fā)表的文章51

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本文編號：815641