本文關鍵詞：固醇調節(jié)元件結合蛋白1c在脂性自噬中的作用及機制探討

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【摘要】：背景和目的:研究證實,固醇調節(jié)元件結合蛋白1c(Sterol regulatory element binding protein 1 c,SREBP-1c)及自噬均參與了非酒精性脂肪性肝病(Nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)的發(fā)生發(fā)展,但具體發(fā)生機制并不十分清楚。本研究的目的在于觀察油酸(Oleic acid,OA),棕櫚酸(Palmitic acid,PA)對大鼠H4IIE細胞SREBP-1c表達水平、自噬水平及凋亡水平的影響,試圖探討SREBP-1c是否通過調節(jié)脂性自噬及脂性凋亡而參與NAFLD的發(fā)生;探討單磷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated prokein kinase,AMPK)是否通過SREBP-1c參與大鼠脂肪肝相關性肝癌及肝癌前病變的形成,從而為NAFLD的防治提供實驗依據(jù)。方法:體外實驗:采用Nile Red染色及甘油三酯(Triglyceride,TG)含量測定方法檢測OA/PA誘導的大鼠肝腫瘤細胞系H4IIE細胞脂質含量;采用透射電鏡、Western blot、Real-time PCR、流式細胞術方法,檢測細胞自噬、細胞凋亡及SREBP-1c的水平;采用胰島素(Insulin,Ins)、雷帕霉素(Rapamycin,Rapa)、過表達及敲減SREBP-1c的方法干預SREBP-1c,檢測OA過載的細胞中脂質含量及細胞自噬的變化;采用p53特異性抑制劑Pftα抑制p53表達,檢測干預SREBP-1c前后p53-Bax信號通路的變化及細胞凋亡率的變化。體內實驗:采用HE染色、Western blot和Real-time PCR方法觀察高脂飲食誘導的大鼠NAFLD肝組織病理學變化、SREBP-1c及自噬流的改變。利用腹腔注射低劑量二乙基亞硝胺(diethylnitrosamine,DEN)合并高脂飲食誘導的大鼠肝癌前病變模型,觀察谷胱甘肽S轉移酶(glutathione S-transferase-π,GST-π)、SREBP-1c、脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)、乙酰輔酶A羧化酶((acetyl-Co A carboxylase,ACC)、硬脂酰輔酶A去飽和酶1(stearoyl-co A desaturase 1,SCD1)及AMPK、p-AMPK的表達變化。結果:1.OA過載的H4IIE細胞自噬水平增加,自噬功能增強,伴有SREBP-1c下降;2.胰島素上調OA誘導的H4IIE細胞SREBP-1c蛋白及m RNA水平,增加細胞脂質含量,降低細胞自噬水平及自噬功能;雷帕霉素下調OA誘導的H4IIE細胞SREBP-1c蛋白及m RNA水平,降低細胞脂質含量,提高細胞自噬水平及自噬功能;3.過表達SREBP-1c使OA誘導的H4IIE細胞脂質含量增加,自噬水平及自噬功能下降;轉染SREBP-1c-si RNA使OA誘導的H4IIE細胞脂質含量降低,自噬水平及自噬功能升高;4.高濃度OA引起H4IIE細胞脂性凋亡及自噬性凋亡,p53、Bax、caspase3蛋白水平升高,p53抑制劑Pftα可抑制OA誘導的脂性凋亡,提示OA引起的H4IIE細胞脂性凋亡是p53依賴的;5.過表達SREBP-1c可降低OA誘導的H4IIE細胞凋亡率及其caspase3的蛋白水平,可進一步降低自噬溶酶體抑制劑氯喹(Chloroquine,CQ)導致的細胞凋亡;轉染SREBP-1c-si RNA的實驗結果進一步證實了上述結論,提示SREBP-1c可抑制OA引起的H4IIE細胞脂性凋亡及自噬性凋亡;6.轉染SREBP-1c-si RNA可提高OA誘導的細胞凋亡相關蛋白p53、Bax水平;Pftα可抑制OA誘導的細胞凋亡率及Bax水平;轉染SREBP-1c-si RNA可逆轉Pftα對OA誘導的細胞凋亡的影響,提示SREBP-1c對OA誘導的H4IIE細胞脂性凋亡的抑制部分依賴于p53-Bax通路;7.NAFLD大鼠肝臟SREBP-1c升高;LC3、P62升高,表明自噬功能下降;且SREBP-1c與LC3、P62呈正相關,提示SREBP-1c可能抑制NAFLD大鼠肝臟自噬功能。8.與單純DEN處理組比較,DEN+高脂組大鼠肝細胞脂肪變性、氣球樣變、伴有炎性細胞浸潤及小灶性壞死;GST-π表達水平增高;SREBP-1c、FAS、ACC、SCD1表達水平上升;p-AMPK水平下降。提示SREBP-1c可能參與大鼠脂肪肝相關性肝癌前病變的形成。9.AMPK通過抑制SREBP-1c的表達水平降低PA誘導的H4IIE細胞內脂質合成。結論:1.OA可以誘導H4IIE細胞發(fā)生脂性自噬;SREBP-1c可抑制OA誘導的脂性自噬。2.OA可以誘導H4IIE細胞發(fā)生脂性凋亡;SREBP-1c可抑制OA誘導的脂性凋亡及自噬性凋亡;SREBP-1c對OA誘導的脂性凋亡的抑制作用部分依賴于p53-Bax信號通路。3.NAFLD大鼠肝臟自噬功能下降,SREBP-1c可能通過抑制自噬功能參與大鼠NAFLD發(fā)生。4.AMPK可能通過抑制SREBP-1c的表達水平參與大鼠脂肪肝相關性肝癌前病變的形成。
【關鍵詞】：固醇調節(jié)元件結合蛋白1c 脂性自噬 脂性凋亡 非酒精性脂肪肝病 脂肪肝相關性肝癌/肝癌前病變
【學位授予單位】：首都醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R575
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 前言11-13
• 實驗材料13-22
• 實驗方法22-35
• 實驗結果35-57
• 討論57-62
• 結論62
• 參考文獻62-70
• 綜述70-90
• 參考文獻76-90
• 附錄90-91
• 攻讀學位期間發(fā)表文章情況91-92
• 致謝92-93
• 個人簡歷93

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本文編號：814375