本文關(guān)鍵詞：不同試劑轉(zhuǎn)染RIP140-siRNA至庫(kù)普弗細(xì)胞效率及毒性的比較

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【摘要】：目的:以三種轉(zhuǎn)染試劑將RIP140-siRNA轉(zhuǎn)染至肝臟庫(kù)普弗細(xì)胞,通過(guò)不同的轉(zhuǎn)染效率以及試劑的細(xì)胞毒性和RIP140-siRNA對(duì)庫(kù)普弗細(xì)胞免疫活性之間的比較,探尋庫(kù)普弗細(xì)胞si-RNA的最佳轉(zhuǎn)染方式和條件。方法:本實(shí)驗(yàn)研究采用lipofectamine 2000,羅氏試劑(X-treme GENE siRNA Transfection Reagent)及嘌呤霉素篩選的慢病毒(1.0×108TU/ml)作為轉(zhuǎn)染試劑,熒光倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞轉(zhuǎn)染效果,ELISA檢測(cè)不同試劑轉(zhuǎn)染后庫(kù)普弗細(xì)胞NF-κb,IL-2,IL-10,TNF-α的分泌情況,分析其免疫活性的變化,激光掃描共聚焦顯微鏡分析不同試劑轉(zhuǎn)染后細(xì)胞RIP140的表達(dá),通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)(FCM)分析試劑轉(zhuǎn)染后庫(kù)普弗細(xì)胞的凋亡情況,以CCK-8試劑盒檢測(cè)三種轉(zhuǎn)染試劑對(duì)庫(kù)普弗細(xì)胞增殖的抑制效應(yīng)。對(duì)正常組庫(kù)普弗細(xì)胞及三種試劑轉(zhuǎn)染后細(xì)胞進(jìn)行RT-RCR和Western blot檢測(cè),分析庫(kù)普弗細(xì)胞的RIP1140基因和蛋白質(zhì)表達(dá)情況。結(jié)果:以轉(zhuǎn)染效率而言:慢病毒的轉(zhuǎn)染效率最高,可達(dá)80%以上;羅氏試劑其次;lipofectamine 2000效果最差。在試劑的細(xì)胞毒性方面:流式細(xì)胞術(shù)分析羅氏試劑組細(xì)胞凋亡程度最低,以及CCK-8試劑盒結(jié)果顯示羅氏試劑對(duì)庫(kù)普弗細(xì)胞的毒性最小;慢病毒其次;lipofectamine 2000的細(xì)胞毒性最大。ELISA結(jié)果顯示3種試劑轉(zhuǎn)染庫(kù)普弗細(xì)胞后,慢病毒細(xì)胞組(P0.05)免疫活性變化最大,NF-κb,IL-2,IL-10,TNF-α的分泌在轉(zhuǎn)染高峰后出現(xiàn)不同程度的增多或減少,其他兩組差異不明顯(P0.05)。根據(jù)RT-RCR和Western blot結(jié)果得出慢病毒轉(zhuǎn)染RIP140-siRNA效果最好,庫(kù)普弗細(xì)胞RIP140呈現(xiàn)低表達(dá)狀態(tài),而lipofectamine 2000和羅氏試劑組明顯高于慢病毒組(P0.05)。結(jié)論:在肝臟庫(kù)普弗細(xì)胞的RIP140-siRNA轉(zhuǎn)染層面,慢病毒轉(zhuǎn)染法效果出色,能夠滿(mǎn)足實(shí)驗(yàn)研究的要求,達(dá)到較高的轉(zhuǎn)染效率,并且通過(guò)實(shí)驗(yàn)條件的改進(jìn)有著理想的細(xì)胞毒性。
【關(guān)鍵詞】：肝臟庫(kù)普弗細(xì)胞 轉(zhuǎn)染效率 細(xì)胞毒性 RIP140-si RNA 免疫活性
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R575
【目錄】：

• 英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照4-6
• 中文摘要6-8
• ABSTRACT8-11
• 前言11-12
• 1.材料和方法12-18
• 2.結(jié)果18-25
• 3.討論25-28
• 全文小結(jié)28-29
• 參考文獻(xiàn)29-32
• 文獻(xiàn)綜述32-50
• 參考文獻(xiàn)42-50
• 致謝50-51
• 攻讀碩士學(xué)位期間論文發(fā)表情況51

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