本文關(guān)鍵詞：膈下逐瘀湯干預(yù)內(nèi)皮祖細(xì)胞構(gòu)建肝纖維化微環(huán)境的初步研究

  更多相關(guān)文章： 膈下逐瘀湯 肝纖維化 內(nèi)皮祖細(xì)胞 動物實驗 流式細(xì)胞實驗 集落形成實驗

【摘要】：背景與目的：肝纖維化是慢性肝損傷后細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix, ECM)過量生成和異常堆積所致,幾乎所有的慢性肝病,包括慢性乙型(丙型)病毒肝炎、慢性血吸蟲病、慢性酒精與藥物損傷、自身免疫性肝病等均具有這一病理變化。因此,肝纖維化的研究對治療和緩解肝臟病變的進(jìn)展,具有重要意義。內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelia progenitor cells, EPCs)是內(nèi)皮細(xì)胞(endothelia cells, ECs)的前體,屬于多能干細(xì)胞,它能在損傷信號的誘導(dǎo)下遷移到損傷局部增殖分化為成熟EPs,參與血管新生和修復(fù)。自1997年Asahara等首次利用免疫磁珠細(xì)胞分選法從人外周血中分離純化出EPCs后,EPCs在多個方面發(fā)揮著極其重要的作用,如外周血管疾病、心腦血管疾病、腫瘤微血管的形成、創(chuàng)傷愈合等各個方面,并為各種疾病的治療提供了新的思路。而通過臨床觀察,筆者發(fā)現(xiàn)中藥復(fù)方膈下逐瘀湯對肝纖維化／肝硬化患者的治療有著顯著的效果。因此,本課題將此聯(lián)系在一起,重點(diǎn)研究在膈下逐瘀湯的干預(yù)下,內(nèi)皮祖細(xì)胞參與肝纖維化微環(huán)境構(gòu)建的調(diào)節(jié)作用,以及促進(jìn)肝纖維化逆轉(zhuǎn)的相關(guān)分子機(jī)制,以求將中醫(yī)的臨床治療與西醫(yī)的實驗研究方法結(jié)合在一起,尋求在肝纖維化治療上有新的突破。方法：(1)通過ICR小鼠四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)腹腔注射6周造成肝纖維化模型,膈下逐瘀湯(精簡方)灌胃10周進(jìn)行干預(yù),定期取血和肝臟進(jìn)行肝功能、病理檢測,明確膈下逐瘀湯(精簡方)對肝纖維化的治療效果。 (2)通過C57小鼠四氯化碳腹腔注射6周造成肝纖維化模型,膈下逐瘀湯(精簡方)灌胃8周進(jìn)行干預(yù)。干預(yù)過程中定時處死取血和肝臟,進(jìn)行肝臟病理的檢測和外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞流式細(xì)胞學(xué)檢測,檢測小鼠EPCs從骨髓轉(zhuǎn)運(yùn)至外周血的情況。評估膈下逐瘀湯(精簡方)干預(yù)時內(nèi)皮祖細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)至外周血中的情況。(3)通過C57小鼠四氯化碳腹腔注射6周造成肝纖維化模型,膈下逐瘀湯(精簡方)灌胃8周進(jìn)行干預(yù)。定期取小鼠肝臟組織及外周血,提取外周血EPCs,進(jìn)行集落形成實驗,檢測小鼠EPCs轉(zhuǎn)運(yùn)出來的數(shù)量及活性。評估膈下逐瘀湯(精簡方)刺激轉(zhuǎn)運(yùn)至外周血EPCs的細(xì)胞數(shù)量及活性的意義。結(jié)果： (1)肝功能提示：小鼠在CC14腹腔注射6周時,AST、ALT及TBIL均達(dá)到最高峰,中藥灌胃后小鼠肝功能明顯好轉(zhuǎn),各項指標(biāo)均有下降。(2)肝臟HE染色及Masson染色提示：小鼠肝臟在造模6周匯管區(qū)膠原纖維緩慢聚集相互構(gòu)架,并且逐漸形成了纖維間隔,甚至小葉紊亂,而中藥灌胃后膠原纖維明顯減少,肝臟狀況較前好轉(zhuǎn)。 (3)流式細(xì)胞實驗提示：外周血EPCs在中藥灌胃的過程中,伴隨著時間的進(jìn)行所占血細(xì)胞數(shù)的百分比有一定程度的上升。(4)集落形成實驗提示：在中藥灌胃的過程中,EPCs的外周轉(zhuǎn)運(yùn)有所增加且活性更高。結(jié)論： (1)中藥(膈下逐瘀湯)對肝纖維化有較為明顯的治療作用。(2)中藥(膈下逐瘀湯)在治療肝纖維化的過程中,對外周血EPCs的增多有一定的刺激作用,從而達(dá)到肝纖維化的治療目的。
【關(guān)鍵詞】：膈下逐瘀湯 肝纖維化 內(nèi)皮祖細(xì)胞 動物實驗 流式細(xì)胞實驗 集落形成實驗
【學(xué)位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R575.2
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-10
• 前言10-12
• 第一部分 研究背景12-17
• 一、肝纖維化的中醫(yī)藥治療研究進(jìn)展12-15
• 二、內(nèi)皮祖細(xì)胞在肝纖維化治療中的研究進(jìn)展15-16
• 三、膈下逐瘀湯在肝纖維化治療中的研究進(jìn)展16-17
• 第二部分 實驗研究17-34
• 一、評估中藥膈下逐瘀湯(精簡方)對肝纖維化的治療效果17-23
• 二、流式細(xì)胞實驗評估中藥膈下逐瘀湯(精簡方)對EPCs向外周血液及肝纖維化組織聚集和增殖的時相性影響23-29
• 三、集落形成實驗評估中藥膈下逐瘀湯(精簡方)對EPCs向外周血液及肝纖維化組織聚集和增殖的影響29-34
• 結(jié)論34-37
• 參考文獻(xiàn)37-40
• 攻讀碩士學(xué)位期間取得的學(xué)術(shù)成果40-41
• 致謝41

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